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Artículo de método

Flexor murino Lesión del tendón y Cirugía de reparación

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DOI:

10.3791/54433

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19 de septiembre de 2016

 , 

En este artículo

Resumen

Los tendones flexores de la mano se lesionan con frecuencia, dando lugar a alteración de la función de la mano. Sin embargo, la respuesta de curación de la cicatriz de tejido no está bien caracterizado. Un modelo murino de la curación del tendón flexor se demuestra aquí. Este modelo se puede mejorar la comprensión global del proceso de curación y evaluar enfoques terapéuticos para mejorar la curación.

Resumen

Tendon conecta el músculo esquelético y el hueso, lo que facilita el movimiento de casi todo el cuerpo. En la mano, tendones flexores (FTS) permiten la flexión de los dedos y la función de la mano en general. Las lesiones en el FTS son comunes, y la curación satisfactoria a menudo se ven mermadas por el exceso de tejido cicatrizal y adherencias entre el tendón y el tejido circundante. Sin embargo, poco se sabe acerca de los componentes moleculares y celulares de la reparación FT. Para ello, un modelo murino de reparación FT que recapitula muchos aspectos de la cicatrización en seres humanos, incluyendo alteración de la amplitud de movimiento y la disminución de las propiedades mecánicas, se ha desarrollado y descrito previamente. A continuación se proporciona una demostración en profundidad de este procedimiento quirúrgico, que implica la transección y la posterior reparación del tendón flexor largo de los dedos (FDL) en la pata trasera murino. Esta técnica se puede utilizar para llevar a cabo el análisis de linaje de diferentes tipos de células, evaluar los efectos de la ganancia o pérdida de genes de función, y para probar la eficacia de las intervenciones farmacológicas en el proceso de curación. Sin embargo, hay dos limitaciones principales para este modelo: i) el tendón FDL en la porción media de la pata trasera murino, donde se producen la transección y reparación, no está rodeado por una vaina sinovial. Por lo tanto, este modelo no tiene en cuenta la contribución potencial de la funda para el proceso de formación de la cicatriz. ii) Para proteger la integridad de la zona de reparación, el FT es liberado en la unión miotendinosa, disminuyendo las fuerzas mecánicas del tendón, probablemente contribuyendo a un aumento de la formación de cicatrices. Aislamiento de células suficientes de tejido de granulación de la FT durante el proceso de curación para el análisis de citometría de flujo ha demostrado ser un desafío; centrifugación citología para concentrar estas células es un método alternativo utilizado, y permite la generación de preparaciones de células en el que puede llevarse a cabo el etiquetado de inmunofluorescencia. Con este método, la cuantificación de células o proteínas de interés durante la curación FT se hace posible.

Introducción

Los tendones flexores de la mano de obra en concierto con los músculos flexores del antebrazo y vainas digitales para permitir la flexión de los dedos y agarrar la función de la mano. Los tendones flexores corren a lo largo de la cara palmar de la mano; esta ubicación relativamente superficial a menudo resulta en lesiones de los tendones flexores durante un traumatismo en la mano. Los tendones se curan a través de una respuesta del tejido de la cicatriz en lugar de la regeneración de tejido del tendón normal de 1. Aunque este tejido cicatricial proporciona continuidad en el tendón, la función se reduce drásticamente con respecto al tendón sano. Materiales ....

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Protocolo

El Comité Universitario de Investigación Animal de la Universidad de Rochester aprobó todos los experimentos con animales. Diez-12 semanas de edad C57BL / 6J se utilizaron.

1. Preparación de los animales para la cirugía del tendón flexor (~ 15 min)

  1. instrumentos quirúrgicos autoclave para esterilizar, usan guantes estériles en todo, y mantienen un campo quirúrgico estéril.
  2. Anestesiar al ratón a través de inyección intraperitoneal (ip) con un volumen de ketamina (80 mg / kg) y xilazina (10 mg / kg) que corresponde al peso corporal. Confirmar profundidad de la sedación a través de la ausencia de reflejo dedo del pie-pell....

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Resultados

El flexor largo de los dedos (FDL) muscular, situado en la pantorrilla, actúa para flexionar los dedos de la pata trasera del ratón a través del tendón flexor (esbozado en azul en la Figura 1A, y se muestra histológicamente en la Figura 2A), que se extiende proximalmente desde el miotendinosa unión y termina en las falanges distales. En este modelo de cicatrización del tendón flexor, el tendón FDL se secciona y se repara en la parte media del pie, proxim.......

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Discusión

El procedimiento quirúrgico para un modelo murino de la transección completa y la reparación del tendón flexor largo de los dedos se presenta en este estudio. Además, se demostró una nueva aplicación de la concentración de las poblaciones de células pequeñas con centrífuga citología, lo que permite el análisis inmunocitoquímico cuantitativa del entorno celular durante la cicatrización del tendón flexor. Este modelo de reparación del tendón flexor demuestra una respuesta de curación reproducible, que se puede utilizar pa.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos

Agradecimientos

Este trabajo fue parcialmente apoyado por la Sociedad Americana de Cirugía de la Mano y el Premio Piloto NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (AEL) y NIAMS / NIH P30AR061307.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Preparación quirúrgica
C57BL/6J ratones Laboratorios Jackson000664
KetaminaHospiraNDC # 0409-2051-05
XilacinaLloyd Inc.NDC# 61311-482-10
Buprenorfinapor Pharmaceutical Inc.NDC# 42023-179-10
Riego con cloruro de sodio al 0,9%HospiraNDC# 0409-6138-03Para la preparación de soluciones de ketamina/xilacina y buprenorfina
Jeringa de 1 mlBD309659
Aguja de 30 GBD305106
Povidona Solución de yodoAplicare82-226
70% etanol
Ungüento oftálmico veterinario PuralubeDechra Productos VeterinariosNDC# 17033-211-38
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Herramientas quirúrgicas
Balanza portátil 200 gOhausSP202
Tijeras de resorteFine Science Tools15124-12
Pinzas Dumont #5Fine Science Tools11251-30
PortaagujasFine Science Tools91201-13
Micro tijeras de resorteFine Science Tools15003-08
Micro portaagujasFine Science Tools12061-02
Suturas de nailon 5-0Ethicon668G
8-0 suturas de nailon para microcirugíaEthicon2808G
Lab-Line calentador de portaobjetosBarnstead International26025
NameCompanyNúmero de catálogoComments
Cytospin fuerte
Tipo I, Life Technologies liofilizado 1700-017
Albúmina sérica bovinaTecnologías de señalización celular9998S
1x PBSThermo Fisher10010-023
embudos de citologíaFisher HealthCare10-354
Portaobjetos de microscopio HistoBond+VWR16005-110
Centrífuga Cytospin 2ShandonSH-CYTO2
Name>CompanyNúmero de catálogoComentarios
Immunocytochemistry
Bandeja de tinción deslizante con tapa negraIHC WorldM920-2
Click-iT Plus EdU Imaging KitTechnologies C10639incluye EdU y   Hoeschst 33342
Immedge bolígrafo barrera hidrofóbicoVector LaboratoriesH-4000
ProLong Diamond medio de montajeThermo FisherP36970
Cubreobjetos de vidrio 24 x 50 mm #1.5
Esmalte
Life de uñas transparente

Referencias

  1. Lin, T. Biomechanics of tendon inury and repair. J Biomech. 37, 865-877 (2004).
  2. Strickland, J. W. Development of flexor tendon surgery: twenty-five years of progress. J Hand Surg [Am]. 25, 214-235 (2000).
  3. Bunnell, S.

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