Summary
Här beskriver vi enkelt svans ven blod provtagningsmetod i icke-sövda råttor med hjälp av ett vakuum extraktion rörledningssystemet. Denna metod minskar risken för direkt exponering för blod och förenklar att ta flera prover från en enda venpunktion.
Abstract
Blodprover kan tas från råttor i ett antal mätplatser. Svans venen är exempelvis en överlägsen plats för blodprovstagning. Men är svansen venen tunn så att det är ibland svårt att punktera. Dessutom svans venen har lågt blodflöde och kräver en lång provtagningstiden att få tillräckligt med blod. Denna rapport beskriver en enkel blod urvalsmetoden, metoden vakuum blod insamling, som vanligen används för att få blodprover från patienter, här används för icke-sövda råttor. 22 G fjäril nålens spets sattes in i en av laterala svans vener ca 2-3 cm från spetsen av svansen i en vinkel på ca 20°, och blod samlades i vakuum samling röret genom att infoga gummi slutet av fjäril nålen i va cuum bloduppsamlingsrör. Närvarande experimentella resultat visar att framgång var 95% i experimentgruppen och 90% i gruppen nybörjare. Framgång och punktering gånger var liknande mellan två grupper. Provtagning varaktighet var signifikant kortare i experimentella gruppen jämfört med nybörjare grupp. Avslutningsvis är detta vakuum blod insamlingsmetod för sekventiell blodprovstagning från svans venen av icke - sövda råttor genomförbart och lätt att lära, som kan tjäna som ett tillförlitligt alternativ till andra konventionellt används blod urvalsmetoder för råttor.
Introduction
Blodprovstagning från råttor krävs för en mängd olika experimentella studier. Tekniker för blodinsamling av från råtta inkluderar punktering av hjärtat, retro-orbital plexus, halsvenen, ytlig ven, svans blodkärl, halspulsådern, bukaorta, och vena cava. De flesta tekniker (utom ytlig ven och svans blodkärl punktering) kräver anestesi1,2. Venerna i råtta svansen är rutinmässigt punkteras för blodprovstagning och vaskulär injektion. Efter behandling av svansen med varmt vatten, är blodkärlen väl dilaterad och lämplig för manipulation, även när råttor är sövda3.
Trots utvecklingen av nya och förbättrade tekniker för att få blodprov i litet laboratorium djur2, är det inte alltid lätt att få tillräckligt med blod när provtagning från små djur. Svans ven hos råttor är en överlägsen plats för blod provtagning4. Men svansen venen är tunn, således det är ibland svårt att punktera och skulle ta lång tid att få tillräckligt med blod på grund av dess låga blodflödet. Blodinsamling via ett vakuum extraktion rörsystem är en typisk metod i daglig klinisk praxis. Detta slutna system för Bloduppsamlande minskar risken för direkt exponering för blod och har gjort det lättare att ta flera prover från en enda venpunktion5. Denna rapport beskriver en enkel svans ven blodprovstagning metod i icke-sövda råttor med hjälp av vakuum extraktion rörledningssystemet. Denna metod är lätt att behärska och kan användas för att få en stor mängd blod flera gånger hos råttor.
Protocol
Alla förfaranden godkändes av Tongji Medical College rådet på djur hand kommittén av Huazhong universitet för vetenskap och teknik (Wuhan, Kina). Manuskriptet var beredd enligt ankomst (djur forskning: rapportering av In Vivo -experiment) riktlinjer6.
1. djurhållning
- Använda Sprague-Dawley (SD) råttor (n = 20, 10 män, 8 veckor gamla, väger 261 till 291 g, menar = 272.85 ±9.07 g) från experimentella djur Center av Huazhong universitet för vetenskap och teknik och underhålla råttor enligt guiden för skötsel och användning av Försöksdjur som publiceras av oss National Institute of Health (NIH publikation No.85-23, reviderad 1996)
- Hus under standart villkorar med fri tillgång till mat och dricksvatten. Hålla råttor i 530 cm2 burar med trä-rakning sängkläder. Hus två råttor i varje bur. Hålla alla burar öppna rummet miljön (mikro-isolering eller ventilerade kasse)
- Säkerställa personalen som deltar i det experimentella protokollet regelbundet hanterar råttorna.
