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Artículo de método

Semiautomatizado Longitudinal basado en la tomografía Microcomputed cuantitativo análisis estructural de un modelo de rata desnuda fractura Vertebral relacionada con la Osteoporosis

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DOI:

10.3791/55928

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28 de septiembre de 2017

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En este artículo

Resumen

El objetivo de este protocolo es generar un modelo de fractura de compresión vertebral relacionada con la osteoporosis rata desnudo que puede ser evaluados longitudinalmente en vivo usando un microcomputed semiautomatizado basado en tomografía cuantitativa análisis estructural.

Resumen

Las fracturas de compresión vertebrales relacionadas con la osteoporosis (OVCFs) son una necesidad común y clínicamente no satisfecha con el aumento de prevalencia como las edades de la población de mundo. Modelos OVCF animales son esenciales para el desarrollo preclínico de estrategias de ingeniería de tejido traslacional. Mientras que en la actualidad existe un número de modelos, este protocolo describe un método optimizado para la inducción de defectos vertebrales altamente reproducibles múltiples en una sola rata desnuda. Una tomografía de la novela microcomputed semiautomatizado longitudinal (µCT)-basado en análisis estructural cuantitativa de los defectos vertebrales también se detallan. Brevemente, las ratas fueron reflejadas en múltiples puntos de tiempo post operatorio. La exploración de día 1 fue reorientada a la posición estándar y se define un volumen de interés. Exploraciones posteriores µCT de cada rata fueron registradas automáticamente para la exploración del día 1 por lo que el mismo volumen de interés entonces se analizaron para evaluar para la nueva formación del hueso. Este enfoque versátil adaptable a una variedad de otros modelos donde análisis longitudinal basado en la proyección de imagen podrían beneficiarse de una alineación exacta 3D. semiautomatizada. Tomados en conjunto, este protocolo describe un sistema fácilmente cuantificable y fácilmente reproducible para la investigación de la osteoporosis y del hueso. El protocolo sugerido toma 4 meses para inducir osteoporosis en ratas ovariectomizadas desnudas y entre 2,7 y 4 h para generar, de la imagen y analizar dos defectos vertebrales, dependiendo del tamaño del tejido y el equipo.

Introducción

Más de 200 millones de personas en todo el mundo sufren de osteoporosis1. Patológico subyacente disminución de la densidad mineral ósea (DMO) y microarquitectura ósea alterada aumentar la fragilidad del hueso y, consecuentemente, el riesgo relativo de fractura2. La osteoporosis es tan frecuente y nocivo para la salud que la OMS ha definido una preocupación de salud pública importante. Además, como la población mundial se espera que a la edad, osteoporosis se espera llegar a ser aún más común.

Las fracturas de compresión vertebrales osteoporóticas son las fracturas más comunes de fragilidad, es....

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Protocolo

todos los experimentos con animales se realizaron bajo un protocolo aprobado por el cuidado institucional del Animal y el Comité uso (IACUC) de Cedars-Sinai Medical Center (protocolo # 3609). Se administró anestesia para todos los procedimientos quirúrgicos e imágenes. Todos los animales fueron alojados según los protocolos aprobados de IACUC.

Nota: el diseño experimental de este protocolo se muestra en la figura 1. Compra de ratas de 6 semanas de edad con sus ovarios quirúrgicamente removido y darles de comer un LCD compuesto por fosfato de calcio y 0.77% 0.01%. Después de un período de 4 meses de un LCD, p....

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Resultados

Mediante este protocolo, una imagen y cuantificar la regeneración de n = 8 defectos vertebrales osteoporóticas modeladas a través de diferentes puntos temporales. La coincidencia anatómica obtenida por el procedimiento de registro permite el análisis del misma VOI todos los puntos de tiempo. Esto resulta en un análisis histomorfométrico 3D longitudinal altamente preciso, incluso cuando ya no son reconocibles los márgenes del defecto original. Utilizamos cinco puntos de tiempo (día 1, sema.......

