A través de la inoculación con perlas, la técnica descrita permite la estimulación de la respuesta de melanización del mosquito en el sistema circulante de la hemolinfa. La cantidad de melanina que cubre las perlas se puede medir después de la disección como una medida de la respuesta inmunitaria.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
En este artículo
Resumen
Resumen
La estimulación de la respuesta inmune es una herramienta común en estudios de invertebrados para examinar la eficacia y los mecanismos de la inmunidad. Esta estimulación se basa en la inyección de partículas no patógenos en los insectos, como las partículas serán detectados por el sistema inmune y inducirán la producción de efectores inmunes. Nos centramos aquí en la estimulación de la respuesta melanización en el mosquito Anopheles gambiae. Los resultados melanization respuesta en la encapsulación de partículas extrañas y parásitos con una capa oscura de melanina. Para estimular esta respuesta, los mosquitos se inoculan con los granos en la cavidad torácica utilizando tubos de vidrio microcapilar. Entonces, después de 24 horas, los mosquitos se disecan para recuperar las perlas. El grado de melanización de la perla se mide usando software de análisis de imágenes. Perlas no tienen los efectos patógenos de los parásitos, o su capacidad para evadir o suprimen la respuesta inmune. Estas inyecciones son una manera de Measure eficacia inmunológica y el impacto de los estímulos inmunes en otros rasgos de historia de vida, tales como la fecundidad o la longevidad. No es exactamente lo mismo que estudiar directamente las interacciones huésped-parásito, pero es una interesante herramienta para estudiar la inmunidad y su ecología evolutiva.
Introducción
Los insectos se basan en las respuestas inmunitarias para protegerse contra los parásitos y patógenos 1 - 3 que violan a través de su cutícula o el epitelio del intestino medio 4. En los mosquitos, estas respuestas son eficaces contra las bacterias, virus 5 6 7 filaria, nematodos, parásitos de la malaria y 1,8,9. En los mosquitos, una respuesta inmune clave es la encapsulación de partículas extrañas con melanina 10 - 12. Esta encapsulación puede ocurrir en el intestino medio o en la hemolinfa sistema de circulación de 10 ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
1. Solución salina para inyección y disección
- Preparar la solución salina mediante la adición de NaCl, KCl, CaCl 2 y a agua destilada para obtener NaCl 1,3 mM, KCl 0,5 mM, y CaCl 0,2 mM 2 a pH = 6,8.
- Añadir 1 ml de solución de verde 0,1% de metilo a 99 mililitros de la solución salina para colorear las perlas transparentes. Esta es la "solución de inyección" de 0,001% verde de metilo.
- A continuación, añadir 5 ml de solución de verde 0,1% de metilo a 45 ml de la solución salina. Esta "solución disección" 0,01% verde de metilo es de 10 veces más concentrado en verde de metilo para facilitar la coloración de las perla....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Los mosquitos no todos hicieron melanize las perlas de la misma manera, ya que algunas cuentas fueron cubiertas con menos melanina que otros (Figura 1). De hecho, algunas perlas permanecieron azul debido a la falta de melanización, mientras que otros eran completamente oscuro (Figura 1). El valor melanización fue estandarizado por interpolación lineal a un valor entre 0 (lo que correspondía a una perla azul y unmelanized) y 100 (que corresponde a u.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Esta técnica de inyección es útil para estimular y estudiar la melanization respuesta en los mosquitos. Por ejemplo, aquí se estudió el efecto de la carga de estímulos inmune.
El paso crítico en este procedimiento es para inocular apropiadamente el mosquito. Cualquier daño excesivo a los músculos de vuelo o al propio mosquito puede prevenir el mosquito de la alimentación o puede acabar con él antes de la disección. Un segundo paso clave es mantener a los mosquitos en el hielo el tiempo sufic.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Esta investigación fue posible gracias a la financiación de la Universidad de Neuchâtel. Nos gustaría agradecer a todos los estudiantes que ayudaron a mejorar esta técnica, especialmente a nuestro colega Kevin Thievent. También nos gustaría agradecer a los miembros del Laboratorio Thomas por poner a disposición su laboratorio. Nos gustaría agradecer a Janet Teeple por su ayuda con la cría de mosquitos. También nos gustaría agradecer a Loyal Hall en el laboratorio del Pr. Tom Baker por su ayuda en la preparación de los tubos de vidrio microcapilar.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubos de vidrio microcapilar GB120TF-10 | science-products.com | GB120TF-10 | http://www.science-products.com/Products/CatalogG/Glass/Glass.html |
| Microcaps Bulbo de pipeta capilar | Drumond | 1-000-9000 | |
| cargado negativamente Sephadex CM C-25 perlas | Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemania | C25120 SIGMA | necesita pocos para comenzar |
| Verde | de metiloSigma-Aldrich | 323829 ALDRICH | necesitan pocos para iniciar |
| Software ImageJ | opensource | versión 1.47f7 o posterior |
Referencias
- Dong, Y., Aguilar, R., Xi, Z., Warr, E., Mongin, E., Dimopoulos, G. Anopheles gambiae immune responses to human and rodent Plasmodium parasite species. PLoS pathog. 2 (6), e52(2006).
- Sadd, B. M., Schmid-Hempel, P. PERSPECTIVE: Principles of ecological immunology. Evolution....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
