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डिम्बग्रंथि के कैंसर के प्रारंभिक जांच के लिए एक वादा उपकरण के रूप में फेलिपियन ट्यूब के ट्यूबल साइटोजिज़

Published: July 25, 2017 doi: 10.3791/55887
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 3,4, 5,6
1Department of Pathology, University of Arizona College of Medicine, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Henan Provincial People's Hospital, 3Department of Obstetrics and Gynecology, University of Arizona College of Medicine, 4University of Arizona Cancer Center, 5Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 6Department of Obstetrics and Gynecology, University of Texas Southwestern Medical Center

Summary

हम डिम्बग्रंथि के कैंसर के शुरुआती पता के एक उपकरण के रूप में फैलोपियन ट्यूब के सीधे सर्जिकल छांटने के बाद नमूना करके एक ट्यूबल कोशिका तंत्र का पता लगाया। यहां, हम ताजा प्राप्त शल्य नमूने से फैलोपियन ट्यूब कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

Abstract

वर्तमान में, यह व्यापक रूप से स्वीकार किया जाता है कि डिम्बग्रंथि के उच्च-श्रेणी वाले द्रव कैसिनोमा (एचजीएससी) फैलोपियन ट्यूब से उत्पन्न होता है। हालांकि, डिम्बग्रंथि कैंसर की पहचान के लिए मार्करों या उपकरणों की कमी के कारण, एचजीएससी का शीघ्र पता चुनौतीपूर्ण है। फैलियोपियन ट्यूब का प्रत्यक्ष नमूना न्योप्लास्टिक कोशिकाओं का पता लगाने के लिए संवेदनशीलता बढ़ा सकता है जब ट्यूमर मोटे तौर पर दिखाई नहीं देता है। हमने हालिया शल्य नमूने से सीधे फैलोपियन ट्यूब कोशिकाओं को इकट्ठा करने की प्रक्रिया विकसित की है, जिसमें हिस्टोलॉजिकल निष्कर्षों के साथ उत्कृष्ट संबंध दिखाए गए हैं। यह दृष्टिकोण उच्च जोखिम वाले रोगी आबादी में न्यूनतम आक्रामक लैप्रोस्कोपिक स्क्रीनिंग की भावी उपयोगिता की नींव रखता है।

Introduction

डिम्बग्रंथि के उच्च-ग्रेड द्रव कार्सिनोमा (एचजीएससी) डिम्बग्रंथि के कैंसर का सबसे आम और घातक प्रकार है, और सार्वजनिक स्वास्थ्य के लिए एक बड़ा खतरा रहता है। पिछले एक दशक में, शोधकर्ताओं ने सुझाव दिया है कि एचजीएससी मामलों के विशाल बहुमत अंडाशय के बजाय 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 के बजाय फैलोपियन ट्यूब से उत्पन्न होते हैं। सीरस ट्यूबल इंटेरेपेटीयलियल कार्सिनोमा (एसटीआईसी) को व्यापक रूप से एचजीएससी 1 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 के अग्रदूत के रूप में स्वीकार किया जाता है। अब तक, डिम्बग्रंथि के कैंसर का शीघ्र पता लगाना मुश्किल बनी हुई है संयुक्त कैंसर एंटीजन 125 (सीए -125) और ट्रान्स्वावैजिन अल्ट्रासाउंड के साथ वर्तमान स्क्रीनिंग प्रोटोकॉल ने दिखाया हैरोगी मृत्यु दर 12 , 13 पर थोड़ा प्रभाव डिम्बग्रंथि के कैंसर का पता लगाने के लिए एंडोमेट्रियल नमूनाकरण ने बेहद कम संवेदनशीलता 14 दिखायी है दो अग्रणी अध्ययन 15 , 16 ने सौम्य फैलोपियन ट्यूबों के लैप्रोस्कोपिक प्रत्यक्ष नमूनाकरण का उपयोग किया और सौम्य ट्यूबल एपिथेलियम की कोशिका संबंधी विशेषताओं का वर्णन किया। हम मानते हैं कि फैलोपियन ट्यूब से सीधे नमूनाकरण प्रारंभिक चरण में एसटीआईसी या एचजीएससी का पता लगाने का व्यावहारिक और सीधा तरीका हो सकता है जब ट्यूमर इमेजिंग द्वारा नहीं देखा जाता है।

