El ensayo CApillary FEeder (CAFE) es un método sencillo, económico y altamente fiable para investigar los mecanismos que subyacen a la ingesta de alimentos. Utilizado con el organismo modelo genético altamente versátil Drosophila melanogaster, proporciona un poderoso medio para obtener nuevos conocimientos sobre los mecanismos reguladores de la ingesta de alimentos.
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Artículo de método
El alimentador de ensayo capilar para analizar el consumo de alimentos en
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Resumen
Resumen
Para la mayoría de los animales, la alimentación es un comportamiento esencial para asegurar la supervivencia, e influye en el desarrollo, la locomoción, la salud y la reproducción. Por lo tanto, la ingestión del tipo y la cantidad adecuados de alimentos tiene una gran influencia en la calidad de vida. La investigación sobre el comportamiento alimentario se centra en los procesos subyacentes que garantizan la alimentación real y desentraña el papel de los factores que regulan la homeostasis energética interna y las bases neuronales de la toma de decisiones. El organismo modelo Drosophila melanogaster, con su gran variedad de herramientas genéticamente trazables para el etiquetado y la manipulación de neuronas individuales, permite el mapeo de redes neuronales y la identificación de cascadas de señalización molecular involucradas en la regulación de la ingesta de alimentos. Este informe muestra el ensayo CApillary FEeder (CAFE) y muestra cómo medir la ingesta de alimentos en un grupo de moscas durante períodos de tiempo que van desde horas hasta días. Este ensayo fácil de usar consiste en capilares de vidrio llenos de alimento líquido al que las moscas pueden acceder y alimentarse libremente. El consumo de alimentos en el ensayo se determina con precisión utilizando herramientas de medición sencillas. En este trabajo se describe paso a paso el método desde la configuración hasta la ejecución exitosa del ensayo CAFE, y se proporcionan ejemplos prácticos para analizar la ingesta de alimento de un grupo de moscas en condiciones controladas. Se guía al lector a través de las posibles limitaciones del ensayo, y se evalúan las ventajas y desventajas del método en comparación con otros ensayos de alimentación en D. melanogaster.
Introducción
Comer es esencial; Sin embargo, la desregulación de la ingesta de alimentos que resulta en trastornos de la alimentación como la bulimia, la anorexia o la tendencia general a comer en exceso supone un coste para la sociedad y los individuos 1, 2, 3. El objetivo de la presente investigación es descubrir los mecanismos de regulación de la ingesta de alimentos y para proporcionar una estrategia para eludir la formación trastorno. Numerosos estudios utilizando organismos modelo de mamíferos han proporcionado nuevos conocimientos de los circuitos y el papel de los sistemas de señ....
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Protocolo
1. El Ensayo CAFE
NOTA: El ensayo consta de tres componentes: un vial experimental, una tapa específica y capilares micro. Una caja de plástico con tapa se utiliza para el transporte de los viales preparados y para controlar la humedad de manera más eficiente.
- Utilice una Drosophila melanogaster vial plástico de cultivo (opcional altura 8 cm, 3,3 cm de diámetro) como un tubo para el ensayo.
- Sellar el vial con una tapa de plexiglás fabricado que contiene una junta tórica (Figuras 1A, 1B). Cargar vuela tocando o con un soplete través de la abertura de la tapa central (0,9 cm de diámetro), que t....
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Resultados
Las moscas del genotipo w 1118 se utilizan para demostrar cómo se realiza el ensayo. Los w 1118 mutantes se utilizan comúnmente para generar líneas transgénicas y para controlar los antecedentes genéticos de transgenes marcado con el gen blanco. Normalmente, para los experimentos de comportamiento, todas las líneas transgénicas se retrocruzaron durante cinco generaciones a la misma w 1118 de valores, que se utiliza como.......
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Discusión
El informe describe el ensayo de café en una manera paso a paso, centrándose en la configuración técnica y su desempeño exitoso en el laboratorio. Debido a su simplicidad, este ensayo también se podría utilizar educativamente como un experimento de la escuela. Los ejemplos muestran que el ensayo permite la investigación de la detección de alimentos, la preferencia y el consumo en Drosophila melanogaster durante períodos de tiempo cortos y más largos (horas o días). El ensayo CAFE se ha utilizado ampliamente en .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a los miembros pasados y presentes del laboratorio Scholz por su discusión y a Helga Döring por su excelente soporte técnico. Agradecemos especialmente a los miembros del taller Biocenter de la Universidad de Colonia por su apoyo y creatividad. El trabajo cuenta con el apoyo de SFB 1340, SysMedAlc y DAAD-Siemens.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Viales (cría) | Greiner Bio-One | 960177 | |
| www.greinerbioone.com Vials (ensayo CAFE) | Greiner Bio-One | 217101 | www.greinerbioone.com |
| Taller de ensayo Lid-CAFE | – | – | |
| Caja de plástico, pared baja | Plastime | 353 | |
| www.plastime.it Tapa para la caja de plástico | Taller | – | – |
| Capilares | BLAUBRAND | REF 7087 07 www.brand.de | |
| Puntas de pipeta | Greiner Bio-One | 771290 | www.greinerbioone.com |
| Círculos de papel de filtro | Whatman | 10 311 804 | www.sigmaaldrich.com |
| D(+)-Sacarosa | AppliChem | 57-50-1 | www.applichem.com |
| Etanol absoluto | VWR Chemicals | 20.821.330 | www.vwr.com |
| Colorante alimentario (rojo, E124) | Backfun | 10027 | www.backfun.de |
| Colorante alimentario (azul, E133) | Backfun | 10030 | www.backfun.de |
| Solución de jabón (CVK 8) | CVH | 103220 | www.cvh.de |
| Calibrador digital | GARANT | 412.616 | www.hoffmann-group.com |
| Viales (cría) | Altura 9,8 cm, diámetro 4,8 cm | ||
| Viales (ensayo CAFE) | Altura 8 cm, diámetro 3,3 cm | ||
| Ensayo | Producido en taller universitario, dibujo técnico suministrado Por favor, haga clic aquí para descargar este archivo. | ||
| Caja de plástico, pared | Una incrustación de rejilla de plástico fue hecha a medida para 8 x 10 posiciones de viales | ||
| Tapa para la caja | Dimensiones (37 x 29 x 18 cm) | ||
| Capilares | norma DIN ISO 7550, Guía IVD 98/79 EG, extremos pulidos | ||
| Puntas | Las pipetas para el círculo exterior se cortan de acuerdo con la tapa | ||
| Los círculos de papel de filtro de | 45 mm de diámetro funcionan bien si se pliegan para los viales utilizados | ||
| D(+)-Sacarosa | No es dañino | ||
| Absoluto | Líquido y vapor altamente inflamables | ||
| Colorante alimentario (rojo, E124) | No indicado | ||
| Colorante alimentario (azul, E133) | No indicado | ||
| Solución jabonosa (CVK 8) | Jabón de olor neutro | ||
| Calibrador | |||
| Alimento | (para 20 L) | ||
| Agar | 160 g | ||
| Levadura | 299,33 g | ||
| Harina de | 1.200 g | ||
| Melaza | 1,6 L | ||
| Ácido | 57,3 mL | ||
| Nipagin 30% | 160 mL |
Referencias
- Krauth, C., Buser, J., Vogel, K. How high are the costs of eating disorders - anorexia nervosa and bulimia nervosa - for German society. Eur. J. Health Econ. 3 (4), 244-250 (2002).
- Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical costs of obesity and ....
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Reimpresiones y permisos
