Este artículo de video ofrece una demostración detallada de los procedimientos necesarios para eliminar con éxito el páncreas de un ratón por disección para análisis histológico y perfiles metabólicos.
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Artículo de método
Disección del páncreas de ratón para análisis histológico y perfiles metabólicos
En este artículo
Resumen
Resumen
Hemos estado investigando el factor de transcripción específico de páncreas, 1a cre-recombinase; sarcoma de rata LOX-parada-lox-Kristen, glicina, ácido aspártico en el codón 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) tensión del ratón como un modelo humano de cáncer de páncreas. El objetivo de nuestros estudios actuales es identificar nuevos biomarcadores metabólicos de la progresión del cáncer de páncreas. Hemos realizado perfilado metabólico de orina, heces, sangre y extractos de tejido de páncreas, así como el análisis histológicos del páncreas a la progresión del cáncer de la etapa. El páncreas de ratón no es un órgano sólido bien definido como en los seres humanos, sino que es un tejido blando difusamente distribuido que no se identifica fácilmente por individuos familiarizados con la anatomía interna del ratón o por personas que tienen poca o ninguna experiencia realizando disecciones de órganos de ratón. El propósito de este artículo es proporcionar una step-wise manifestación visual para orientar a los novatos en la extirpación del páncreas de ratón por disección. Este artículo debe ser especialmente valioso para los estudiantes y los investigadores nuevos a la investigación que requiere la recolección del páncreas de ratón por disección de perfiles metabólicos o análisis histológicos.
Introducción
El ratón se ha convertido en un importante modelo animal de cáncer de páncreas humano1,2. En el Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modelo de ratón, Kristen oncogene de rata sarcoma (K-Ras) se activa exclusivamente en el páncreas, dando lugar a la iniciación de las lesiones precancerosas en el páncreas, conocidas como neoplasias intraepiteliales pancreáticas (PanINs), que el progreso para adenocarcinomas ductales pancreáticas, comúnmente contempladas como PDACs3. Este sistema de modelo de ratón ofrece uno de los modelos animales mejor disponibles para cáncer pancreático....
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Protocolo
los procedimientos realizados en el video y se describen a continuación han sido aprobados por el cuidado institucional del Animal y el Comité uso (IACUC) en la Universidad de Miami.
1. preparación y estímulo de prueba
- establecer dos zonas diferenciadas para el procedimiento quirúrgico, la mesa de operaciones y la mesa después de la operación. Etapa de ambas áreas con todos los materiales y utensilios necesarios.
Tabla de
- el funcionamiento de la etapa bajo una campana de ventilación. Arreglar la mesa con el equipo de una manera que permite el funcionamiento continuo y sin trabas de procedimiento.
- Establecer u....
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Resultados
La figura 1 muestra un resumen del funcionamiento área de medio ambiente y la figura 2 muestra el área de operación post. Aunque esta configuración proporciona la cantidad mínima de equipo y escenificando, individuos puede modificar esto para que mejor se adapte a las necesidades individuales. El protocolo debe ser optimizado según las necesidades específicas del experimento. Este procedimiento se lleva a cabo de forma que termin.......
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Discusión
Importancia con respecto a los métodos existentes
Mientras que existen otros videos informales de disecciones de ratón, este artículo de vídeo ofrece primera calidad profesional, con revisión por pares, demostración de todos los pasos detallados necesarios para la extracción y recolección de lo páncreas de ratón por disección10 . Con el páncreas es un órgano principal de la actividad metabólica y de la insulina producción, disección y extracción del páncreas permite la preserva.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
MAK reconoce apoyo a esta labor de los institutos nacionales de salud / número - 1R15CA152985-01A1 de la concesión del Instituto Nacional del cáncer. Este proyecto ha sido apoyado también por el Miami Universidad pregrado Premio programa de investigación, las oportunidades de doctorado licenciatura Universidad de Miami para el programa de becas y el programa de eruditos de verano de la Universidad de Miami.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tarro de vidrio | Corning | 3140-150 | El frasco de vidrio utilizado en el video ha sido descontinuado. Este es su reemplazo. |
| Tapa del tarro de cristal | Corning | 9985-150 | La tapa del tarro de cristal utilizada en el vídeo ha sido descatalogada. Este es su reemplazo. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Tijeras quirúrgicas | Fisher Scientific | 9201 | |
| Frasco exprimible | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Etanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalina | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Tableros de espuma | Therapak | ||
| Fisher Scientific | 200205SHN | ||
| 1 mL 21G Jeringas | BD Biosciences | 309624 | |
| Tubos Falcon de 50 mL Fisher | Scientific | 339652 | |
| Tubos de microcentrífuga de 2.0 mL | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Almohadillas quirúrgicas | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Longitud: 2" | Productos de Advance Store | X32T-05 | |
| Toallitas Esterilizantes | Desechables Profesionales International Inc. | Q85084 | |
| Contenedor de objetos punzocortantes | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Balanza analítica | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Boca ancha poco profunda Dewar Fisher | Scientific | F3087-V | |
| Bastidor de microtubos flotante | VWR | 60986-100 | |
| Vial criogénico 1,2 mL, estéril | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (isoflurano) | Henry Schein Salud Animal | 050033 | |
| Nitrógeno Líquido | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Ratón Kras | Cepa The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Ratón Cre Cepa | MMRRC | OOO435-UNC |
Referencias
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al.
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Reimpresiones y permisos
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