यद्यपि अंतिम लक्ष्य उच्च जोखिम वाले कारकों वाले रोगियों में न्यूनतम आक्रामक लैप्रोस्कोपिक स्क्रीनिंग की उपयोगिता है, वर्तमान अध्ययन के तत्काल लक्ष्य हैं: 1) सौम्य ट्यूबल एपिथेलिया की आधारभूत कोशिका संबंधी विशेषताओं को स्थापित करने के लिए; और 2) डिम्बग्रंथि के कैन्क का पता लगाने में ट्यूबल साइटोलोजी की संवेदनशीलता और विशिष्टता का परीक्षण करने के लिएओर्स और कैंसर के अग्रदूत हमने एचजीएससी और उसके अग्रदूत एसटीआईसी 17 की पहचान के लिए इस प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता का परीक्षण करने के लिए निम्न बेसलाइन ट्यूबल कोशिकाविज्ञान विधि विकसित की है। इस अध्ययन में, हम नियमित रूप से प्राप्त सर्जिकल नमूनों की बड़ी मात्रा का लाभ उठाया और नियमित रूप से कमाई प्रक्रियाओं के अलावा शल्यचिकित्सा से प्रेरित फैलोपियन ट्यूब का प्रत्यक्ष नमूनाकरण किया।

हमारे हाल के 17 अध्ययन से पता चला है कि घातक रोग के लिए साइबोलॉजिकल डायग्नोसिस या संदेह के लिए संदेह एचजीएससी (100%) के हिस्टोलॉजिकल डायग्नोसिस के साथ अत्यधिक सहसंबद्ध है। इसके अलावा, ट्यूबल कोशिका संबंधी मूल्यांकन ने इस अध्ययन में शामिल केवल दो histologically पुष्टि एसटीआईसी मामलों में इंट्रुटल्यूबल न्यूप्लासिया की पहचान की है। हमारा मानना ​​है कि ट्यूबल कोशिका विज्ञान के प्रारंभिक खोज में बहुत संभावनाएं हैं और मरीज प्रबंधन के लिए बहुमूल्य जानकारी प्रदान की जाएगी।

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Protocol

इस अध्ययन के आयोजन के लिए एरिज़ोना विश्वविद्यालय से एक संस्थागत समीक्षा बोर्ड की स्वीकृति प्राप्त हुई थी। ज्ञात रोगी सहमति फॉर्म प्राप्त किए गए थे।

1. रोगी चयन

नोट: एरिजोना विश्वविद्यालय से एक संस्थागत समीक्षा बोर्ड की मंजूरी प्राप्त की गई थी कुल 38 मरीजों की भर्ती की गई। मरीजों की उम्र 32 से 86 साल की उम्र से 55 साल की थी, जिनमें से 26 मरीज रजोनिवृत्ति के बाद थे और 12 मरीज़ पूर्व रजोनिवृत्ति थे।

  1. प्रत्येक रोगी से सूचित सहमति प्राप्त करें

2. फैलोपियन ट्यूब सेल संग्रह प्रक्रिया

नोट: वर्तमान अध्ययन में शामिल मरीज़ों को कुल हिस्टेरेक्टोमी और द्विपक्षीय सल्पिंगो-ओओफोरेक्टोमी के लिए निर्धारित किया गया था, जो रोगाणु जोखिम कम करने या दुर्दमता के लिए थे। सर्जरी का ब्योरा रोगविज्ञानी के लिए अज्ञात था, जिन्होंने कोशिका विज्ञान का अध्ययन किया।

  1. सर्जरी के तुरंत बादकैल छांटने, द्विपक्षीय फैलोपियन ट्यूब की पहचान करने के लिए गर्भाशय, द्विपक्षीय अंडाशय, और द्विपक्षीय फेलोपियन ट्यूबों सहित ताजा ऊतक नमूने की जांच करें।
  2. रक्त की आपूर्ति को रोकने के 30 मिनट के भीतर संरक्षक समाधान (सामग्री की तालिका देखें) शीशी में फैलोपियन ट्यूब कोशिकाओं को इकट्ठा और रखें; अनुशंसित परिरक्षक एक मेथनॉल-आधारित, बफर संरक्षक समाधान है।
    नोट: ट्यूबल सेल कलेक्शन (आगामी चरण) के लिए एक कोमल टच ब्रश का उपयोग करें। दुर्लभ मामलों में अपवाद के साथ जिसमें फैलोपियन ट्यूब को गर्भाशय से अलग किया जाता है, ट्यूबल फींब्रिआ से कोशिकाओं को एकत्र करने के लिए एक ब्रश सिर डालने से आम तौर पर तब होता है जब फैलोपियन ट्यूब गर्भाशय से जुड़ा होता है।
    1. एक छोटे संदंश की मदद से, फ़िम्ब्रिआ अंत के माध्यम से फैलोपियन ट्यूब के लुमेन में ब्रश ( सामग्री की तालिका देखें) डालें। धीरे-धीरे घूमने के लिए बारी बारी से और ब्रश को आगे गिरावट के infundibular भाग के माध्यम से आगे बढ़ेंओपियन ट्यूब, तब ampulla जब तक यह isthmus तक नहीं पहुंचता है।
    2. ब्रश को बाहर खींचने के लिए धीरे-धीरे ब्रश की बारी बारी से बारी बारी से घुमाएं और पीछे की तरफ बारी करें। सुनिश्चित करें कि लुमेन के भीतर ब्रश की अधिकतम गति 1 सेमी / एस से धीमी है
    3. घूर्णन और समाधान में 10 बार ब्रश में घूमते हुए संरक्षक समाधान (एक शीशी में) में ब्रश को कुल्ला।
    4. शीशी टोपी को कस लें
    5. रोगी की जानकारी और नमूना की पार्श्व्यता रिकॉर्ड करें
    6. एक 4 डिग्री सेल्सियस रेफ्रिजरेटर (ऊपर तक) 6 महीने में शीशी को स्टोर करें।

