Recolectamos, tiñimos y fotografiamos células de la conjuntiva del margen del párpado interno de sujetos humanos. Al caracterizar la morfología celular y la actividad metabólica, este método puede mejorar nuestra comprensión del ojo seco y el papel que puede desempeñar la fricción entre las superficies oculares en la percepción de las molestias oculares.
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Artículo de método
Citología de Impresión del Área de limpiaparabrisas tapa
En este artículo
Resumen
Resumen
Existen pocos informes sobre la anatomía celular del área del limpiaparapado interno (LW) del párpado interno y solo un informe hace uso de métodos citológicos. En este estudio se describe la optimización de un método de recolección, tinción e imagen de células de la región LW mediante citología de impresión (CI). Las células se recogen de la superficie interna del párpado superior de los sujetos humanos utilizando membranas hidrofílicas de politetrafluoroetileno (PTFE) y se tiñen con tintes citológicos para revelar la presencia de células caliciformes, mucinas, núcleos celulares y varios grados de pre queratinización. Los colorantes inmunocitoquímicos muestran la actividad de la esterasa celular y las membranas celulares comprometidas mediante el uso de un microscopio láser de barrido confocal. Se capturan hasta 100 imágenes digitales microscópicas para cada muestra y se unen en una imagen de alta resolución a gran escala de todo el intervalo del CI. Demostramos una mayor sensibilidad de la CI que la reportada anteriormente, apropiada para identificar morfologías celulares y actividad metabólica en el área de LW. Hasta donde sabemos, esta es la primera vez que se utiliza esta selección de tintes fluorescentes para obtener imágenes de membranas LW IC. Este protocolo será efectivo en estudios futuros para revelar detalles no documentados del área de LW, como la evaluación de las particularidades celulares de los usuarios de lentes de contacto o pacientes con ojo seco o epiteliopatía del limpiador de párpados.
Introducción
El párpado superior humano ejecuta alrededor de 10.000 parpadea cada día 1, con sólo un 1 - 2 mm región conjuntival estrecha opuestos del globo ocular. Debido a su movimiento de limpieza durante el parpadeo, esta porción de la margen del párpado se ha denominado la región "tapa de limpiaparabrisas" 2. Se supone que la fricción se incrementa en esta región durante el parpadeo habitual, debido a la tapa limpia el mundo. Esto puede jugar un papel importante en la comodidad ocular. Los portadores de lentes de contacto, en particular, la experiencia malestar ocular y esta es una de las principales razones para cesar el uso de lentes 3. Cua....
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Protocolo
Ética declaración: Antes de la recolección de células de sujetos humanos, el consentimiento informado y se debe obtener la aprobación ética.
1. Preparar a las manchas
NOTA: Preparar mancha en el día del experimento.
- Añadir 5 l de etidio (o 4 M) y 5 l de calceína AM (o 4 M) a 2,5 ml solución salina tamponada con fosfato (PBS) en 15 ml tubo de centrífuga; mezcla. Envolver en papel de aluminio para protegerlo de la luz y se almacena a temperatura ambiente hasta su uso.
2. Las células Collect
- Retire insertos de cultivo celular de su paquete y la etiqueta de ....
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Resultados
La membrana de cultivo celular abarcado sobre el soporte de plástico es una herramienta conveniente para la recolección de mano de las células epiteliales de la conjuntiva tapa del limpiaparabrisas. Este método elimina la necesidad de instrumentos esterilizados adicionales típicamente usados para preparar y manejar las membranas de IC. La Figura 1 representa el IC de la zona de limpiaparabrisas tapa usando un inserto de cultivo celular. Hemos optimizado dos protocolos .......
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Discusión
La citología de impresión se lleva a cabo normalmente en la conjuntiva bulbar, utilizando membranas de ésteres mixtos de celulosa. Las muestras se cortan a tamaño de las hojas de material a granel, esterilizar, aplicar y retirar de la superficie conjuntival usando fórceps. Utilizando el mismo material de la membrana, un dispositivo de IC pistón controlado fue diseñado recientemente para que coincida con la geometría de la superficie de la conjuntiva bulbar, y mantener una presión constante entre las aplicaciones 13.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen financiación relevante ni conflictos que revelar.
Agradecimientos
Nos gustaría agradecer a nuestro colega el Dr. Jalaiah Varikooty que aportó su visión y experiencia sobre el tema del limpiaparabrisas, que ayudó enormemente en esta investigación.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Azul Alcián, 1% en Ácido Acético al 3% Sigma | B8438-250ML | ||
| Hematoxilina, Branquia 1 | Sigma | GHS116-500ML | |
| tinción de Papanicolaou, OG-6 | Sigma | HT40116-500 ml | |
| tinción de Papanicolaou, EA | Sigma | modificado HT40232-1L | |
| Kit de Viabilidad/Citotoxicidad Vivo/Muerto Life Technologies | L-3224 | contiene homodímero-1 de etidio y colorantes Calceína AM | |
| Alcaína (0,5% clorhidrato de proparacaína) | Inserto | ||
| Millicell, 12 mm, PTFE hidrófilo, 0,4 y nbsp; y micro; m | EMD Millipore | PICM01250 | |
| Platos con fondo de vidrio de 35 mm | MatTek Corporation | P35G-0-20-C |
Referencias
- Barbato, G., et al. Diurnal variation in spontaneous eye-blink rate. Psychiatry Res. 93, 145-151 (2000).
- Korb, D. R., et al. Lid-Wiper Epitheliopathy and Dry-Eye Symptoms in Contact Lens Wearers. Eye & Contact Lens. 28, 211-216 (2002).
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Reimpresiones y permisos
