Los tumores cutáneos se descartan a menudo después de la cirugía micrográfica de Mohs. Se describe aquí un protocolo que permite al personal de soporte clínico procesar y almacenar eficazmente muestras de tumores cutáneos ( por ejemplo, carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular y melanoma) para aplicaciones de laboratorio aguas abajo sin interferir con las operaciones clínicas.
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Artículo de método
Establecimiento de un Biorepository basado en la Clínica
En este artículo
Resumen
Resumen
La incidencia de cáncer de piel ( por ejemplo, carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular y melanoma) ha aumentado en los últimos años. Se espera que haya una demanda paralela de muestras tumorales cutáneas para estudios de investigación biomédica. Sin embargo, la disponibilidad de tejidos es limitada debido al costo de establecer un depósito biológico y la falta de protocolos disponibles para obtener muestras clínicas que no interfieran con las operaciones clínicas. Se estableció un protocolo para recolectar y procesar el tumor cutáneo y las muestras asociadas de sangre y saliva que tienen un impacto mínimo en los procedimientos clínicos de rutina en la fecha de la cirugía de Mohs. Las muestras tumorales se recogen y procesan a partir de pacientes sometidos a su primera capa de cirugía Mohs para neoplasias cutáneas probadas por biopsia por el histotecnólogo Mohs. El tejido normal adyacente se recoge en el momento del cierre quirúrgico. Las muestras adicionales que se pueden recoger son hisopos de sangre entera y bucal. Mediante la utilización de muestras de tejido que normalmente se desechan, se generó un depósito biológico que ofrece varias ventajas clave basándose en la clínica frente al laboratorio. Estos incluyen una amplia gama de muestras recogidas; Acceso a los registros de pacientes no identificados, incluidos los informes de patología; Y, para el donante típico, el acceso a muestras adicionales durante las visitas de seguimiento.
Introducción
La investigación sobre el cáncer y los biomarcadores se basa en un suministro de muestras de tejido humano de calidad, y la oferta limitada ha obstaculizado la investigación 1 , 2 . Muchos estudios dermatológicos están limitados por la oferta inadecuada, la calidad variable y los costos asociados con el uso de tejido humano. El costo de establecer un gran biobanco dedicado se ha estimado en aproximadamente dos millones de dólares 3 , y estos costos colocan el uso de tejido humano fuera del alcance de muchos investigadores. Además, el proceso de generación y almacenamiento de muestras d....
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Protocolo
Toda la experimentación en muestras de tejidos humanos fue aprobada por Western IRB (WIRB Protocol # 20142461). El único criterio para la recolección de tejidos para estos procedimientos es un diagnóstico de SCC probado con biopsia. No se describieron criterios de exclusión en el protocolo IRB original, pero no se utilizaron muestras de pacientes con una enfermedad transmisible transmitida por la sangre conocida. El consentimiento informado se obtuvo antes de la recolección de tejido cutáneo, sangre y saliva. La Junta de Revisión Institucional del Medio Oeste aprobó el trabajo de validación con muestras de biorepositores basadas en clínicas en la Universidad de Midwe....
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Resultados
El tumor y la ANT se han utilizado con éxito en el aislamiento de proteínas y se han ensayado mediante transferencia Western. Como se muestra en la Figura 3 , se pueden detectar marcadores cutáneos de carcinoma de células escamosas (Muc1 14 , FHL- 15 y p40 16 , 17 ) en muestras de pacientes recogidas y almacenadas en nuestro depósito biológico clínico.