3. ट्यूबल कोशिका विज्ञान स्लाइड तैयार करना

  1. स्लाइड तैयारी के लिए स्वचालित प्रोसेसर में नमूना शीशी लोड करें।
    नोट: हम स्लाइड तैयारी के लिए स्वचालित प्रोसेसर का उपयोग करते हैं। नमूना शीशी प्रोसेसर में रखा गया है के बाद निम्नलिखित चरणों का स्वचालित रूप से प्रदर्शन किया जाता है: (i) नमूने के भीतर कोशिकाओं और मलबे को अलग-अलग और परीक्षण फिल्टर के रोटेशन के माध्यम से छितराया जाता हैशीशी। (Ii) ट्यूबल कोशिकाओं को कोमल वैक्यूम द्वारा फिल्टर की बाहरी सतह से एकत्र किया जाता है। (Iii) स्लाइड्स के भीतर परिपत्र क्षेत्र का पालन करने के लिए फिल्टर को उलटा और स्लाइड के विरुद्ध दबाया जाता है। (Iv) स्लाइड आगे एक सेल लगानेवाला स्नान में और स्थिरता और कोशिका विज्ञान विश्लेषण के लिए तैयार है। दुर्भाग्य से, कोई वैकल्पिक मैनुअल पद्धति नहीं है, जो समान गुणवत्ता वाले परिणाम प्राप्त कर सकती है।

4. संशोधित पपनिकोलाओ स्टीनिंग प्रोटोकॉल

  1. तालिका 1 में सचित्र के रूप में, स्टेप 3.1 से बने स्लेज, स्वचालनकृत गैर-जीन कलंक प्रक्रिया को चलाकर
    नोट: धुंधला विधि पैपनिकोलाओ स्टेनिंग तकनीक का एक संशोधन दर्शाती है जो कि हम नियमित रूप से गैर-गर्नेकोलाजिक नमूनों के लिए उपयोग करते हैं। कुछ स्लाइड्स को दाग करने के लिए हम एक स्वचालित ऊतक प्रोसेसर का उपयोग करते हैं। हमने इस अध्ययन में जीन धुंधला प्रक्रिया पर गैर-जीन धुंधला प्रक्रिया को चुना है। Eo-50 के उपयोग के लिए उपयोग किए जाने वाले ईओएसिन ईए -50 की बजाय उपयोग किया जाता हैस्त्री रोग संबंधी नमूने (पैप स्मीयर नमूना) इसके अलावा, जीएन धुंधला प्रक्रिया में ओजी -6, जो मुख्य रूप से स्क्वैमस सेल स्नेगिंग के लिए है, स्टेनाइजिंग प्रक्रिया में शामिल नहीं है क्योंकि इस अध्ययन में स्क्वैमस कोशिकाएं नहीं देखी जा सकती हैं। ईए 65 (ईोसिन एज़ूर) एक रंगीन दाग समाधान है जिसमें 3 रंजियां शामिल हैं: ईोसिन वाई, फास्ट हरी एफसीएफ और बीस्मारक ब्राउन वाई। प्रक्रिया तालिका 1 में सचित्र है।
  2. मैन्युअल त्वरित पेप कलंक प्रक्रिया को निम्न प्रकार से करें
    1. चरण 3.1 में 95% इथेनॉल, 10 बार किए गए स्लाइड को डुबकी, प्रत्येक डुबकी के बारे में 1 एस लेते हुए।
    2. एच 2 ओ, 10 बार में स्लाइड डुबकी, प्रत्येक डुबकी के बारे में 1 एस ले रही है
    3. 10 - 60 एस के लिए हेमटैक्साइलिन में स्लाइड उभर कर।
    4. एच 2 ओ, 10 बार में स्लाइड डुबकी, प्रत्येक डुबकी के बारे में 1 एस ले रही है
    5. स्लाइड के साथ 95% इथेनॉल, 10 गुना, प्रत्येक डुबकी के बारे में 1 एस लेते हैं।
    6. 1-3 मिनट के लिए ईए 65 में स्लाइड उभरिए
    7. स्लाइड int को डुबकीओ एच 2 ओ, 10 बार, प्रत्येक डुबकी के बारे में 1 एस लेने के साथ
    8. स्लाइड के साथ 95% इथेनॉल, 10 गुना, प्रत्येक डुबकी के बारे में 1 एस लेते हैं।
    9. स्लाइड स्पष्ट हो जाने तक एक्सलीन में स्लाइड डुबकी।
      नोट: यह एक संशोधित पपनिकोलाओ धुंधला प्रक्रिया है। इस विधि को सीमित समय या अंतरिक्ष के साथ मामलों के लिए अधिक तेज़ दाग विधि के रूप में उपयोग किया जाता है जैसे ऑन साइट सुई सुई की आकांक्षा और STAT नमूने। यह प्रक्रिया स्वत: गैर-जीन दाग प्रक्रिया के रूप में तुलनीय गुणवत्ता वाले धुंधला प्रदान करती है। प्रक्रिया तालिका 2 में सचित्र है

