Summary
' चूहों चिंता-जैसा व्यवहार ऊंचा प्लस भूलभुलैया द्वारा परीक्षण किया उच्च परीक्षण वातावरण के आधार पर बदलता है. यहाँ हम कैसे तंत्र सेटिंग्स, विशेष रूप से हाथ संरचना, भूलभुलैया पर व्यवहार को प्रभावित दिखाने के लिए, और हम anxiolytic दवाओं के प्रभाव का पता लगाने के लिए एक विश्वसनीय प्रोटोकॉल की व्याख्या. इस रिपोर्ट में चिंता अनुसंधान का योगदान होगा ।
Abstract
ऊंचा प्लस भूलभुलैया टेस्ट कुतर में पशु चिंता का आकलन करने के लिए एक व्यवहार परीक्षण है । हालांकि इस परीक्षण व्यापक रूप से व्यवहार विज्ञान के क्षेत्र में लागू किया जाता है, परस्पर विरोधी परिणाम अक्सर विभिंन प्रयोगशालाओं से प्रदान की जाती हैं । विभिंन परिणामों के लिए कारणों की पहचान करने के लिए, हम पहले हाथ सुविधाओं, जो प्रयोगशालाओं के बीच अलग है पर ध्यान केंद्रित, सबसे विशेष रूप से उपस्थिति/खुले हाथ की दीवारों की पारदर्शिता/ पिछले एक रिपोर्ट में, हम एक कस्टम डिजाइन कंटेनर का इस्तेमाल किया अंयथा समान प्रयोगात्मक शर्तों के तहत खुले और बंद बांह डिजाइन के विभिंन संयोजनों पर चूहे व्यवहार की तुलना, और दिखाया है कि एआरएम सुविधाओं में अंतर प्रयोगात्मक के साथ हस्तक्षेप परिणाम. संक्षेप में, खुले हाथ कगार काफी चिंता बढ़ चूहों में व्यवहार की तरह है, जबकि पारदर्शी हथियार भी इस व्यवहार में कमी हो सकती है । इसके अलावा, हम नहीं-कगार खुले हाथ के संयोजन में एक anxiolytic दवा के प्रभाव का एक उच्च का पता लगाने की संवेदनशीलता सत्यापित + अपारदर्शी दीवारों बंद हाथ की तुलना में कगार खुले हाथ का एक संयोजन के साथ + पारदर्शी दीवारों बंद बांह । इस रिपोर्ट में, हम उन्नत प्लस भूलभुलैया परीक्षण के लिए हमारे प्रोटोकॉल का परिचय, एक साथ पिछले रिपोर्ट से महत्वपूर्ण परिणामों की चर्चा और हमारे प्रायोगिक अनुभव के साथ. हमारा मानना है कि यह रिपोर्ट उन शोधकर्ताओं के लिए उपयोगी जानकारी प्रदान करेगी जो कार्यरत हैं या जिन्होंने अपनी पढ़ाई में उन्नत प्लस भूलभुलैया का उपयोग करने की योजना बनाई है ।
Introduction
चिंता-विकार और अवसाद सहित मूड विकारों से पीड़ित रोगियों की संख्या बढ़ती जा रही है. हालांकि इन विकारों के विकास दोनों आनुवंशिक और पर्यावरणीय कारकों शामिल है, विस्तृत रोगजनक तंत्र अभी तक पूरी तरह से1समझ में नहीं आ रहे हैं । इसलिए, अनुसंधान के मूड विकारों के अंतर्निहित तंत्र को उजागर करने पर ध्यान केंद्रित करने की जरूरत है, साथ ही प्रभावी दवाओं है कि कम साइड इफेक्ट है के विकास ।
