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Artículo de método

El asa arteriovenosa (AV) en un modelo de pequeños animales para estudiar la angiogénesis e Ingeniería tejido vascularizado

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DOI:

10.3791/54676

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2 de noviembre de 2016

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En este artículo

Resumen

Se describe un enfoque microquirúrgico para la generación de un bucle arteriovenosa (AV) como un modelo para el análisis de la vascularización in vivo en un entorno aislado y bien caracterizado. Este modelo no sólo es útil para la investigación de la angiogénesis, pero también es adecuado de manera óptima para la ingeniería vascularizado axialmente y tejidos trasplantables.

Resumen

Una red funcional de vasos sanguíneos es un requisito previo para la supervivencia y el crecimiento de casi todos los tejidos y órganos del cuerpo humano. Además, en situaciones patológicas como el cáncer, la vascularización juega un papel principal en la progresión de la enfermedad. En consecuencia, existe una gran necesidad de un modelo in vivo estandarizado y bien caracterizado para dilucidar los mecanismos de la neovascularización y desarrollar diferentes enfoques de vascularización para la ingeniería de tejidos y la medicina regenerativa.

Describimos un enfoque microquirúrgico para un modelo animal pequeño para la inducción de un eje vascular que consiste en una vena y una arteria que se anastomosan a un asa arteriovenosa (AV). El asa AV se transfiere a una cámara de implantación cerrada para crear un microambiente aislado in vivo, que está conectado al organismo vivo solo por medio del eje vascular. Mediante el uso de imágenes 3D (resonancia magnética, microtomografía computarizada) e inmunohistología, la vasculatura en crecimiento se puede visualizar con el tiempo. Mediante la implantación de diferentes células, factores de crecimiento y matrices, su función en la formación de redes de vasos sanguíneos se puede analizar sin ninguna influencia perturbadora del entorno en un entorno bien controlable.

Además de los estudios de angiogénesis y antiangiogénesis, el modelo de bucle AV también es perfectamente adecuado para la ingeniería de tejidos vascularizados. Después de un cierto tiempo de prevascularización, los tejidos generados pueden trasplantarse al sitio del defecto y conectarse microquirúrgicamente a los vasos locales, asegurando así el suministro inmediato de sangre y la integración del tejido diseñado. Al variar las matrices, las células, los factores de crecimiento y la arquitectura de la cámara, es posible generar varios tejidos, que luego se pueden adaptar a las necesidades individuales del paciente.

Introducción

La mayoría de los tejidos y órganos del cuerpo humano dependen de una red de vasos sanguíneos funcionales que suministra nutrientes, intercambia los gases y elimina los productos de desecho. Mal funcionamiento de este sistema debido a los problemas vasculares locales o sistémicos puede conducir a una multitud de enfermedades graves. Por otra parte, en las áreas de investigación, como la ingeniería de tejidos o la medicina regenerativa, una red de vasos sanguíneos funcionales dentro de los tejidos generados artificialmente u órganos trasplantados es indispensable para el éxito de la aplicación clínica.

Durante décadas los investigadores ha....

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Protocolo

El Comité de Cuidado de Animales de la Universidad Friedrich-Alexander de Erlangen-Nürnberg (FAU) y el Gobierno de Franconia Media, Alemania, aprobó todos los experimentos. Para los experimentos, las ratas Lewis macho con un peso corporal de 300 - 350 g se utilizaron.

1. El modelo de bucle arteriovenosa en la rata

  1. Procedimiento de implantación (Figura 2)
    1. Para la anestesia utilizar una caja de plástico especial que está conectado a través del tubo al vaporizador de isoflurano y cerrado por una tapa. Encienda el suministro de gas y caudalímetro entre 0,8 - 1,5 l / min.
    2. Coloque la rata en la caja de plástic....

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Resultados

Ingeniería de tejidos
Para los propósitos de ingeniería de tejido óseo, un número de diferentes sustitutos de hueso se implanta en el intestino de rata de animales modelo de bucle AV 27,28,33,34. Vascularización perfectamente pudo demostrarse por 3D tomografía micro-computarizada (micro-CT) (Figura 3A). La vascularización de una matriz procesada bovina hueso esponjoso (PBCB) fue significativamente mayor en el grupo de bucle en comparaci.......

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Discusión

Desde hace más de una década, se ha utilizado con éxito el asa arteriovenosa (AV) para propósitos de ingeniería tisular y la angiogénesis estudiar in vivo en el modelo animal pequeño. Hemos podido demostrar que este modelo de microcirugía se adapta muy bien para la ingeniería de tejidos diferentes y que también se puede utilizar para los estudios de la angiogénesis o antiangiogénico.

Importancia de la Técnica en Materia de Métodos Alternativos / Existentes
Te.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Nos gustaría agradecer a las siguientes instituciones por apoyar nuestra investigación bucle AV: Staedtler Stiftung, el Dr. Fritz Erler Fonds, Else Kröner Fesenius Stiftung, Baxter Healthcare GmbH, DFG, IZKF / ELAN / EFI / Oficina de Género y Diversidad, la Forschungsstiftung Medizin , Friedrich-Alexander Universidad de Erlangen-Nürnberg (FAU), Fundación AO, Manfred Roth Stiftung, Xue Hong, Fundación Hans Georg Geis, Deutscher Akademischer Austauschdienst (DAAD), Alemania, y el Ministerio de Educación Superior e Investigación Científica, Irak. Nos gustaría dar las gracias a Stefan Fleischer, Marina Milde, Katrin Kohn y Ilse Arnold-Herberth por su excelente apoyo técn....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cloruro de sodio al 0,9%Berlin-Chemie AG34592508
11-0 Ethilon / poliamida 6/6EthiconEH7438G
4-0 Vicryl / poligalactina 910EthiconV392H
6-0 Prolene / polipropilenoEthicon8695H
spray de aluminioPharma Partner Vertriebs-GmbH1020
antisépticos BODE Chemie GmbH 
Catéter B Braun Meslungen AG4251612-02
agente de contrasteFlowtech  MV-122
embutramida, yoduro de mebezonio, solución inyectable de clorhidrato de tetracaína Intervet International GmbH
encre de chine tinta china intensaLefranc & Bourgeois
EnrofloxacinaBayer AG
ungüento oftálmicoBayer AG
Formalina 4%Carl Roth GmbH & Co. KGP087.4
HeparinaRatiopharm GmbH
isoflurano Abbott Laboratories6055482
rata Lewis, machoCharles River Laboratories
Metamizol-Natrium Ratiopharm GmbH
papaverine / Paveron NLinden Arzneimittel-Vertrieb-GmbH
tramadol / TramalGrü nenthal GmbH

Referencias

  1. Folkman, J., Haudenschild, C. Angiogenesis in vitro. Nature. 288 (5791), 551-556 (1980).
  2. DeCicco-Skinner, K. L., et al. Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis. J Vis Exp. (91), e51312(2014).
  3. Puddu, A., Sanguineti, R., Traverso, C. E., Viviani, G. L., Nicolo, ....

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Reimpresiones y permisos

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