5. स्लाइड्स पर स्पिन सेल

नोट: प्रत्येक साइटमैप के लिए तीन साइटोस्पिन स्लाइड बनाए गए हैं। एक स्लाइड H & E को कोशिका विज्ञान स्लाइड के साथ आकृतित्मक तुलना के लिए दाग है। भावी आईएचसी के धुंधला अध्ययन के लिए दो अस्थिर स्लाइड बनाए गए थे। इस खंड के विस्तृत चरण इस पेपर का फ़ोकस नहीं हैं; इसलिए, हम उनसे विस्तारित डी में चर्चा नहीं करेंगेetails।

  1. लेबल की गई स्लाइड, नमूना फ़नल और प्रत्येक नमूने के लिए फ़िल्टर की जांच के लिए एक साइकोसेंट्रिफ्यूज तैयार करें।
  2. सेंटीफ्यूगिंग द्वारा कोशिकाओं को 200 x ग्राम पर 5 मिनट के लिए केंद्रित करें
  3. सतह पर तैरने वाले के बारे में आधे से निकालें और फिर कोमल pipetting द्वारा कोशिकाओं को फिर से निलंबित।
  4. नमूना फ़नल में प्रत्येक सेल निलंबन के 200 μL जोड़ें।
  5. 5 मिनट के लिए 250 xg पर स्पिन करें ध्यान से cytocentrifuge से स्लाइड (ओं) को हटा दें और उन्हें फिक्सेशन के लिए 95% इथनॉल में स्थानांतरित करें।
  6. धुंधला होने से पहले और लंबी अवधि के भंडारण के लिए हवा में सूखी
    नोट: अंतिम स्लाइड पर सेल घनत्व के आधार पर, चरण 5.2 और चरण 5.3 को छोड़ दिया या समायोजित किया जा सकता है। इस अध्ययन में, हमें पर्याप्त सेलुलर घनत्व के लिए कम से कम 2 सेल क्लस्टर प्रति उच्च शक्ति वाले दृश्य उपस्थित होने की आवश्यकता है।

6. फ़ेमिब्रेटेड एंड (एसईई-एफआईएम) प्रोटोकॉल की जांच और व्यापक रूप से जांच

  1. पूरे नमूना (गर्भाशय, द्विपक्षीय फेलोपियन ट्यूब और अंडाकार सहित) को ठीक करेंछूटने को कम करने के लिए कुल 10% में फॉम्ररीन से पहले
  2. छोटे संदंश और एक कैंची का उपयोग कर इस्तमा में गर्भाशय से फैलोपियन ट्यूबों को धीरे और सावधानी से अलग करें। यदि आसंजन मौजूद है, तो सावधानी से अंडाशय की सतह से छिद्रपूर्ण छिद्र काटना और छोटे संदंश और कैंची का उपयोग करें; ये चरणों अंडाशय और फैलोपियन ट्यूब के बीच अपने अंतरंग निकटता के कारण ट्यूमर क्रॉस डिस्पैमिनेशन को कम करने के लिए महत्वपूर्ण हैं
  3. शेष नमूना से अनफंडिबुलम और फ़िम्ब्रेइ सेगमेंट (बाहर की 1.0 - 2.0 सेमी फैलोपियन ट्यूब) का सेवन करें।
  4. खंड 2 मिमी अंतराल पर infundibulum और fimbriae longitudinally। हिस्टोलजिक परीक्षा के लिए सभी वर्गों को प्रस्तुत करें।
  5. अनुभाग 2 - 3 मिमी के अंतराल पर इस्तमास और आंवला और पूरी तरह से जमा करें।

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Representative Results

हमारे पिछले अध्ययन से पता चला कि एक कोमल टच ब्रश का उपयोग करके excised फैलोपियन ट्यूब से सीधे नमूना आगे मात्रात्मक मूल्यांकन के लिए मात्रात्मक और गुणात्मक पर्याप्त नमूना उपज सकता है। इसके अलावा, स्वचालित स्लाइड तैयार करने और संशोधित पपनिकोलाओ धुंधला के संयोजन, सही विश्लेषण करने के लिए पैथोलॉजिस्ट को बेहतर कोशिका विवरणों को देखने के लिए सक्षम करता है। एक सौम्य फैलोपियन ट्यूब से एक नमूने की मैन्युअल त्वरित पैप का दाग का एक उदाहरण चित्रा 1 में दिखाया गया है। जैसा कि चित्रा 1 में दिखाया गया है, ब्रश पैंतरेबाज़ी का नमूना नमूने का पर्याप्त नमूना है। इसके अलावा, पुस्तिका के त्वरित पेप का दाग परमाणु विवरण और कोशिका-स्त्राविक पारदर्शिता का अच्छा समाधान प्रदान करता है, जो ट्यूबल कोशिकाओं के सटीक मूल्यांकन के लिए आवश्यक है।