प्रयोगशाला जानवरों के लिए व्यवहार परीक्षण भावना सहित मस्तिष्क उच्च समारोह, की जांच के लिए उपयोगी होते हैं । के रूप में पशु व्यवहार अत्यधिक परिवर्तनशील है, प्रयोगात्मक परिणाम अक्सर प्रयोगशालाओं के बीच अलग है, भले ही एक समान नस्ल तनाव2इस्तेमाल किया गया था । इस प्रकार, शोधकर्ताओं को भी प्रयोगात्मक उपकरणों वे अपनाने के क्रम में प्रयोगशाला में विश्वसनीय, सटीक परिणाम प्रदान की बुनियादी सुविधाओं को समझने की जरूरत है ।
ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण मूल रूप से कुतर3,4में भावनात्मक जेट की जांच करने के लिए स्थापित किया गया था । पूरे तंत्र आमतौर पर फर्श के ऊपर ५०० मिमी स्थित है, और दो खुले और दो बंद हथियार है कि एक प्लस आकार बनाने के होते हैं । बांह की खोज की माप (प्रत्येक शाखा पर प्रविष्टियों की अवधि और आवृत्ति सहित), दूरी की यात्रा की, और निर्दिष्ट व्यवहार के रूप में इस तरह के विषय जानवरों की तनी-भाग लेने आसन प्रेक्षणीय अवधि के दौरान दर्ज की गई हैं । इन उपायों के द्वारा, पशु चिंता एक प्रयोगात्मक परिणाम के रूप में अनुमान है ।
ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण दुनिया भर में प्रयोग किया जाता है, लेकिन सभी प्रयोगशालाओं एक ही उपकरण डिजाइन5,6का उपयोग करें, और इन मतभेदों प्रयोगात्मक परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं । उदाहरण के लिए, मतभेदों की उपस्थिति या खुले हथियार और/या बंद हथियार5,6के लिए पारदर्शी या अपारदर्शी दीवारों के उपयोग के साथ कगार की अनुपस्थिति शामिल हैं । खुली बाहों के साथ कगार और बंद हथियारों के लिए पारदर्शी दीवारों के उपयोग के लिए बंद तंत्र7गिरने जानवरों को रोकने के लिए विकसित किया गया है, और बंद हथियार, क्रमशः8,9के अंदर व्यवहार टिप्पणियों की सुविधा । हालांकि वहां कुछ अध्ययनों कि जांच कैसे व्यक्तिगत हाथ संरचना मतभेदों को पशु चिंता1,2,5,10,11 का पता लगाने की क्षमता को प्रभावित कर सकता है गया है , खुले के संयुक्त प्रभाव (साथ/कम कगार के बिना) और बंद (पारदर्शी/अपारदर्शी दीवारें) पशु के व्यवहार पर एआरएम की सुविधाओं की अभी तक कोई जांच नहीं हुई है ।
एक ताजा रिपोर्ट में, हम चिंता पर हाथ डिजाइनों के इन संयोजनों के प्रभाव की तरह व्यवहार पर चर्चा की12चूहों में । संक्षेप में, खुले हाथ कगार काफी चिंता बढ़ चूहों में व्यवहार की तरह है, जबकि पारदर्शी हथियार भी इस व्यवहार में कमी हो सकती है । इसके अलावा, हम नहीं के संयोजन में एक anxiolytic दवा के प्रभाव की उच्च जांच संवेदनशीलता सत्यापित-कगार खुली बांह + अपारदर्शी दीवार बंद बांह का एक संयोजन के साथ तुलना में खुली बांह + पारदर्शी दीवारों बंद बांह । इस रिपोर्ट में, हम पिछले रिपोर्ट से महत्वपूर्ण परिणामों की चर्चा के साथ-साथ, उन्नत प्लस भूलभुलैया परीक्षण के लिए हमारे प्रोटोकॉल का परिचय देंगे. हमारा मानना है कि इस रिपोर्ट में जो लोग कार्यरत है या जो अपनी पढ़ाई में ऊंचा प्लस भूलभुलैया का उपयोग करने की योजना के लिए उपयोगी जानकारी प्रदान करेगा ।
