Artículo de método

Evaluación del procedimiento para realizar cistometría despierta en un modelo de ratón

DOI:

10.3791/55588

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20 de mayo de 2017

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1Department of Surgery, University of Vermont, 2Department of Urology and Biomedical Laboratory, University of Southern Denmark, 3Wake Forest Institute for Regenerative Medicine, Wake Forest University, 4Institute for Clinical Medicine, Aarhus University

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

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Este estudio describe los procedimientos quirúrgicos y técnicas experimentales para realizar cistometría despierta en un ratón que se mueve libremente. Además, proporciona evidencia experimental para apoyar su optimización y estandarización.

Resumen

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La cistometría de llenado despierto se ha utilizado durante mucho tiempo para evaluar la función de la vejiga en ratones que se mueven libremente, sin embargo, los métodos específicos utilizados varían entre los laboratorios. El objetivo de este estudio fue describir el procedimiento microquirúrgico utilizado para implantar un tubo intravesical y la técnica experimental para registrar la presión de la vejiga urinaria en un ratón despierto y de movimiento libre. Además, los datos experimentales se presentan para mostrar cómo la cirugía, así como el tipo de tubo y el tamaño, afectan la función del tracto urinario inferior y la sensibilidad de grabación. El efecto del diámetro del tubo sobre el registro de presión se evaluó tanto en tubos de polietileno como de poliuretano con diferentes diámetros internos. Posteriormente, el tubo de mejor rendimiento de ambos materiales se implantó quirúrgicamente en la cúpula de la vejiga urinaria de ratones C57BL / 6 macho. Se registró una frecuencia de micturación de doce horas durante toda la noche en animales sanos e intactos 2, 3, 5 y 7 días después de la cirugía. En la cosecha, vejigas wSe evaluaron los signos de hinchamiento utilizando la observación bruta y se procesaron posteriormente para el análisis patológico. La mayor extensión de hinchazón de la vejiga se observó en los días 2 y 3, que se correlacionó con los datos de micción conductual que muestran una función vesical significativamente deteriorada. Al día 5, la histología de la vejiga y la frecuencia de micción se habían normalizado. Basado en la literatura y la evidencia proporcionada por nuestros estudios, proponemos los siguientes pasos para el registro in vivo de la presión intravesical y el volumen de vacío en un ratón despierto: 1) Realizar la cirugía con un microscopio operativo y herramientas microquirúrgicas, 2) Utilizar polietileno-10 Tubería para minimizar los artefactos de movimiento, y 3) realizar cistometría en el día 5 postoperatorio, cuando se disuelve la hinchazón de la vejiga.

Introducción

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La cistometría de llenado (FC) es un método de diagnóstico que consiste en colocar un catéter en la vejiga urinaria para registrar la presión durante el llenado lento de la vejiga. Introducido por primera vez en 1927 como un método de diagnóstico clínico para evaluar la función del tracto urinario inferior, se ha mantenido ampliamente utilizado. 1 En aplicaciones de investigación, el FC puede usarse para probar la función de la vejiga en modelos animales sanos y enfermos y para estudiar los efectos de los agentes farmacológicos. Modelos animales de roedores se utilizan comúnmente para investigar la función del tracto urinario inferior.

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Protocolo

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Los animales fueron alojados en la Universidad de Vermont Animal Care Facility de acuerdo con las directrices institucionales. Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con la guía de los Institutos Nacionales de Salud para el cuidado y uso de animales de laboratorio.

1. Implante de tubo intravesical

  1. Preparación de tubos e instrumentos para el procedimiento quirúrgico
    1. Corte una pieza de 7 cm de tubo PE10 para hacer el catéter para la implantación.
    2. Crear una llamarada en un extremo del tubo PE10 por avanzar lentamente el extremo hacia una llama abierta.
      NOTA: Retire r....

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Resultados

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No hubo diferencias significativas entre los materiales de la tubería y los diámetros en la consistencia de la subida y caída de la presión dentro del sistema durante la oclusión del tubo. El aumento de la pared de la vejiga después de la implantación del tubo intravesical fue significativo tanto para los materiales de polietileno (PE) como para los materiales de poliuretano (PU). El día 2, se desarrolló una hinchazón submucosa severa. Se ocupó de la mitad de la sección transversal de la.......

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Discusión

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Material óptimo y tamaño de la tubería intravesical

Para determinar el efecto del diámetro del tubo en las grabaciones de presión, hemos probado diferentes tubos microfluídicos; PE50 (0,58 mm ID), poliuretano PU027 (0,4 mm ID), PE25 (0,46 mm ID) y PE10 (0,28 mm ID). Para cada tubo, se registró presión con la bomba de infusión funcionando a 1 ml / h, mientras que se desplazaba rápidamente el tubo verticalmente de 0 a 30 cm. Los ensayos iniciales in vivo intentaron usar la tubería PE50, pero no t.......

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Divulgaciones

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Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

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Este estudio fue financiado por el Departamento de Cirugía de la Universidad de Vermont, el Consejo Danés para la Investigación Independiente y el Hospital Universitario de Odense.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Tubo de polietileno (PE) 10InstechBTPE-10Se adapta a conectores/enchufes de 30G Tubo
polietileno (PE) 50InstechBTPE-50Se adapta a conectores/enchufes de 22G
Giratorio de acero inoxidable de un solo canal de 22 GResorte375/22
(9/64" OD)Grainger1NAH1protege la tubería PE50 - Cortado a medida
Conector de 22 GInstechSP22/12
Yutaoz Pistola de pegamento adhesivo de fusión en caliente profesionalYutaozUse el ajuste de baja temperatura (100 & grados; C) - Cualquier pistola de pegamento termofusible con un rango de temperatura ajustable funcionará
Surebonder DT-2010 barra de pegamento multiusosSurebonderCualquier pegamento caliente para todo uso funcionará
Micropinzas curvas Dumont #5World Precision Instruments500232
Micropinzas curvas Dumont #7World Precision Instruments14188
Mini tijeras de disección - rectasWorld Precision Instruments503240
Micro pinzas antimosquitos (12,5 cm)World Precision Instruments500451
Tijeras de disección - rectasWorld Precision Instruments14393
Castroviejo PortaagujasWorld Precision Instruments503258
Isoflurano, USPPhoenix2%, caudal de 1 L/min
Buprenorfina0,05 mg/kg
0,9% Irrigación con cloruro de sodio, USPBaxter
6-0 Monofilamento negro de Ethilon, sutura no absorbibleEthiconBrida de vejiga
6-0 Vicryl violeta trenzado, sutura absorbibleEthiconSutura muscular, running
6-0 Monofilamento azul Prolene, sutura no absorbibleEthiconSutura cutánea, colchón vertical, enterrado interrumpido
KD Legato 210 bomba de infusión/extracciónKD Scientific1,5 mL/h
Transductor de presión desechableDigitimerNL108T2
amplificador de presiónDigitimerNL108A
Power1401-3 interfaz de adquisición de datosDigitimer
Spike2 Cambridge Electronic Design LimitedSoftware de registro de presión para PC
Microscopio quirúrgico Leica MZ6 (3.2 - 20X)Aumento de Leica Microsystems
de de extensión utilitario de acero con alto contenido de carbono Instech

Referencias

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  1. Perez, L. M., Webster, G. D. The History of Urodynamics. Neurourol Urodyn. 11 (1), 1-21 (1992).
  2. Fry, C. H., et al. Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction. Neurourol Urodyn. 29 (4), 603-608 (2010).
  3. Maggi, C. A., Santicioli, P., Meli, A.

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Etiquetas

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