मैन्युअल त्वरित पैप सेंट के बीच की तुलनाचित्रा 2 में एक कोशिका विज्ञान स्लाइड और एच एंड ई के धुंधला होने की ऐन को दिखाया गया है। परंपरागत धब्बा के मुकाबले उपर्युक्त स्लाइड तैयारी के फायदों में से एक यह है कि इसकी परमाणु जानकारी और कोशिका-संबंधी पारदर्शिता का एक बहुत ही स्वच्छ पृष्ठभूमि और बेहतर समाधान है। फ़िलिपियन ट्यूब प्रोटोकॉल के SEE-FIM का एक उदाहरण चित्र 3 में दिखाया गया है। जैसा कि चित्रा 1 में दिखाया गया है, दो सेल आबादी (सिलिएटेड कोशिकाएं और सेक्रेटरी सेल) की उपस्थिति सौम्य ट्यूबल एपिथेलियम की एक विशेषता है। फिंब्रिआ और औपल्ला के प्रतिनिधि वर्गों के ऊतक-विच्छेद चित्रा 4 में दिखाया गया है। ब्रश पैंतरेबाज़ी लगभग एक तिहाई नमूना में विली संरचना की हल्की परेशानी दिखाती है।

हमारे पिछले 17 अध्ययन में, टयूबल कोशिका संबंधी निदान, हिस्टोलॉजिकल डायस के साथ सम्बंधित हैएचजीएससी का बहुत ही अच्छा ज्ञान (100%) दुर्दम्य की कोशिकात्मक उपस्थिति प्रमुख न्युक्लियोली और एनीन्यूक्लियोसिस ( चित्रा 5 ए ) वाले कोशिकाओं से बना तीन-आयामी समूहों को दर्शाती है। इसके विपरीत, एटीपीकल रिएक्टिव साइटोलॉजी को एंजियलेट शीट्स के रूप में प्रस्तुत किया गया है जो कि छोटे-छोटे नाभोली और मध्यम एनीनीक्ल्यूसीयस वाले तीन-आयामी क्लस्टरिंग ( चित्रा 5 बी ) के बिना परमाणु कोशिकाओं से बना है। एचजीएससी जैसे सेल समूहों को सामान्य उपकला कोशिकाओं ( चित्रा 6 ) के संयुग्मित शीट के संदर्भ में नोट किया गया था।

आकृति 1
चित्रा 1: सौहार्दपूर्ण ट्यूबल एपिथेलियम की मैनुअल कूपर पेप दाग का उदाहरण। ( ए ) पृष्ठभूमि कोशिकाएं पृष्ठभूमि कोशिकाओं में बड़े सेक्रेटरी कोशिकाओं और छोटे सेलीन कोशिकाओं से युक्त छोटे सेल क्लस्टरों में शामिल हैं, एक बड़ा (संभवत: सेकंडरेटरी कोशिकाएं) और छोटे (संभवतः सेमिएटेड कोशिकाएं) कोशिकाएं, बिखरे बड़े और छोटे नंगे नाभिक। ( बी ) लघु सेल क्लस्टर जिसमें छोटे से सेलीन कोशिकाओं और बड़े सेक्रेटरी कोशिकाओं (तीर) शामिल हैं। ( सी ) सिलिअटेड एपिथेलियम (तीर) का पट्टी ( डी ) मेसोथेलियल जैसी चादरें वाले ट्यूबल एपिथेलियम परिधि (तीर) पर चिपकने वाले कोष्ठ कोशिकाओं का उल्लेख किया गया इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

चित्र 2
चित्रा 2 चित्रा 2: एक cytology स्लाइड ( ए ) और एच एंड ई एक cytospin स्लाइड ( बी ) के धुंधला के मैनुअल त्वरित पैप दाग के बीच तुलना। एक सौम्य एंगुएटेड सेल क्लस्टर दोनों पेप दाग और एच एंड ई के दाग स्लाइड के केंद्र में मौजूद है। दोनों तरीके अच्छे प्रदान करते हैंनमूना के कोशिकीय मूल्यांकन के लिए संकल्प हालांकि, कोशिका विज्ञान स्लाइड के पेप का दाग एक क्लीनर पृष्ठभूमि उत्पन्न करता है इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

चित्र तीन
चित्रा 3: फैलोपियन ट्यूब के SEE-FIM का चित्रण। कृपया इन्फंडिबुलम और एफम्ब्रिए सेगमेंट के अनुदैर्ध्य सेक्शनिंग और इथमस और आंपुला के अनुप्रस्थ सेक्शन को ध्यान दें। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