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Protocol
यहाँ वर्णित सभी प्रायोगिक प्रक्रियाओं को संस्थागत पशु परिचर्या एवं उपयोग समिति मीजी विश्वविद्यालय (IACUC १४-0002 (१)) द्वारा अनुमोदित किया गया है. प्रतिनिधि परिणामों में प्रयुक्त पशु इस प्रकार के रूप में तैयार किया गया: पुरुष Sprague-Dawley चूहों एक प्रयोगशाला पशु कंपनी से खरीदे गए थे और मानक चूहे पिंजरे (W200 × D410 × H250 मिमी) प्रति 4 पशुओं के समूहों में घर के शुरू होने से पहले कम से एक सप्ताह के लिए व्यवहार प्रयोग. पशु आवास कक्ष प्रकाश के लिए मानक परिवेश की स्थिति में बनाए रखा गया था (12:12 प्रकाश/पर रोशनी के साथ अंधेरे अनुसूची 10:00 ज), कमरे के तापमान (२५.० ± ०.५ डिग्री सेल्सियस), आर्द्रता (५५ ± 10%), और वेंटिलेशन (10 बार/ज), और जानवरों के भोजन के लिए विज्ञापन libitum का उपयोग किया था ( ओरिएंटल खमीर कं, लिमिटेड, टोक्यो, जापान) और पानी । जानवरों के कागज बिस्तर (अल्फा-ड्राइ, LSG Corporatin, टोक्यो, जापान) के साथ एक मानक चूहे पिंजरे (W410 x D250 x H200 mm, Toyoriko कं, लिमिटेड, आईची, जापान) में रखा गया था ।
1. ऊंचा प्लस भूलभुलैया टेस्ट
- एक स्वनिर्धारित कंटेनर में ऊंचा प्लस भूलभुलैया तंत्र की स्थापना (W1, 500 × D1, 500 × H2, 000 मिमी) (आंकड़ा 1a) एक प्लस के आकार का धातु ढांचा ५०० mm फर्श से ऊपर के साथ चलाने का रास्ता हथियार (आंकड़ा 1b) का समर्थन करने के लिए, कंटेनर छत में प्रकाश आवश्यक प्रकाश तीव्रता (चित्रा 1C) के लिए भूलभुलैया की सतह रोशन, और केंद्र की छत में एक डिजिटल वीडियो कैमरा व्यवहार परीक्षण (चित्रा 1C) के लाइव वीडियो निगरानी सक्षम करने के लिए.
- हथियारों को ठीक करें (L500 x W100 mm) प्लस आकार के ढांचे पर, और उसके बाद चार हथियारों के केंद्र में वर्ग केंद्रीय मंच (W100 x D100 mm) तय (1 d -F) ।
नोट: हमारी प्रयोगशाला में, हमारे पास दो प्रकार के ओपन आर्म्स (L500 x W100 mm) और दो प्रकार के बंद आर्म्स (L500 x W100 x H450 mm) (figure d) हैं । बंद हथियार या तो पारदर्शी या अपारदर्शी दीवारों (चित्रा 1 डी), और खुले हथियारों के साथ या एक छोटी कगार (H5 mm, चित्रा 1E) के बिना डिजाइन किए हैं । स्क्वायर सेंट्रल प्लेटफार्म (W100 × D100 mm) चार हथियारों के केंद्र में रखा गया है (आंकड़ा 1 डी -एफ) । इस प्रकार, हथियारों के निंनलिखित चार संयोजन प्रयोगात्मक प्रयोजन के अनुसार तैयार किया जा सकता है: कगार के साथ खुला हथियार + पारदर्शी दीवारों के साथ बंद हथियार (कगार/पारदर्शी), कगार के साथ खुला हथियार + अपारदर्शी दीवारों के साथ बंद हथियार (कगार/ कगार