- Upprätthålla rumstemperatur mellan 21 ° C och 23 ° C. Ge en normal salt kost (0,3% NaCl) under hela studien.
2. blod insamling förfarande
Obs: Vakuum blod insamlingssystemet består av en dubbelriktad nål [22 G (0,7 mm x 25 mm)], en plasthållare och en serie av vakuumrör (2 mL) med gummipropp (figur 1).
- Placera råtta i ett besöksförbud plasthållare och tvätta svansen med varm (20-30 ° C) vatten för att avlägsna synlig smuts eller avföring. Medan assistent håller svansen i en utsträckt position, torka svansen med 70% etanol och rengör med gasväv att göra venen klart.
- Infoga 22 G fjäril nålens spets i en av laterala svans vener (ca 5 mm) på en ställning cirka 2-3 cm från spetsen av svansen i vinkel på ca 20 ° (figur 2). Samla in blod i vakuum samling röret genom att infoga gummi slutet av fjäril nålen i det vakuum bloduppsamlingsrör (figur 3).
Obs: Maximal samling blodvolymen är 1,2 mL7. - Efter blodinsamling, ta bort nålen och försiktigt tryck på punktering webbplatsen med gasbinda för 15-30 s för att stoppa blodflödet. Sedan släppa råttan från besöksförbud plasthållare och återgå råtta till sin bur.
- Använda rören som innehåller EDTA som en antikoagulant att samla in blodplasma. Vänd försiktigt röret flera gånger att blanda antikoagulans i blodet och placera proverna på is vertikalt.
- Centrifugera blodet provet samling rören i en kyld centrifug vid 2000 x g i 10 min att separera plasma eller serum.
- Extrahera plasma/serum, noga med att inte störa de röda och vita blodkroppar lagrarna. Att samla in blod serum, använda rör utan antikoagulans. Båda typer av prov kan användas omedelbart eller förvaras vid-80 ° C i upp till ett år.
Obs: Framgångsrik blodtappning definierades som att erhålla 1,2 mL blod varje gång. Maximal punktering tid sattes tre prövningar, om den totala blodvolymen var lägre än 1,2 mL efter tredje punkteringen, den definierades som en misslyckad blodinsamling. Provtagning varaktighet börjar från svans ven punkteringen avlägsnande av fjäril nålen efter blodtappning. -
Samla in blod två gånger inom två veckor7.
- För att testa och verifiera genomförbarheten av denna metod, tåg två läkarstudenter (nybörjare) för 2 h innan du utför detta blod samling protokoll. Använd tjugo råttor och dra blod från 10 råttor av 2 erfarna kamrater (experimentgruppen) och 10 råttor av 2 medicinska studenter (nybörjare grupp).
3. statistisk analys
- Uttrycka data som en medelvärde ± standardavvikelse och analysera med SPSS Statistics 17. Ett α-värde på 0,05 valdes, därför p < 0.05 ansågs statistiskt signifikant.
Representative Results
Provtagning varaktighet, kroppsmassa och blod collection volym av de två grupperna
Blod samlades från 10 råttor (5 hanar) två gånger inom två veckor i varje grupp. Den genomsnittliga kroppsmassan i båda grupperna var liknande (272.00 ±9.66 g och 273.70 ±8.87 g). Provtagning varaktighet var signifikant kortare i experimentella gruppen jämfört med nybörjare gruppen (2.77 ±0.53 min vs. 3.28 ±0.83 min, p < 0,05) (tabell 1).
Framgång Betygsätt och punktera tider av två grupper
Framgång var 95% (19/20) i experimentgruppen och 90% (18/20) i gruppen nybörjare (p > 0,05). Punktering gånger skilde sig inte signifikant mellan de två grupperna (1.50 ±0.61 min vs. 1,85 ±0.75 min, p > 0,05) (tabell 2). Dessa resultat indikerar denna metod är lätt att lära, och tekniken kunde styras efter träning för 2 h.