चित्रा 4
चित्रा 4: सौम्य ट्यूबल एपिथेलियम का हिस्टोलियम।( ए ) फ़ेम्ब्रेए सेगमेंट ट्यूबल एपिथेलियम में दो अलग-अलग सेल आबादी होते हैं: छोटे सेलीबेटेड कोशिकाएं (तीर) और बड़े गैर-सीलीयेटेड स्राट्री कोशिकाएं (मंडलियां)। थोड़ा विला गड़बड़ी उल्लेखनीय है ( बी ) एम्प्ला सेक्शन। उंगली की तरह फ़िम्ब्रिया नोट करें ( सी ) विली संरचना (तीर) की हल्की परेशानी। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

चित्रा 5
चित्रा 5: एटीपीकल क्लस्टर ( ए ) और थ्री-डायमेंटल मैलिग्नेट क्लस्टर ( बी ) के बीच तुलना । घातक कोशिका विज्ञान प्रमुख न्युक्लीओली और एनीन्यूक्लियोसिस ( बी ) के साथ कोशिकाओं से बना तीन आयामी समूहों को दिखाता है। एटिप्पिकल साइटोलोजी एंग्यूअल शीट दिखाती हैछोटे नाभोली और मध्यम एनीन्यूक्लियोसिस के साथ असामान्य कोशिकाओं से बना है। नोट: कोई त्रि-आयामी क्लस्टरिंग मौजूद नहीं है ( ए )। यह आंकड़ा संदर्भ 17 से अपनाया गया है

चित्रा 6
चित्रा 6: इंट्रेटेपीथेलियल नेपलाशिया के cytological और histologic प्रकटन के बीच संबंध। ( ए ) साइटोलॉजिकल इन्ट्रुपुटल नेपलाशिया Cytological intratubal neoplasia सामान्य उपकला कोशिकाओं (तीर) के angulated चादरों के संदर्भ में तीन आयामी समोच्च और महत्वपूर्ण एनीन्यूक्लियोसिस और बड़े चेरी लाल nucleoli (वृत्त) के अधिग्रहण दिखा। ( बी ) ट्यूबल इंटरेपिटिलियल कार्सिनोमा के साथ संबंधित सर्जिकल पैथोलॉजी अनुभाग। अपेक्षाकृत सामान्य उपस्थिति उपकला कोशिकाओं (तीर) के आस-पास अत्यधिक डिस्प्लास्टिक कोशिकाओं (सर्कल) को ध्यान दें। यह आंकड़ा गया हैसंदर्भ 17 से अपनाया इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

</ तालिका>

तालिका 1: गैर-जीन दाग चरण

95% इथेनॉल 5 मिनट
एच 2 ओ 10 सेकंड
hematoxylin 15 सेकंड - 3 मिनट
डिस्टिल्ड एच 2 ओ 5 मिनट
95% इथेनॉल 30 सेकंड
EA65 2 - 5 मिनट
95% इथेनॉल 30 सेकंड
95% इथेनॉल 30 सेकंड
100% इथेनॉल 30 सेकंड
100% इथेनॉल 30 सेकंड
ज़ाइलीन 30 सेकंड
ज़ाइलीन 5 मिनट
95% इथेनॉल 10 डुबकी
एच 2 ओ 10 डुबकी
hematoxylin 10 सेकंड -1 मिनट
डिस्टिल्ड एच 2 ओ 10 डुबकी
95% इथेनॉल 10 डुबकी
EA65 1 - 3 मिनट
95% इथेनॉल 10 डुबकी
100% इथेनॉल 10 डुबकी
ज़ाइलीन स्पष्ट होने तक डुबकी

तालिका 2: मैनुअल त्वरित पेप दाग चरण

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Discussion

रोगनिरोधी द्विपक्षीय salpingectomy या salpingo-oophorectomy उच्च जोखिम आबादी में एचजीएस के विकास के जोखिम को कम करने के लिए दिखाया गया है, जैसे कि बीआरसीए जीन म्यूटेशन और मजबूत पारिवारिक कैंसर के इतिहास के साथ महिलाओं। हालांकि, सर्जरी की वजह से बाँझपन और सर्जिकल रजोनिवृत्ति गंभीर परिणाम हैं और एक मुश्किल निर्णय के लिए, विशेष रूप से प्रसव उम्र की महिलाओं के लिए। पिछले अध्ययन में ट्यूबल कोशिका विज्ञान और ऊतक विज्ञान 17 के बीच उत्कृष्ट संबंध दिखाया गया है। हमारा मानना ​​है कि लैपरसस्कोपिक रूप से एकत्र किए गए फैलोपियन ट्यूब कोशिकाओं पर ट्यूबल कोशिका विज्ञान में प्रारंभिक कैंसर का पता लगाने के लिए एक व्यावहारिक, कम से कम आक्रामक उपकरण बनने की बहुत संभावना है।

