Aquí, se presenta la preparación de una decocción er-xian (EXD) en cuatro pasos-empapamiento, decocción, filtración y concentración- y demuestran la administración de un suero preparado para EXD a ratas. Estos métodos son aplicables al estudio in vivo e in vitro de las decocciones a base de hierbas como las medicinas tradicionales chinas.
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Artículo de método
Preparación de Herbal Medicine: Decocción de Er-Xian y suero que contiene Er-Xian para
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Resumen
Resumen
La medicina herbal tradicional, una medicina alternativa en el ambiente clínico, ha recibido una atención creciente en los últimos años. Antes de la entrega al cuerpo, se requiere comúnmente un procedimiento de extracción adicional para liberar los componentes activos de las hierbas crudas. La decocción acuosa es un procedimiento de extracción clásico que todavía se utiliza ampliamente en los entornos clínicos. Aquí, proponemos un protocolo detallado para la decocción er-xian (EXD) con el fin de aplicar las decocciones a base de hierbas a los estudios experimentales. Se describe el cálculo de una dosis apropiada para animales, así como los cuatro pasos principales de EXD: remojo, decocción de agua, filtración y concentración. Además, el suero que contiene EXD se introduce a las ratas como un medio de validación in vitro . En este caso, las ratas fueron administradas por vía oral EXD durante tres días. Las muestras de sangre se recogieron entonces, se inactivaron, se centrifugaron y se filtraron. El suero, diluido con el medio de cultivo, puede utilizarse para tratar células o tejidos en vItro Por ejemplo, EXD se aplicó tanto a estudios in vivo e in vitro y demostró que EXD mejora la osteogénesis. Este protocolo puede utilizarse como referencia para la preparación y aplicación de medicamentos herbales.
Introducción
El interés en el estudio y la aplicación de la medicina herbaria tradicional está creciendo actualmente. A diferencia de las drogas modernas, en las cuales los ingredientes químicos son definidos, las fórmulas herbarias tienen algunos ingredientes desconocidos y requieren procesos de extracción para permitir la entrega de sus compuestos activos. Aunque muchos estudios tratan de seleccionar un pequeño compuesto con una estructura bien conocida como representante de toda la hierba o fórmula herbaria, ni las eficacias farmacológicas ni los mecanismos pueden considerarse equivalentes 1 , 2 . Mientras que las huel....
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Protocolo
El protocolo sigue las pautas del cuidado animal de la universidad de Shangai de la medicina china tradicional y es aprobado por el experimento animal Comité de Ética animal de Shangai.
1. Protocolo I: Preparación de EXD
- Cálculo
- Administrar el EXD a un grupo de tratamiento de 10 ratones hembra de seis meses de edad de Imprinting Control Region (ICR) (0,02 kg / ratón), 5 días a la semana durante 12 semanas.
NOTA: Se necesitan un total de 1.702 EXDs. Debido a que los EXDs se miden en incrementos discretos, en la práctica real, administrar 2 EXDs. - Calcular el volumen de EXD aplicado por r....
- Administrar el EXD a un grupo de tratamiento de 10 ratones hembra de seis meses de edad de Imprinting Control Region (ICR) (0,02 kg / ratón), 5 días a la semana durante 12 semanas.
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Resultados
El efecto de EXD sobre la densidad ósea de ratones OVX
La tinción con hematoxilina y eosina (H & E) de la sección de la vértebra lumbar muestra un aumento de las trabéculas óseas después del tratamiento EXD in vivo ( Figura 1A , panel derecho) en comparación con las del grupo OVX ( Figura 1A , panel izquierdo). La Figura 1B muestra las imágenes representativas de μCT.......
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Discusión
En los últimos años, se ha prestado más atención a las hierbas medicinales, un tipo de medicina alternativa que se ha aplicado en el entorno clínico en el mundo oriental durante miles de años. Diferente del patrón de "banco a la cama" de la medicina moderna, la medicina herbal tradicional primero requiere la "cama al banco" patrón para explicar sus mecanismos. Esto puede ser seguido por la validación realizada en la etapa de banca y el procesamiento para el desarrollo de fármacos recién optimizados. .......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81573992). Damos las gracias a Emily K. Lo y Kathleen DiNapoli por su ayuda en la edición de idiomas.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Corteza Phellodendri (6 g), y Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Medicina China Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | Componentes EXD |
| Papel | de filtro GElifesciences | 99-103-952 | Filtro EXD decocción antes de la concentración |
| Impresión Ratones de la región de control (ICR) | Centro de Animales de Laboratorio de Shanghái | SCXK 2007-0005 | Estudio in vivo |
| Ratas Sprague Dawley | Animales de Laboratorio de Shanghái | SCXK 2007-0005 | Preparación de suero que contiene EXD |
| Filtro de jeringa | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µ m |
| agujas de sonda nasogástrica (10 ml) | Shanghai BO Ge departamento de ventas comerciales | 59104274 | Administración de |
| ketamina EXD (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anestesia |
| Xilacina (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anestesia |
| Dulbecco' s modificación de Eagle' s medio Dulbecco (DMEM) medio de cultivo | Gibco | 12800-116 | DMEM con 2 mM L-glutamina y sin ribonucleósidos y ribonucleótidos |
| Estreptomicina | Sigma | 1277 | 100 µ g / ml |
| Penicilina | Sigma | 4687 | 100 µ g / ml |
Referencias
- Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes. J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).
- Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T.
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Reimpresiones y permisos