Figur 1 : 2 mL vakuum bloduppsamlingsrör (vänster), 22 G fjärilsnål (center), besöksförbud plasthållare (höger). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Nålspetsen infogades i laterala svans ven (ca 5 mm) på position ungefär 2-3 cm från spetsen av svansen i vinkel på ca 20 °. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Framgångsrika venpunktion. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Experimentella gruppen | Nybörjare-gruppen | |||||||||
| Kön | Vikt (g) | Insamlade blodvolym (mL) | provtagning varaktighet (min) | Kön | Vikt (g) | Insamlade blodvolym (mL) | provtagning varaktighet (min) | |||
| E1-1 | hane | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | hane | 282 | 1.2 | 3.18 | |
| E1-2 | hane | 291 | 1.2 | 2,73 | B1-2 | hane | 282 | 1.2 | 2.18 | |
| E2-1 | hane | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | hane | 264 | 1.2 | 3,73 | |
| E2-2 | hane | 276 | 1.2 | 2,37 | B2-2 | hane | 264 | 1.2 | 2.47 | |
| E3-1 | hane | 267 | 1.2 | 2,73 | B3-1 | hane | 265 | 1.2 | 3,52 | |
| E3-2 | hane | 267 | 1.0 | 3.88 | B3-2 | hane | 265 | 1.2 | 2,53 | |
| E4-1 | hane | 263 | 1.2 | 2.41 | B4-1 | hane | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| E4-2 | hane | 263 | 1.2 | 2,52 | B4-2 | hane | 289 | 1.2 | 3.62 | |
| E5-1 | hane | 265 | 1.2 | 3,61 | B5-1 | hane | 277 | 1.2 | 3.48 | |
| E5-2 | hane | 265 | 1.2 | 2,42 | B5-2 | hane | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | kvinna | 285 | 1.2 | 3.33 | B6-1 | kvinna | 274 | 0,9 | 4,87 | |
| E6-2 | kvinna | 285 | 1.2 | 3.03 | B6-2 | kvinna | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7-1 | kvinna | 271 | 1.2 | 2,82 | B7-1 | kvinna | 268 | 1.0 | 3,93 | |
| E7-2 | kvinna | 271 | 1.2 | 2,42 | B7-2 | kvinna | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | kvinna | 268 | 1.2 | 1,93 | B8-1 | kvinna | 262 | 1.2 | 2,07 | |
| E8-2 | kvinna | 268 | 1.2 | 3,05 | B8-2 | kvinna | 262 | 1.2 | 3,67 | |
| E9-1 | kvinna | 273 | 1.2 | 2,52 | B9-1 | kvinna | 281 | 1.2 | 4,38 | |
| E9-2 | kvinna | 273 | 1.2 | 3.17 | B9-2 | kvinna | 281 | 1.2 | 4.57 | |
| E10-1 | kvinna | 261 | 1.2 | 1,82 | B10-1 | kvinna | 275 | 1.2 | 2,53 | |
| E10-2 | kvinna | 261 | 1.2 | 3,25 | B10-2 | kvinna | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| Genomsnitt | 2,77 | 3.28 | ||||||||
| Sv-1: följetong antalen av råttor i den experimentella gruppen för första blodinsamling. | ||||||||||
| Sv-2: följetong antalen av råttor i den experimentella gruppen för andra blodinsamling. | ||||||||||
| BN-1: följetong antalen av råttor i gruppen nybörjare för första blodinsamling. | ||||||||||
| BN-2: följetong antalen av råttor i gruppen nybörjare för andra blodinsamling. | ||||||||||
Tabell 1: Resultat av blod samlas i den experimentella gruppen och gruppen nybörjare.
| Blod insamling gånger | Genomsnittliga punktering gånger | En tid punktering | Två gånger punktera | Tre gånger punktera | Misslyckades | Framgång | |
| Experimentella gruppen | 20 | 1.50 ±0.61 | 11 | 8 | 0 | 1 | 95% |
| Nybörjare-gruppen | 20 | 1,85 ±0.75 | 7 | 9 | 2 | 2 | 90% |
| En tid punktering: antal råttor med framgångsrik blodtappning efter den första punkteringen | |||||||
| Två gånger punktering: antal råttor med framgångsrika blod samlingen efter den andra punkteringen | |||||||
| Tre gånger punktering: antal råttor med framgångsrik blodtappning efter den tredje punkteringen | |||||||
| Misslyckades: antal råttor med misslyckade blodinsamling efter den tredje punkteringen | |||||||
Tabell 2: Jämförelse av punktering gånger och framgång i den experimentella gruppen och gruppen nybörjare.
