Linfoma del manto (MCL) es un difícil de tratar el trastorno de la célula de B y es igualmente difícil establecer un modelo de ratón de xenoinjerto de MCL primaria a estudiar y desarrollar la terapéutica. Aquí, describimos el establecimiento acertado de xenoinjertos MCL en ratones para ayudar a comprender su biología subyacente.
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Artículo de método
Engraftment de tumor en un modelo de ratón de xenoinjerto de linfoma de manto humano
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Resumen
Resumen
Los linfocitos B son actores clave en la circulación de células inmunitarias y principalmente hogar y residen en los órganos linfoides. Mientras que las células B normales sólo proliferan cuando estimulados por los linfocitos T, células B oncogénicas sobrevivirán y amplían autónomamente en nichos de órgano indefinido. Linfoma del manto (MCL) es un tal trastorno de la célula de B, donde la tasa mediana de supervivencia de los pacientes es 4-5 años. Esto requiere la necesidad de mecanismos efectivos por que se bloquean el autoguiado hacia el blanco y el injerto de estas células con el fin de aumentar la supervivencia y longevidad de los pacientes. Por lo tanto, el esfuerzo para desarrollar un modelo de ratón de xenoinjerto para estudiar la eficacia de la terapéutica MCL bloqueando la recalada mecanismo en vivo es de suma importancia. Desarrollo de receptores animales para xenotransplante de células humanas para probar drogas etapa temprana largo han sido perseguido, como modelos de ratón preclínicos relevantes son cruciales para nuevos agentes terapéuticos pantalla. Este modelo animal se desarrolla para evitar el rechazo al injerto humano y establecer un modelo para enfermedades humanas, y puede ser una herramienta extremadamente útil para el estudio de progresión de la enfermedad de tipos diferentes de linfoma y para efectuar la prueba preclínica de fármacos candidatos para malignidades hematológicas, como MCL. Hemos establecido un modelo de ratón de xenoinjerto que servirá como un excelente recurso para estudiar y desarrollar nuevos enfoques terapéuticos para MCL.
Introducción
Linfocitos por naturaleza un papel importante en la vigilancia inmune, y trata de linfocitos es un paso crítico en la inmunidad específica de antígeno1,2de montaje. Este proceso incluye la migración de linfocitos T del timo al torrente sanguíneo y de allí a los órganos linfoides secundarios, incluyendo los ganglios linfáticos, placas de Peyer y bazo, donde se encuentran los antígenos afines. Los linfocitos B diferencian en la médula ósea y migran como ingenuo células en los folículos de los órganos linfoides secundarios3. Algunas de estas células B antígeno con su receptor unen y son ac....
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Protocolo
Las muestras de sangre humana fueron utilizadas según procedimientos aprobados por los comités de experimentación humana del Hospital Universitario de Ginebra y de ética local.
Animales procedimientos fueron realizados según el institucional ética Comité de Animal Care en Ginebra, Suiza y la Oficina veterinaria Cantonal (número de autorización: 26/GE/15).
1. preparación de células mononucleares de sangre periférica primaria (PBMCs) por separación de gradiente de densidad
Nota: 3-5 mL de sangre periférica se obtuvo de pacientes con MCL en una fase leucémica. El diagnóstico fue establecido....
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Resultados
El manuscrito describe un protocolo optimizado para el desarrollo exitoso de un modelo de ratón de xenoinjerto de engraftment de células MCL. Preparación de una población celular pura (en este caso células MCL), es muy crítico para desarrollar exitosos xenoinjertos MCL. La figura 1 representa los pasos preparativas para el aislamiento de células mononucleares de sangre del paciente MCL por separación de gradiente de densidad. Las células mononucleares son pro.......
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Discusión
Los ensayos clínicos son posibles para los medicamentos que están en una etapa avanzada de desarrollo pero no se puede utilizar para el descubrimiento de medicamentos. Esfuerzos para desarrollar a animales destinatarios para xenotransplante de células humanas para probar drogas etapa temprana largo han sido llevadas a cabo. Aquí presentamos un modelo animal que evita el rechazo al injerto humano y puede establecer un modelo para enfermedades humanas, como MCL. Esto es en la actualidad un modelo de xenoinjerto de vanguard.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros que compiten.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Ligue Genevoise contre le Cancer, Fundación Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 y 2914-02-2012 y subvención de Fundación de ciencia nacional suizo 31003A_156760 y 310030-153456.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Medios Ficoll-paque | GE Healthcare | 17-1440-02 | para la separación de células mononucleares |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | para la dilución de muestras de sangre |
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | lavado de células |
| Albúmina sérica bovina (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | para la preparación de PBS con 1% de BSA utilizado en el lavado de células durante el aislamiento |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | marcador de células pan-B humanas |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | marcador de células pan-B humanas |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | marcador de células pan-B humanas |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | marcador |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Proteína de superficie celular típicamente ausente en MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Marcador panleucocítico |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Proteína de superficie celular típicamente ausente en ratones MCL |
| NOD scid gamma (NSG) | Charles River Laboratories | 5557 | utilizado para desarrollar xenoinjertos MCL en este estudio |
| Kit de enriquecimiento de células B humanas Easy sep | Tecnologías de células madre | 19054 | utilizadas para enriquecer células B para obtener células puras para inyectar en ratones |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | utilizado para caracterizar la muestra de MCL y estudiar los órganos para el injerto de MCL |
| 1X tampón | tampón de lisis de sangre roja (NH4Cl 8,024 mg / l; KHCO3 1.001 mg/l; EDTA. Na2 y punto medio; 2H2O 3.722 mg/l ) |
Referencias
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J.
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Reimpresiones y permisos