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Discusión
A juicio del autor, este protocolo es el primero de su tipo que se centra en la adquisición clínica de muestras de tejido cutáneo en un enfoque rentable y rápido. Los pacientes sometidos a microcirugía de Mohs se programan típicamente durante bloques específicos del tiempo, y la colección se limita a estos períodos. La recolección de muestras involucra el esfuerzo del asistente médico involucrado en el cuidado del paciente, el histotecnólogo de Mohs que procesa las muestras tumorales y un miembro del personal de laborat.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado con fondos de la Midwestern University Colegio de Ciencias de la Salud Investigación Facilitación Grant, otorgado a EEH, y Midwestern University Oficina de Investigación y Programas Patrocinados Intramural Grant, otorgado a KJL. El apoyo adicional fue proporcionado por Affiliated Laboratories y Affiliated Dermatology. Agradecemos a Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel y Ali Zaidi por su asistencia técnica.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubos de extracción de sangre de plástico BD Vacutainer con K3EDTA | ThermoFisher Scientific | 02-685-2B | |
| Microscopía Electrónica de las Ciencias Cuchillas de doble filo | ThermoFisher Scientific | 50-949-411 | |
| Pinza curva de punta media de uso general | ThermoFisher | Scientific 16-100-110 | |
| ThermoFisher Scientific | 05-408-138 | ||
| Lonza Walkersville KGM Medio de queratinocito | ThermoFisher Scientific | NC9791321 | |
| Microscopía electrónica Ciencias Tejido TEK OCT Compuesto | ThermoFisher Scientific | 50-363-579 | |
| Criostato Leica CM1950 Portaobjetos | Leica Biosystems | ||
| ThermoFisher Scientific | 12-550-343 | ||
| Shandon Rapid-Chrome H& E Kit de tinción de sección congelada | ThermoFisher Scientific | 99-900-01 | |
| Nalgene Tubos criogénicos de almacenamiento a largo plazo | ThermoFisher Scientific | 03-337-7X | |
| Falcon 15 mL Tubos de centrífuga cónicos | ThermoFisher Scientific | 14-959-53A | |
| Boca Scientific BuccalT-Swab | NC9679349 | ThermoFisher Scientific | |
| 10x Tampón RIPA | ThermoFisher Scientific | 50-195-822 | |
| Cóctel de inhibidores de proteasa y fosfatasa | ThermoFisher Scientific | PI78443 | |
| Eppendorf 5424R Microcentrífuga | ThermoFisher Scientific | 05-401-203 | |
| Trituradora de pellets Homogeneizador inalámbrico | ThermoFisher Scientific | 12-141-3 | |
| Mortero de pellets sin ARNasa | ThermoFisher Scientific | 121-141-364 | |
| Forma SteriCycle CO2 Incubadora | ThermoFisher Scientific | 13-998-089 | |
| HyClone Suero fetal bovino | ThermoFisher Scientific | SH30071.02 | |
| Gibco Advanced DMEM/F-12 | ThermoFisher Scientific | 12-634-028 | |
| Gibco Penicilina-Estreptomicina | ThermoFisher Scientific | 15140148 | |
| Gibco 1 M Hepes | ThermoFisher Scientific | 15-630-130 | |
| Nunc Cultivo Celular 35 mm con Vent | ThermoFisher Scientific | 1256591 | |
| Anti-CFH clon de anticuerpo monoclonal OX-24 | Abnova | MAB12583 | |
| Anti-p40 (p63 delta) anticuerpo | Abnova | ABX-144A | |
| Anti MUC-1 anticuerpo | Santa Cruz Biotech | sc-7313 | |
| Anti-Caracol + (phospho S246) | Abcam | Ab63568 | |
| Cabra anti-conejo IgG, Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A-11034 | |
| Alexa Fluor 568 Phallodin | Molecular Probes | A12380 | |
| ProLong Gold Mountant Antidecoloración con | Sondas Moleculares DAPI | P36941 | |
| Microscopio Zeiss Axio Imager Z1 con cámara Axiocam | Zeiss | 4300009901 | |
| Olympus IX51 contraste de fase con cámara DP72 | Olympus IX511F3 |
Referencias
- Baker, M. Biorepositories: Building better biobanks. Nature. 486, 141-146 (2012).
- Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15<....
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Reimpresiones y permisos
