Identificación de progenitores eritromioideos y su progenie en el embrión de ratón por citometría de flujo

Lorea Iturri; Javier Saenz Coronilla; Yvan Lallemand; Elisa Gomez Perdiguero

doi:10.3791/55305

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Artículo de método

Identificación de progenitores eritromioideos y su progenie en el embrión de ratón por citometría de flujo

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DOI:

10.3791/55305

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17 de julio de 2017

Lorea Iturri¹^,² , Javier Saenz Coronilla¹ , Yvan Lallemand¹ , Elisa Gomez Perdiguero¹

¹Department of Developmental and Stem Cell Biology, CNRS UMR3738, Department of Immunology, Institut Pasteur, ²Cellule Pasteur UPMC, University Pierre et Marie Curie

En este artículo

Resumen

Mientras que los macrófagos infiltrados son continuamente reclutados en tejidos adultos a partir de precursores circulantes, los macrófagos residentes sembran su tejido durante el desarrollo, donde se mantienen sin más aportación de los progenitores. Recientemente se identificaron los progenitores de macrófagos residentes. Aquí, presentamos métodos para el mapeo de destino genético de los progenitores de macrófagos residentes.

Resumen

Los macrófagos son fagocitos profesionales del brazo innato del sistema inmunológico. En el estado estacionario, los macrófagos sésiles se encuentran en tejidos adultos donde actúan como centinelas de primera línea de infección y daño tisular. Mientras que otras células inmunitarias se renuevan continuamente a partir de células progenitoras y hematopoyéticas (HSPC) localizadas en la médula ósea, se ha demostrado que un linaje de macrófagos, conocido como macrófagos residentes, se mantiene a sí mismo en tejidos sin entrada de HSPCs de médula ósea. Este linaje se ejemplifica por microglia en el cerebro, células de Kupffer en el hígado y células de Langerhans en la epidermis entre otras. La lámina intestinal y la lámina intestinal son los únicos tejidos adultos desprovistos de macrófagos residentes independientes del HSPC. Investigaciones recientes han identificado que los macrófagos residentes se originan de la hematopoyesis extra-embrionaria del saco vitelino de progenitor (es) distinto de las células madre hematopoyéticas fetales (HSC). Entre la hematopoyesis definitiva del saco vitelino, eLos progenitores ritiomielóides (EMP) dan lugar tanto a las células eritroides y mieloides, en particular a los macrófagos residentes. EMP sólo se generan dentro del saco vitelino entre E8.5 y E10.5 días de desarrollo y migran al hígado fetal tan pronto como la circulación se conecta, donde se expanden y se diferencian hasta por lo menos E16.5. Su progenie incluye eritrocitos, macrófagos, neutrófilos y mastocitos, pero sólo los macrófagos derivados de EMP persisten hasta la edad adulta en los tejidos. La naturaleza transitoria de la emergencia EMP y la superposición temporal con la generación de HSC hace difícil el análisis de estos progenitores. Hemos establecido un protocolo de cartografía de destino inducible por tamoxifeno basado en la expresión del promotor Csf1r del receptor de citocinas de macrófagos para caracterizar células EMP y EMP derivadas in vivo mediante citometría de flujo.

Introducción

Existen varias olas sucesivas pero superpuestas de progenitores hematopoyéticos durante el desarrollo cuya progenie mieloide permanece en la edad adulta. En primer lugar, los progenitores "primitivos" unipotentes emergen en el saco de yema de ratón ¹ ^, ² entre E7.5-E8.25 y dan lugar a macrófagos embrionarios sin ningún intermediario monocítico. Si los macrófagos derivados de progenitores primitivos persisten en el cerebro adulto como microglia sigue siendo un sujeto de investigación activa. En segundo lugar, Erythro-Myeloid precursores (EMPs) surgen en el saco vitelino en E8.5, entrar en el torrente sanguíneo....