Método de muestreo hisopo para la Detección de norovirus humano en superficies

Resumen

Se desarrolló y evaluó una metodología de muestreo basada en macroespuma para la detección y cuantificación de norovirus en superficies duras ambientales.

Resumen

norovirus humanos son una causa principal de la epidemia y la gastroenteritis esporádica en todo el mundo. Debido a que la mayoría de las infecciones se propagan ya sea directamente a través de la ruta de persona a persona o indirectamente a través de las superficies ambientales o alimentos, fómites contaminados y superficies inanimadas son vehículos importantes para la propagación del virus durante los brotes de norovirus.

Desarrollamos y evaluamos un protocolo utilizando hisopos macroespuma para la detección y tipificación de los norovirus humanos de las superficies duras. En comparación con hisopos con punta de fibra o toallitas antiestáticas, hisopos macroespuma permiten la recuperación de virus (rango de 1,2 a 33,6%) de las superficies de asiento de inodoro de hasta 700 cm ^2. El protocolo incluye los pasos para la extracción del virus de los hisopos y una mayor concentración del ARN viral usando columnas de centrifugación. En total, 127 (58,5%) de 217 muestras de frotis que habían sido recogidos de las superficies en los cruceros y centros de atención a largo plazo donde había estado la gastroenteritis por norovirusinformaron dado positivo por norovirus GII por RT-qPCR. De estos 29 (22,8%) podría ser genotipo con éxito. En conclusión, la detección de norovirus en superficies ambientales utilizando el protocolo que hemos desarrollado puede ayudar a determinar el nivel de contaminación del medio ambiente durante los brotes, así como la detección de virus cuando las muestras clínicas no están disponibles; también puede facilitar el seguimiento de la eficacia de las estrategias de remediación.

Introducción

Norovirus humanos son una causa principal de la epidemia y la gastroenteritis aguda esporádica en todo el mundo ^{1, 2, 3.} El virus es muy contagioso y la transmisión ocurre a través de la interacción persona directa a persona o indirectamente por contacto con alimentos contaminados, agua o superficies ambientales. Los norovirus se pueden desprender durante períodos prolongados y prolongan la supervivencia del virus en las superficies ambientales se ha documentado ^{1, 2, 3.} Duran....

Protocolo

1. torunda de muestreo en el campo

1. Use un par de guantes limpios.
2. Medir el tamaño de la zona de muestreo sin tocar la superficie usando una cinta de medición o una regla. Tratar de estimar el área con la mayor precisión posible y llenar un formulario de informe (Cuadro 1).
3. Compruebe el kit de raspado de posibles fugas y bolsas de transporte de muestras de etiquetas y kits de hisopos.
4. Mueva el hisopo por el área de muestreo como sigue: un golpe en la dirección horizontal, de un solo golpe en la dirección vertical, y un golpe en una dirección diagonal. No limpie un área superficial mayor que 700 cm ^2.....

Resultados

La Figura 1 presenta un diagrama de flujo del protocolo de muestreo hisopo. Este protocolo consiste en cuatro pasos principales; 1) la recogida de muestras, 2) de almacenamiento de muestras y el transporte, 3) la purificación de ARN viral y la concentración y 4) ensayo de RT-qPCR y genotipado.

Figura 1: Diagrama de flujo del protoc.......

Discusión

Los norovirus tienen una dosis infecciosa humana 50% entre 18 y 10 ^{3 20} partículas de virus. Por lo tanto, incluso la contaminación de bajo nivel de las superficies puede suponer un riesgo para la salud pública. Se evaluaron varios aspectos del protocolo de muestreo hisopo incluyendo: 1) diferentes materiales de hisopo, 2) hisopos de condiciones de almacenamiento durante el transporte, 3) la concentración de ARN viral, y 4) colífagos MS2 como el control de la extracción interna.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre genérico de los kits
Macrofoam hisop	Prehumedened EnviroMax Swab kit	Puritan	2588060PFUW
tampón de lisis >ARN fuerte	CDC Tampón UNEX	Microbiológicos	Nº de cat MR0501
ARN	Midi	Omega Biotek	Cat Nº R6664-02
ARN	Zymol RNA kit de limpieza y concentrador	Zymo Research	Cat No R1016
Kit de RT-PCR en tiempo real	AgPath kit RT-PCR en un solo paso	Life Technologies	Nº 4387391
Convencional kit de RT-PCR	Qiagen kit de RT-PCR en un solo paso	Qiagen kit	No 210212
gel	Qiagen QIAkit de extracción de gel QIAquick	kit Qiagen	Cat Nº 28704 o 28706
	Colifago MS2	ATCC	Nº de cat. 15597-B1
	Transcripciones de escorrentía de ARN Plataforma de
	PCR en tiempo real	Applied Biosystems	Modelo ABI 7500
	Placa de reacción óptica de 96 pocillos	Thermo Scientific	Cat Nº 4316813
	MicroAmp Película adhesiva transparente	Thermo Scientific	Cat No 4306311

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