फेलोपियन ट्यूब सेल के सफल संग्रह के लिए सबसे महत्वपूर्ण कदम हैं: 1) रक्त की आपूर्ति और कोशिकाओं के संग्रह के clamping के बीच का समय; और 2) कोमल स्पर्श ब्रश के कोमल और सही पैंतरेबाज़ी

समय (30 मिनट के भीतरईएस) कोशिकाओं के क्लैम्पिंग और संग्रह के बीच महत्वपूर्ण कोशिकाओं के आकृति विज्ञान और परमाणु विवरणों के अच्छे संरक्षण के लिए महत्वपूर्ण है। पैथोलॉजिस्ट और सर्जनों के बीच प्रभावी संचार यह सुनिश्चित करता है कि इस अवधि के दौरान नमूना एकत्रित करने के लिए दिया गया है। अध्ययन में शामिल अधिकांश मामलों में जमे हुए खंड रूम में प्रदर्शन किया गया था। ट्यूबल कोशिकाओं को सफलतापूर्वक एकत्र करने के लिए, जिस व्यक्ति को संग्रह करता है, उसे जितना संभव हो उतना संभव प्रयास करना चाहिए, यदि यह केस घातक है तो स्टेजिंग निहितार्थ के कारण ब्रोश को डिम्बग्रंथि सीरस की सतह को स्पर्श करने से बचने के लिए संभव है। कभी-कभी इसमें शामिल होने वाले दो अंगों की निकटता और नमूना शरीर रचना की जटिलता के कारण यह मुश्किल हो सकता है। संग्रह के पूरा होने से पहले पूरे नमूना से फैलोपियन ट्यूबों का पृथक्करण किया जा सकता है।

इस अध्ययन में उपयोग किए गए कोमल टच ब्रश की एक बड़ी संख्या में कोशिकाओं को एकत्रित किया जा सकता है, जिन्हें आसानी से स्लाइड या एक संरक्षक समाधान शीशी में स्थानांतरित किया जा सकता है,और नहर में आघात को कम करने के लिए एक कोमल स्पर्श टिप बनाया गया है। इसके अलावा, पूरे पैंतरेबाज़ी धीमी और कोमल होने की जरूरत है ताकि ट्यूबल म्यूकोसा के विलायकों को गंभीर रूप से परेशान किया जा सके। कुछ मामलों में, रुकावट के कारण पूरे फैलोपियन ट्यूब ब्रश को पास करना मुश्किल हो सकता है। इसके बावजूद, यह माना जाता है कि एचजीएससी के बहुमत फैलोपियन ट्यूब के बाहर के अंत से निकलता है, क्योंकि यह माना जाता है कि चूंकि, फ़िब्रू और अनन्दिइंबुल्युलर भाग से कोशिकाओं को एकत्रित करने के लिए यथासंभव सर्वोत्तम प्रयास करना महत्वपूर्ण है। हालांकि, संग्रह को आगे नहीं बढ़ाना चाहिए अगर नमूना की अखंडता संभावित रूप से समझौता हो सकती है।

हमारे अनुभव के आधार पर, नमूना एकत्रित कोशिकाओं के आकारिकी से समझौता किए बिना कई महीनों तक परिरक्षक समाधान में संग्रहीत किया जा सकता है। पेपनिकॉलाओ का दाग साइकोथैथोलॉजी में आमतौर पर इस्तेमाल किया कोशिका संबंधी धुंधला तकनीक है। इस धुंधला प्रक्रिया के मुख्य लाभ में शामिल हैं: 1) परमाणु विस्तार की अच्छी परिभाषा;और 2) साइकोप्लासैमिस्टिक पारदर्शिता इस अध्ययन में, दो संशोधित पपनिकोलाओ का दाग प्रक्रिया ऑटैक्टिज्ड गैर-जीन धुंधला प्रक्रिया और त्वरित पेप कलंक प्रक्रिया सहित, कोशिका विज्ञान स्लाइड स्लेइंग के लिए उपयोग की जाती है। दोनों प्रक्रियाएं उत्कृष्ट और भरोसेमंद स्लाइड स्केनिंग देती हैं, जो परमाणु और cytoplasmic विवरणों के अच्छे संरक्षण और साफ पृष्ठभूमि को दर्शाती हैं। यद्यपि cytospin स्लाइड आमतौर पर कोशिका विज्ञान स्लाइड के साथ तुलना में अधिक पृष्ठभूमि है, उनके एच एंड ई के दाग सेल धुंधला हो जाना की समान गुणवत्ता का प्रदर्शन किया। यदि कोई स्वत: प्रोसेसर उपलब्ध नहीं है तो इन स्लाइड्स के एच एंड ई धुंधला हो जाना ट्यूबल कोशिका विश्लेषण के लिए एक उपयुक्त वैकल्पिक विधि हो सकता है।