के बिना + पारदर्शी दीवारों के साथ बंद हथियार (नहीं-कगार/पारदर्शी), और कगार के बिना खुले हथियार + अपारदर्शी दीवारों के साथ बंद हथियार (नहीं-कगार/ एआरएम रनवे की सतह काला है, स्वचालित व्यवहार विश्लेषण सॉफ्टवेयर द्वारा बेहतर जानवर अनुरेखण सक्षम करने के लिए, के रूप में खंड 2 में वर्णित है, व्यवहार विश्लेषण । - लगभग १०० लक्स करने के लिए प्रत्येक बांह और केंद्रीय मंच के बाहर के अंत भाग की सतह पर प्रकाश की तीव्रता को समायोजित करें ।
- प्रत्येक परीक्षण से पहले, ७०% इथेनॉल समाधान के साथ पूरे तंत्र को साफ और आसुत जल के साथ पोंछ ।
- डिजिटल वीडियो कैमरा है कि वीडियो इमेजिंग खंड 2, व्यवहार विश्लेषण में वर्णित विश्लेषण के लिए चूहे के व्यवहार को रिकॉर्ड करेगा शुरू करने के लिए हार्ड डिस्क रिकॉर्डर पर "रिकॉर्ड बटन" पर क्लिक करें ।
- केंद्रीय एक खुले हाथ का सामना करना पड़ मंच पर एक जानवर प्लेस और 5 मिनट के लिए उपकरण पर मुक्त अंवेषण की अनुमति ।
- रिकॉर्डिंग समाप्त करने के लिए हार्ड डिस्क रिकॉर्डर पर "stop बटन" क्लिक करें ।
- पशु आवास कमरे में परीक्षण पशु लौटने के बाद मल और पेशाब की संख्या गिनती ।
- प्रयोग के अंत तक चरण १.४ से दोहराएं ।
नोट: एक शुष्क परीक्षण रन हमेशा के लिए प्रत्येक प्रयोग शुरू करने से पहले बाहर किया जाता है कि सभी प्रयोगात्मक सेटिंग्स सही ढंग से सेट कर रहे है करने से पहले किसी भी प्रयोगात्मक पशुओं प्रयोगात्मक शर्तों को उजागर कर रहे हैं । अंयथा, कुछ जानवरों, विशेष रूप से पहले पशु विभिन्न पर्यावरणीय स्थितियों का अनुभव हो सकता है (उदाहरणके लिए, शोर संभवतः पहले से परीक्षण पशु द्वारा छोड़ दिया हेरफेर और/या पशु cues के दौरान प्रयोगकर्ता द्वारा प्रेरित) ।
नोट: जब किसी जानवर का परीक्षण किया जा रहा हो तो प्रयोगकर्ता कंटेनर के पास होते हैं । इस प्रकार, हालांकि प्रयोगकर्ता चूहे दिखाई नहीं दे रहे हैं फिर भी उन्हें गंध और/या ध्वनि के माध्यम से समझ में सक्षम हो सकता है ।
2. व्यवहार विश्लेषण
नोट: व्यवहार विश्लेषण मैनुअल अवलोकन और स्वचालित विश्लेषण सॉफ्टवेयर द्वारा किया जाता है ।
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मैनुअल अवलोकन
- पशु कगार पर रखा गया है के बाद, निंनलिखित का पालन: प्रविष्टियों की संख्या (एक हाथ पर एक प्रविष्टि किसी भी उदाहरण के रूप में परिभाषित किया गया है जब सभी 4 पंजे बांह पर हैं), समय प्रत्येक हाथ पर खर्च किया, और बढ़ाया की संख्या में भाग लेने वाली आसन एक खुले हाथ का सामना करना पड़ , जबकि बंद हाथ की ओर केंद्रीय मंच का समर्थन ।
- स्टॉपवॉच और 5 मिनट के लिए गिनती द्वारा ऊपर परिभाषित व्यवहार की अवधि और आवृत्ति को मापने, जब कंटेनर के दरवाजे बंद कर रहे हैं से शुरू.
