Analizando Synaptic Modulación de<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Los fotorreceptores después de la exposición prolongada a la luz

Atsushi Sugie; Christoph Möhl; Satoko Hakeda-Suzuki; Hideaki Matsui; Takashi Suzuki; Gaia Tavosanis

doi:10.3791/55176

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Artículo de método

Analizando Synaptic Modulación de

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DOI:

10.3791/55176

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10 de febrero de 2017

Atsushi Sugie¹^,²^,⁵ , Christoph Möhl³ , Satoko Hakeda-Suzuki⁴ , Hideaki Matsui¹^,² , Takashi Suzuki^*⁴ , Gaia Tavosanis^*⁵

¹Department of Neuroscience of Disease, Center for Transdisciplinary Research, Niigata University, ²Brain Research Institute, Niigata University, ³Image and Data Analysis Facility, German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE), ⁴Graduate School of Life Science and Technology, Tokyo Institute of Technology (Titech), ⁵Dendrite Differentiation, German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE)

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí mostramos cómo cuantificar el número y la distribución espacial de las zonas activas sinápticas en los fotorreceptores de Drosophila melanogaster, resaltada con un marcador molecular codificada genéticamente, y su modulación después de la exposición prolongada a la luz.

Resumen

El sistema nervioso tiene la notable capacidad de adaptación y respuesta a diversos estímulos. Este ajuste neuronal se logra en gran medida a través de la plasticidad sináptica en el plano. La zona activa (AZ) es la región en la membrana presináptica que media la liberación de neurotransmisores y está compuesto de una densa colección de proteínas de andamiaje. AZS de Drosophila melanogaster (Drosophila) fotorreceptores se someten a la remodelación molecular después de la exposición prolongada a la luz del ambiente natural. Así, el nivel de actividad neuronal puede reorganizar la composición molecular de la AZ y contribuir a la regulación de la salida funcional.

A partir de la exposición a la luz preparado mencionado arriba a la inmunohistoquímica, detalles de este protocolo la forma de cuantificar el número, la distribución espacial y el nivel de deslocalización de las moléculas sinápticas en AZS en fotorreceptores de Drosophila. El uso de análisis de imágenes software, se identificaron grupos de la componente de GFP fusionado AZ Bruchpilot para cada fotorreceptor R8 (R8) terminal del axón. Bruchpilot manchas detectadas fueron asignados automáticamente a los axones individuales R8. Para el cálculo de la distribución de frecuencia puntual a lo largo del axón, se implementó un software personalizado plugin. punto de inicio de cada axón y punto final se definieron de forma manual y la posición de cada punto Bruchpilot se proyectan en la línea de unión entre el inicio y el punto final. Además del número de grupos Bruchpilot, también cuantificó el nivel de deslocalización de Bruchpilot-GFP dentro de los grupos. Estas mediciones reflejan en detalle la dinámica sinápticas espacialmente resueltas en una sola neurona en condiciones ambientales diferentes a los estímulos.

Introducción

La modulación de la función sináptica contribuye a la notable capacidad del sistema nervioso para responder con precisión o adaptarse al cambio de los estímulos ambientales. Ajuste de la probabilidad de liberación de la vesícula presináptica es una forma de controlar la fuerza sináptica ^1. La liberación de vesículas sinápticas se lleva a cabo en la Zona Activa (AZ), una región especializada de la membrana presináptica ^2. El AZ se caracteriza por un casete de proteínas específicas ^{^3,} ^4. La mayoría de las proteínas que contribuyen a la asamblea AZ están muy ....