Infección del tracto urinario en un modelo Animal pequeño: cateterización transuretral de ratones machos y hembras

Resumen

El modelo establecido de cateterización transuretral de ratones permite el estudio de patologías de vejiga, incluyendo infección del tracto urinario, pero puede realizarse solamente en las hembras. Un nuevo modelo de hombre instilación transuretral, presentado aquí, permitirá que la investigación en un área marcada por fuertes diferencias clínicas y epidemiológicas entre los sexos.

Resumen

Infecciones del tracto urinario (ITU) son extremadamente comunes en todo el mundo, incurriendo en gastos asociados de salud y morbilidad significativa. Pequeños modelos animales, que reflejan con precisión la progresión y el establecimiento de la enfermedad, permiten la disección de las interacciones huésped-patógeno y generación de inmunidad a la infección. En ratones, instilación intravesical de uropatógenos Escherichia coli, el agente causal en más del 85% de la comunidad adquirida UTI, recoge muchas de las etapas de la infección observada en los seres humanos. Hasta hace poco, sin embargo, IU podría solamente ser modelada en hembras. Esta limitación ha obstaculizado el estudio de las diferencias relacionadas con el sexo en UTI, así como otras patologías de vejiga, como el cáncer. Aquí, describimos un método para infundir ratones macho que permite la comparación directa entre los animales hembras y machos y proporcionan un protocolo detallado para evaluar el tejido de la vejiga mediante citometría de flujo como un medio para comprender mejor las respuestas del anfitrión a la infección. Juntos, estos enfoques ayudará a la identificación de factores de huésped que contribuyen al sexo sesgos observados en UTI y otras enfermedades asociadas a la vejiga.

Introducción

Infecciones del tracto urinario (ITU) son una de las infecciones más comunes en los países desarrollados¹. Las tasas de infección son similares entre las hembras y los machos entre los recién nacidos y los ancianos². Mujeres premenopáusicas, sin embargo, tienen una mayor incidencia de infección urinaria adquirida en la comunidad, en comparación con los hombres^2,3. Dado que esta enfermedad afecta principalmente a mujeres, investigación fundamental y clínica ha centrado abrumadoramente en IU en las mujeres. Sin embargo, la infección urinaria en los hombres es un re....

Protocolo

Se realizaron experimentos de ratón según aprobación de número de protocolo 2012-0024 el Comité d ' éthique en expérimentation animale Paris Centre et Sud (Comité ético de experimentación animal), en aplicación de la Directiva 2010/63 europeo UE.

1. preparación de los catéteres

1. Preparar una cánula pediátrica de acceso intravenoso para cada grupo de ratones infectados. Utilizando el mecanismo de resorte incorporado, desprenderse de cada cánula de la aguja, según las instrucciones del fabricante. Deseche las agujas, conservando sólo el plástico cánula intravenosa.
2. Esterilizar los catéteres en una campana de flujo laminar p....

Resultados

En el desarrollo de este protocolo, cohortes de mujeres y hombres ratones C57Bl/6 años 6 a 8 semanas carga inculcada y bacterianas evaluadas en vejigas en momentos que van desde 1 hora a 30 días. Los resultados de estos estudios se detallan en otro lugar (Zychlinsky Scharff et al., pendiente). Aquí, presentamos datos representativos de las infecciones de 24 horas. En particular, la carga bacteriana fue equivalente entre ratones machos y hembras en 24 horas post infección (

Discusión

La instilación transuretral de ratones machos ofrece muchas nuevas oportunidades de investigación en la influencia del sexo en la enfermedad de la mucosa vesical, pero también presenta varios desafíos. Primero, una limitación es que la instilación puede inicialmente resultar técnicamente difícil, resultando en inflamación excesiva durante la inserción del catéter. Mejora en la técnica puede lograrse mediante la instilación de ratones muertos con una solución coloreada, como colorante azul de Evans. Para confirmar que la .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
BD Insyte Autoguard Catéteres intravenosos blindados de 24 g, 0,7 mm de diámetro externo, 14 mM de largo	BD Medical	381811 o 381411*	* El número de catálogo depende del país
Asa de inoculación	Greiner Bio-One	731171
LB Caldo Miller	Difco	244620
LB Agar Miller	Difco	244520
Cubetas	Bio-rad	223-9955
jeringas	B Braun	9166017V
Pinzas de pulgar (Adson)	Fine Science Tools	11006-12
tubos de 5 ml, polipropileno	Falcon	352063
Tissue Ruptor sondas desechables	Qiagen	990890
Tubos de tapa abatible de 15 ml	Thermo Scientific	362694
DNAse	Invitrogen	18047019
Liberase TM	Sigma-Aldrich	5401119001	deben ser alícuotas y almacenarse a -20 ° C para evitar la congelación-descongelación repetida
100 µ M MACS SmartStrainers	Miltenyi	130-098-463	compatible con tubos de 15 ml, preferido
100 y micro; Filtros de células M	Falcon	352360	compatible con tubos de 50 ml, si no se dispone de MACS Smart Strainers
Placa de 96 pocillos	Falcon	353077
Fc bloque	BD Pharmingen	553142	anti-CD16/CD32
anticuerpo CD45 anti-ratón	BD Biosciences	561487	muchas opciones diferentes de conjugación fluorescente disponibles
Tubos de 5 ml de poliestireno con tapón de filtro	Falcon
jeringa de insulina	Terumo	BS05M2913
homogeneizador de mano	Qiagen	9001272	TissueCitómetro
flujo	Ruptor BD Biosciences	N/A	Fortessa SORP
Software de citometría de flujo	BD Biosciences	N/A	Diva

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