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स्वचालित विश्लेषण
- उपलब्ध सॉफ्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग कर, निम्न रिकॉर्ड: दूरी कूच, खुले हथियारों (समीपस्थ, मध्यम, और केंद्रीय मंच से बाहर के क्षेत्रों) पर विभिन्न पदों में बिताए समय, और खुले और बंद पर बिताए समय का एक मिनट दर मिनट विश्लेषण हथियार.
- मैनुअल अवलोकन शुरू होने के साथ ही स्वचालित विश्लेषण सॉफ़्टवेयर के "स्टार्ट बटन" पर क्लिक करें (रिकॉर्डिंग अवधि सेट होने पर रिकॉर्डिंग स्वचालित रूप से रुक जाएगी).
नोट: इस अध्ययन में प्रयुक्त व्यवहार विश्लेषण सॉफ्टवेयर पृष्ठभूमि क्षेत्र के साथ इसके विपरीत के माध्यम से पशु पटरियों; पशु, जो एक निश्चित आकार सौंपा है उज्जवल वस्तु के रूप में की पहचान की है और इसके केंद्र बिंदु के गतिवान इस प्रकार पशु ट्रैकिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
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Representative Results
पिछले अध्ययन में, हम खुले हाथ कगार और भूलभुलैया12पर खोजपूर्ण व्यवहार पर बंद बांह की दीवारों की पारदर्शिता के संयुक्त प्रभाव की तुलना में । चूहों काफी कम समय के कगार के साथ खुले हथियार से कगार के बिना खुले हथियारों पर खर्च (एफ [1, ६०] = १३.४९, पी = ०.०००५) (चित्रा 2a) । इसी तरह के परिणाम भी खुले बाहों में प्रविष्टियों की संख्या के लिए पाया गया (एफ [1, ६०] = ११.१७, पी < ०.००१४)12, सुझाव है कि कगार की उपस्थिति खुली बाहों पर चूहे खोजपूर्ण व्यवहार बढ़ जाती है । चूहों काफी कम फैला दिखाया-उपकरण है कि उपकरण है कि अपारदर्शी दीवारों (एफ [1, 60] = ४.०३, पी = ०.०४९२) (चित्रा 2 बी) के साथ हथियार बंद था की तुलना में पारदर्शी दीवारों के साथ हथियार बंद कर दिया था पर आसन में भाग ले, सुझाव है कि पारदर्शी बंद बांह की दीवारों चूहों में चिंता की तरह व्यवहार में कमी आई । चूहों उपकरण है कि पारदर्शी बंद बांह की दीवारों के साथ उपकरण की तुलना में खुले हाथ दीवारों था पर खुली बाहों के बाहर खंड पर अधिक समय बिताया (एफ [1, 60] = ८.००, पी = ०.०९८३) (चित्रा 2c), सुझाव है कि पारदर्शी दीवारों भी हो सकता है कमी मूषक ओपन आर्म खोजपूर्ण व्यवहार. इसके अलावा, बाहर के खंड पर खुला हाथ अन्वेषण के कगार/पारदर्शी उपकरण (चित्रा 2c) की तुलना में नहीं-कगार/अपारदर्शी उपकरण में काफी कम था । एक साथ ले लिया, इन परिणामों से संकेत मिलता है कि चिंता का पता लगाने संवेदनशीलता की तरह व्यवहार एआरएम डिजाइन सुविधाओं के प्रकार के आधार पर अलग किया जा सकता है, और नहीं-कगार/अपारदर्शी उपकरण और कगार/ पता लगाने की संवेदनशीलता में अंतर ।