Discussion
Denna rapport beskriver ett lätt att lära blod insamlingsmetod hos råttor. Våra resultat visade att denna metod är genomförbart för upprepade gånger att samla en stor mängd blod från råttor. Dessutom kunde denna metod styras enkelt med en kortsiktig inlärningskurva. Proceduren kan utföras i icke-sövda råttor och endast orsakar minimal stress för djuren.
Blodprover kan tas från råttor på olika platser. Svans venen är en överlägsen plats för blod provtagning4. Dock är det inte alltid lätt att få tillräckligt blodvolym från tunna och låga blod flöde svans venen rats. Vakuum blod insamlingssystemet används vanligtvis för att samla in blodprover från patienter i daglig klinisk praxis. Detta vakuum blod insamlingssystem har använts hos patienter och försöksdjur för en lång tid8,9,10. Detta system består av ett vakuum bloduppsamlingsrör med silikon belagda innerslang vägg och fjäril nål. Det var baserat på principen om vakuum undertryck och tillåter kontinuerlig ritningen av blod utan risken för blod insamling, vilket också minskar risken för kontaminering och hemolys11. Volymen av blodprov i katetern är cirka 0,3 mL. Efter drar nålen från svans venen, kommer blockeras i katetern blodflödet till samlande vakuumrör på grund av vakuum. Denna metod är också tillämplig för att samla blod från råttor som väger mindre än 100 gram med användning av en mindre punktering-nål.
Detta blod insamlingsmetoden har flera fördelar. Denna procedur endast orsakar minimal skada till råttor och blodinsamling kan utföras utan användning av bedövningsmedel, således påverkan av stress respons och bedövningsmedel på blodprovet kan undvikas. Våra observationer visade att råttor var tyst i besöksförbud plasthållare under förfarandet och det fanns inga dödsfall under dessa experiment. För det andra, upprepad blodinsamling var en eller två dagar är möjliga, vilket gör att frekvent provtagning av blod med en tillräcklig volym för olika forskningsändamål. Slutligen, denna metod är lätt att lära och var enkelt mastrad av nybörjare efter en kort (2 h) lärande, som indikeras av den liknande svarsfrekvenser och punktering gånger mellan experimentell och nybörjare i detta betänkande. I en tidigare rapport visade Lee et al. en liknande metod för provtagning blod från laterala svans ven av råtta4. Vår metod är enklare än som rapporterats av Lee et al. 4 i att vi direkt in nålen punktering i svansen venen och den andra änden av röret är direkt ansluten till vakuumrör för insamling av blod, utan användning av en extra spruta och manuell aspiration av blod och utan behov av ' mjölk ing' venen att underlätta blodflödet. Samla in blod med detta slutna system minskar risken för blod kontaminering. Användningen av besöksförbud plasthållare också minskar stressen att råttan och underlättar upptagning av svansen.
Följande två steg är avgörande för en framgångsrik tillämpning av denna metod. (1) förlänga svansen och undvika förflyttning av svansen; (2) försiktigt punktera venen i en vinkel på 20 ° att undvika punktering genom venen och hålla nålen punktering i venen.
Sammanfattningsvis, är metoden antagna vakuum blod insamling hos råttor säker, genomförbart och lätt att träna. Denna metod möjliggör frekvent provtagning av blod med en adekvat blodvolym som erhållits från icke-sövda råttor.
Disclosures
Författarna har ingenting att avslöja
Acknowledgments
Författarna har inga bekräftelser att göra.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
- Brown, C. Blood collection from the tail of a rat. Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods. Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).
- Lee, G., Goosens, K. A. Sampling blood from the lateral tail vein of the rat. J. Vis. Exp. (99), (2015).
- WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).
- Reynolds, B. S., et al. Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment. J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).
- Wiwanitkit, V. Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes. J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).
