Aislamiento de células primarias de ganglio retiniano murino (RGC) por citometría de flujo

Sumana R. Chintalapudi; Need N. Patel; Zachary K. Goldsmith; Levon Djenderedjian; Xiang Di Wang; Tony N. Marion; Monica M. Jablonski; Vanessa M. Morales-Tirado

doi:10.3791/55785

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Artículo de método

Aislamiento de células primarias de ganglio retiniano murino (RGC) por citometría de flujo

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DOI:

10.3791/55785

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5 de julio de 2017

Sumana R. Chintalapudi¹ , Need N. Patel¹ , Zachary K. Goldsmith¹ , Levon Djenderedjian¹ , Xiang Di Wang¹ , Tony N. Marion² , Monica M. Jablonski¹^,³^,⁴ , Vanessa M. Morales-Tirado¹^,²

¹Department of Ophthalmology, Hamilton Eye Institute, University of Tennessee Health Science Center, ²Department of Microbiology, Immunology and Biochemistry, University of Tennessee Health Science Center, ³Department of Anatomy and Neurobiology, University of Tennessee Health Science Center, ⁴Department of Pharmaceutical Sciences, University of Tennessee Health Science Center

En este artículo

Resumen

Millones de personas sufren de enfermedades degenerativas retinianas que resultan en ceguera irreversible. Un elemento común de muchas de estas enfermedades es la pérdida de células ganglionares de la retina (RGCs). Este protocolo detallado describe el aislamiento de los RGC murinos primarios mediante selección positiva y negativa con citometría de flujo.

Resumen

Las enfermedades neurodegenerativas a menudo tienen un impacto devastador en los afectados. La pérdida de células ganglionares de la retina (RGC) está implicada en una serie de enfermedades, incluyendo retinopatía diabética y glaucoma, además del envejecimiento normal. A pesar de su importancia, RGCs han sido extremadamente difíciles de estudiar hasta ahora debido en parte al hecho de que comprenden sólo un pequeño porcentaje de la gran variedad de células en la retina. Además, los métodos actuales de aislamiento utilizan marcadores intracelulares para identificar RGC, que producen células no viables. Estas técnicas también implican largos protocolos de aislamiento, por lo que hay una falta de métodos prácticos, estandarizados y confiables para obtener y aislar los RGC. Este trabajo describe un método eficiente, completo y confiable para aislar RGC primaria de ratones retinae utilizando un protocolo basado en ambos criterios de selección positivos y negativos. Los métodos presentados permiten el estudio futuro de los CGR, con el objetivo de comprender mejor lasDisminución de la agudeza visual que resulta de la pérdida de RGC funcional en las enfermedades neurodegenerativas.

Introducción

Los RGC son neuronas diferenciadas terminalmente, y por lo tanto, las células primarias son necesarias para la experimentación. El desarrollo de un protocolo para el aislamiento y enriquecimiento de las células ganglionares primarias de la retina murina (RGCs) es fundamental para revelar los mecanismos de la salud y la degeneración de RGC in vitro . Esto es especialmente importante para los estudios que buscan generar terapias potenciales para promover la función de RGC y para minimizar su muerte. La degeneración de RGC se asocia con enfermedades degenerativas de la retina, como el glaucoma, la retinopatía diabética y el envejecimiento normal. Aunque los mec....