एआरएम डिजाइन के विभिंन प्रकारों के बीच पता लगाने संवेदनशीलता में अंतर की पुष्टि करने के लिए, एक और प्रयोग anxiolytic दवा डायजेपाम (आंकड़े 3डी) का उपयोग किया गया था । संक्षेप में, नहीं, कगार/अपारदर्शी उपकरण खुला बाहों में बिताए समय पर उच्च खुराक डायजेपाम उपचार के प्रभाव का पता चला, जबकि कगार/पारदर्शी उपकरण नहीं था (3 ए-Bआंकड़ा) । इसी तरह के परिणाम भी खुले शस्त्र12 में प्रविष्टियों की संख्या के लिए पाया गया (डेटा नहीं दिखाया गया है) । कगार/पारदर्शी तंत्र पर किसी भी महत्वपूर्ण प्रभाव की कमी इस तथ्य के कारण किया गया है कि इस उपकरण पर बेसल गतिविधि (वाहन उपचार) नहीं-कगार पर की तुलना में अधिक था/अपारदर्शी उपकरण है, लेकिन है कि खुले हाथ अन्वेषण के ३३% से अधिक कभी नहीं या तो तंत्र पर किसी भी स्तर पर समय है । इसलिए, इस संकरा खुला हाथ अंवेषण समय सीमा ने इसे और अधिक कठिन कगार पर डायजेपाम के anxiolytic प्रभाव अंतर करने के लिए बनाया/पारदर्शी उपकरण (चित्रा 3डी) ।
चित्रा 1 : उन्नत प्लस भूलभुलैया परीक्षण के लिए कस्टम डिजाइन उपकरण. पैनल (ए): ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण कंटेनर । उपकरण काले कंटेनर में रखा जाता है, और एक मॉनिटर कंटेनर परियोजनाओं के लिए अगले प्रयोग के दौरान दर्ज की फिल्म छवियां रहते हैं । पैनल (बी): प्लस कंटेनर में भूलभुलैया ढांचे कि फिट हथियार का समर्थन करता है । पूरे तंत्र ५०० मिमी फर्श के ऊपर स्थित है । पैनल (सी): छत प्रकाश कि तीव्रता के लिए समायोजित किया जा सकता है । एक डिजिटल वीडियो कैमरा (देखें तीर) रिकॉर्ड पशु आंदोलनों प्रकाश व्यवस्था से घिरा हुआ । पैनल (डी): ऊंचा प्लस भूलभुलैया हथियार और केंद्रीय मंच है कि ढांचे के लिए फिट कर रहे हैं; बाएं से दाएं, अपारदर्शी दीवार बंद बांह, नहीं हाशिया खुले हाथ, कगार खुले हाथ, केंद्रीय मंच, पारदर्शी दीवार बंद बांह । पैनल (E): खुली बाहों का क्लोज़-अप दृश्य; बाएं से दाएं, कगार के बिना खुला हाथ, कगार के साथ खुला हाथ (H5 mm) । पैनल (एफ): एक निर्माण भूलभुलैया का एक उदाहरण (कगार/ कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2 : खुला हाथ कगार चिंता की तरह व्यवहार को कम करने, और पारदर्शी दीवारों आंशिक रूप से चिंता की तरह व्यवहार में कमी । पुरुष चूहों हाथ संरचनाओं के विभिंन संयोजनों के साथ ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण हुआ (कगार/पारदर्शी, कगार/अपारदर्शी, नहीं-कगार/पारदर्शी, और नहीं-कगार/ परीक्षण आदेश प्रयोगात्मक समूहों (तंत्र प्रकार के प्रत्येक संयोजन) भर में सामान्यीकृत किया गया था । यह प्रक्रिया प्रत्येक परीक्षण के दिन के समय के कारण उत्पंन हो सकता है जो अप्रत्याशित प्रभाव को सामांय । पैनल (क): खुली बाहों पर बिताया समय; कक्ष (B): तनी-उपस्थित मुद्राओं की संख्या; पैनल (C): खुली बाहों के बाहर के सेगमेंट में बिताया गया समय । ठोस और डैश्ड रेखाएं क्रमशः (दो-तरफ़ा ANOVA, #p < ०.१, * p < ०.