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Discusión

La osteoporosis es la causa más frecuente de las fracturas de compresión vertebral causada por una carga mayor sobre la columna vertebral y que resultan en el colapso del cuerpo vertebral. Sin embargo, es prácticamente imposible generar una lesión en un roedor que auténticamente Replica similar colapso vertebral. En cambio, los investigadores crean un vacío cilíndrico en el centro del cuerpo vertebral para imitar OVCFs16,17,18

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Divulgaciones

Esta investigación fue apoyada por una beca del Instituto de California de medicina regenerativa (CIRM) (TR2-01780).

Agradecimientos

La investigación fue apoyada por una beca del Instituto de California de medicina regenerativa (CIRM) (TR2-01780).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
IsofluranoMWI Salud Animal, Pasadena, CA501017
BetadineSolutionMWI Salud Animal, Pasadena, CA4677
Gluconato de clorhexidina 2% exfolianteMWI Salud Animal, Pasadena, CA510083
Alcohol isopropílico 70% cuartoMWI Salud Animal, Pasadena, CA501044
CarprofenoMWI Salud Animal, Pasadena, CA26357
Buprenorfina 0,3 mg/mLMWI Animal Health, Pasadena, CA56163
Ratas desnudas atímicas ovariectomizadasHarlan Laboratories, Indianápolis, INHsd:RH-Foxn1 rnu
Alimento bajo en calcioNewco Distributors, Inc., CA 1814948(5AV8 AIN-93M con bajo contenido de calcio)
Solución salina tamponada con fosfatoLife Technologies Corporation
DermabondJ AND J ETHICONDHVM12
Máquina de anestesiaPatterson ScientificTEC 3EX
Cámaras de inducción con tapa deslizantePatterson Scientific78917833
ProStation Estación de trabajo calefactadaPatterson Scientific78914731
paño quirúrgicoHALYARD HEALTH INC89101
Sistema de retracción del fijador magnéticoFine Science Tools, Inc., CA18200-50
Tijeras de disección, 10 cm, curvadas, SSWorld Precision Instruments, FL14394
Tijeras de iris, 11,5 cm, 45 ° Ángulo, dentado, afilado/afiladoWorld Precision Instruments, FL
, n.º 5World Precision Instruments, FL555048FT
Micro Pinzas Hemostáticas para MosquitosWorld Precision Instruments, FL503360
Gasa de algodón estérilMedtronic, MINNEAPOLIS, MN9024
Lanzas de absorción - Montadas/estérilesFine Science Herramientas, CA18105-01
Jeringa, 1 mLTERUMO TERUMO MEDSS-01T
Aguja, calibre 25BD MED SYS INYECCIÓN SYS
Campana de flujo laminarBakerSterilGARD e3-Clase II Tipo A2 Cabina
de cauterio térmicoWorld Precision Instruments, FL
Microtaladro OmniDrill115/230VWorld Precision Instruments, FL503598
Trefinas para Micro Taladro, 2 mm de diámetroFine Science Tools, CA18004-20
3-0 Vicryl sin teñir 27" SH taperJ AND J ETHICON1663G
4-0 Ethilon negro 18" Corte convencional PC3J AND J ETHICON1954G
Conebeam in vivo microCT (vivaCT 40)Scanco MedicalvivaCT 40
SCANCO Medical paquete de software de sistemas microCTScanco MedicalvivaCT 40
Analyze softwareBiomedical Imaging, Mayo Clinic, Rochester, MNAnalyze 12Software de análisis
de imágenes Veterenery eye opomada
14190250 Pinzas 503225 305127 de bioseguridad Unidad 501292

Referencias

  1. Wang, M. L., Massie, J., Perry, A., Garfin, S. R., Kim, C. W. A rat osteoporotic spine model for the evaluation of bioresorbable bone cements. Spine J. 7 (4), 466-474 (2007).
  2. Consensus development conference: prophylaxis and treatment of osteoporosis. Am J Med

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