इस अध्ययन में शामिल सभी फैलोपियन ट्यूबों को प्राप्त करने के लिए SEE-FIM प्रोटोकॉल का उपयोग किया जाता है, दोनों सौम्य और घातक मामलों सहित। एसईई-एफआईएम प्रोटोकॉल शुरू में बीआरसीए-पॉजिटिव प्रोफिलैक्टिक द्विपक्षीय सलिपो-ओओफ़ोरेक्टोमी नमूनों के लिए विकसित किया गया था, जो एक मानक जोखिम-कम करने वाला विकल्प हैया बीआरसीए उत्परिवर्तन वाहक यह प्रोटोकॉल ट्यूबल प्लासी के अधिक से अधिक जोखिम की अनुमति देता है, जिसमें से एसटीआईसी का अनुमान लगाया गया है। यह वर्तमान में एचजीएससी ट्यूबल एक्सटेंशन और एसटीआईसी का पता लगाने के लिए स्वर्ण मानक के रूप में लिया जाता है। वर्तमान अध्ययन प्रोटोकॉल की कार्यक्षमता को मान्य करने के लिए इस अध्ययन के लिए SEE-FIM हिस्टोलॉजिकल खोज के साथ ट्यूबल कोशिका संबंधी खोज के बीच का संबंध महत्वपूर्ण है।

सौम्य स्पर्श ब्रश का उपयोग करके ट्यूबल सेल संग्रह की एक चिंता यह है कि पैंतरेबाज़ी ट्यूबल एपिथेलियम की अखंडता को परेशान कर सकती है और सर्जिकल नमूनों, विशेष रूप से ट्यूमर के स्टेजिंग की सटीक हिस्टोलॉजिकल व्याख्या को बाधित कर सकती है, अगर दुर्दम्य की पहचान की जाती है। हालांकि, हमारे अनुभव के आधार पर, लगभग एक-तिहाई मामलों में विली के हिस्टोलॉजी विश्लेषण पर हल्की परेशानी दिखती है, जो आम तौर पर ट्यूबल हिस्टोलोजी की अंतिम व्याख्या में हस्तक्षेप नहीं करती है।

हमारे पिछले अध्ययन से पता चला है कि ट्यूबल कोशिका विज्ञान संवेदनशील और विशिष्ट हैएचजीएससी और एसटीआईक का पता लगाने में आईसी यह आगे की जांच करने के लिए बहुत दिलचस्पी होगी कि पीओएस 3 और आईएमपी 3 जैसे बायोमार्कर धुंधला होने के साथ ट्यूबल साइटोलोजी के संयोजन में ट्यूबल मूल के सीरस कैंसर का पता लगाने की संवेदनशीलता और विशिष्टता बढ़ सकती है। भविष्य के अध्ययन में विवो में फैलोपियन एपीथेलियम नमूनाकरण के लिए लैप्रोस्कोपिक प्रक्रिया विकसित करने पर ध्यान दिया जाएगा।

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Disclosures

लेखकों ने घोषणा की कि उनके पास कोई प्रतिस्पर्धात्मक वित्तीय हित नहीं है

Acknowledgments

वित्तीय सहायता के लिए लेखक, पैथोलॉजी विभाग, एरिज़ोना विश्वविद्यालय को स्वीकार करना चाहते हैं। परियोजना को आंशिक रूप से मार्क और जेन गिब्सन एंडॉवमेंट फंड को डब्ल्यूजेड द्वारा समर्थित है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cytobrush plus GT gentle touch of Medscand sample collection kit CooperSurgical C0112
ThinPrep preservCyt solution HOLOGIC 234005
ThinPrep 2000 Processor HOLOGIC 70031-001
Papanicolaou Stain, EA 65 sigma aldrich HT40432
95% Ethanol sigma aldrich 652261
100% Ethanol sigma aldrich 493538
Xylene sigma aldrich 214736
Hematoxylin sigma aldrich H9627
Sakura Tissue Tek 2000 tissue processor SAKURA TISSUE-TEK VIP 2000
Mayo Dissecting Scissors,5.5 straight Pilgrim medical equiment FA710-45
Chemware Forceps United state plastic corp 76122
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades,short SAKURA 4785
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades handle,short SAKURA 4786

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References

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चिकित्सा अंक 125 ट्यूबल कोशिका विज्ञान उच्च-श्रेणी के द्रव कार्सिनोमा सीरस ट्यूबल इंटेरेपेटीयलियल कार्सिनोमा शीघ्र पहचान कार्सिनोमा फैलोपियन ट्यूब
डिम्बग्रंथि के कैंसर के प्रारंभिक जांच के लिए एक वादा उपकरण के रूप में फेलिपियन ट्यूब के ट्यूबल साइटोजिज़
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Chen, H., Klein, R., Arnold, S., Wang, Y., Chambers, S., Zheng, W. Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection. J. Vis. Exp. (125), e55887, doi:10.3791/55887 (2017).

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