०५, * *p < ०.०१, * * *p < ०.००१), खुले और बंद आर्म संरचनाओं के महत्वपूर्ण मुख्य प्रभावों को इंगित करती हैं । पैनल (C) में पट्टियों के बगल में विभिंन अक्षरों में महत्वपूर्ण अंतर (Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण, < b, P < ०.०१२५) दर्शाते हैं । डेटा SEM के साथ मतलब के रूप में व्यक्त किए गए थे (n = 16 प्रति प्रयोगात्मक समूह) । ये आंकड़े हमारी पिछली रिपोर्ट12से संशोधित किए गए हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3 : नहीं-कगार/अपारदर्शी उपकरण डायजेपाम के anxiolytic प्रभाव का उच्च खोज संवेदनशीलता दिखाता है । पुरुष चूहों ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण गुजरा, या तो नहीं के साथ-कगार/अपारदर्शी या कगार/पारदर्शी उपकरण, या तो वाहन के साथ इलाज किया जा रहा है के बाद 30 मिनट (0 मिलीग्राम/किग्रा), कम (०.२५ मिलीग्राम/किग्रा), या उच्च (०.५ मिलीग्राम/anxiolytic दवा की खुराक डायजेपाम (intraperitoneal injection). डायजेपाम समाधान ०.९% एक सतह सक्रिय एजेंट के साथ सामांय खारा समाधान में भंग किया गया । इस प्रयोग में, तीन औषध उपचार समूहों और उपकरण डिजाइन के दो प्रकार के परीक्षण के आदेश किसी भी प्रभाव है कि प्रत्येक परीक्षण के दिन के समय के कारण हो सकता है के लिए खाते में यादृच्छिक थे । पैनलों (A & B): कुल प्रतिशत समय (5 मिनट) कगार की खुली बाहों पर खर्च/पारदर्शी और नहीं-कगार/ पैनलों (सी एंड डी): मिनट दर मिनट प्रतिशत समय कगार की खुली बाहों पर खर्च/पारदर्शी और नहीं-कगार/अपारदर्शी उपकरण, क्रमशः । पैनल में सलाखों के बगल में विभिंन पत्र (ख) उपचार के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर इंगित (Bonferroni एकाधिक तुलना परीक्षण, एक < B, P < ०.०१६७) । पैनलों में ठोस और डैश्ड रेखाएं (C & D) समय-चूक और डायजेपाम उपचार के महत्वपूर्ण मुख्य प्रभावों का संकेत देती हैं, क्रमशः (दोहराए गए उपाय ANOVA, *p < ०.०५, * *p < ०.०१, * * *p < ०.००१). डेटा SEM के साथ मतलब के रूप में व्यक्त किया गया । स्तंभों में संख्याओं का संकेत जानवरों है कि प्रयोग पूरा (कोष्ठक में संख्या जानवरों उपकरण गिरने से संकेत मिलता है) । ये आंकड़े हमारी पिछली रिपोर्ट12से संशोधित किए गए हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
जैसे मनोरोग विकारों से पीड़ित रोगियों की संख्या, चिंता-विकार, वृद्धि सहित, चिंता के बुनियादी तंत्र की समझ को बेहतर बनाने के लिए अत्याधुनिक अध्ययनों का विकास करना जरूरी है. इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं का अनुकूलन भी महत्वपूर्ण है । इसलिए, उन्नत प्लस भूलभुलैया परीक्षण के आवेदन में सुधार करने के लिए, हम प्रयोगात्मक चूहों का उपयोग कर परिणामों पर एआरएम सुविधाओं के प्रभाव का प्रदर्शन किया है.
ऊंचा प्लस भूलभुलैया मूल रूप से कुतर4में पशु चिंता का परीक्षण करने के लिए स्थापित किया गया था, लेकिन हालांकि बुनियादी संरचनाओं आमतौर पर लगातार कर रहे हैं (उदाहरणके लिए, एक प्लस आकार के साथ फर्श से ऊपर ऊंचा ५०० मिमी), विभिन्न एआरएम डिजाइन अक्सर इस्तेमाल कर रहे हैं । मूलतः, तंत्र कगार के बिना खुली बाहों से मिलकर, और लकड़ी के अपारदर्शी दीवारों के साथ बंद हथियार । हालांकि, अधिक हाल ही में खुले हथियार कगार के साथ विकसित किया गया है के लिए बंद उपकरण गिरने जानवरों को रोकने के, और बंद हथियार भी पारदर्शी दीवारों के साथ विकसित किया गया है बंद हथियार पर व्यवहार की निगरानी की सुविधा । हालांकि, वहां कोई रिपोर्ट है कि उंनत प्लस भूलभुलैया परीक्षण में प्रयोगात्मक परिणामों पर इन एआरएम सुविधाओं के संयुक्त प्रभाव को संबोधित किया गया है । जैसा कि हमारे परिणामों द्वारा दिखाया गया है, खुले हाथ कगार की उपस्थिति और बंद बांह की दीवारों की पारदर्शिता चूहों में खुला हाथ अन्वेषण के परिहार की कमी हुई (चित्रा 2), जो डायजेपाम के anxiolytic प्रभाव का पता लगाने संवेदनशीलता कम हो सकती है ( चित्रा 3) । कगार/पारदर्शी उपकरण के लिए वाहन का इलाज चूहों (चित्रा 3) द्वारा खुली बाहों पर अधिक से अधिक अंवेषण को प्रोत्साहित दिखाई । इस वाहन और डायजेपाम के बीच खुले हाथ अन्वेषण गतिविधि में कम व्यवहार भेदभाव चूहों का इलाज किया, इस प्रकार यह और अधिक चिंता का स्तर में मतभेदों का पता लगाने के लिए मुश्किल बना । इसलिए, कगार/पारदर्शी तंत्र की कम संवेदनशीलता मतलब हो सकता है कि और अधिक जानवरों के लिए नहीं-कगार/अपारदर्शी उपकरण का उपयोग कर के साथ तुलना में महत्वपूर्ण उपचार प्रभाव का प्रदर्शन करने के लिए परीक्षण किया जा करने की आवश्यकता होगी ।
हमारे प्रोटोकॉल में, अवधि और प्रत्येक हाथ पर प्रविष्टियों की संख्या मैंयुअल रूप से अच्छी तरह से प्रशिक्षित प्रयोग द्वारा मापा गया था । यह प्रक्रिया एआरएम प्रविष्टियों का सही माप, सभी 4 एक हाथ पर रखा पंजे के रूप में परिभाषित सक्षम बनाता है । हालांकि यह सच है कि स्वचालित पशु ट्रैकिंग सिस्टम कुछ व्यवहार मानकों के लिए उपलब्ध हैं, ऐसे दूरी यात्रा के रूप में, हमारे अनुभव में वे हमेशा सही प्रविष्टियों और गैर के बीच अंतर नहीं कर सकते है हथियारों पर प्रविष्टियों, खासकर जब जानवरों केंद्रीय मंच और एक हाथ के बीच सीमा के निकट आसन में भाग लेने के प्रदर्शन । इस प्रकार, हम दोनों मैनुअल और स्वचालित अवलोकन प्रणालियों, प्रत्येक व्यवहार पैरामीटर के लिए उनके संबंधित शक्तियों के आधार पर का एक संयोजन का उपयोग करने की सलाह देते हैं ।
वहां प्रयोगशालाओं के बीच कुछ अंय प्रोटोकॉल मतभेद हैं । उदाहरण के लिए, कुछ शोधकर्ताओं ने केंद्रीय मंच पर एक बंद हाथ13,14का सामना करना पड़ रहा है, जबकि अंय चूहों जगह एक खुले हाथ का सामना करना पड़15,16। इसके अलावा, कुछ शोधकर्ताओं परीक्षण व्यवहार तुरंत अपने घर से चूहों लेने के बाद पिंजरे, जबकि दूसरों को चूहों कुछ समय परीक्षण शुरू करने से पहले व्यवहार परीक्षण कमरे में acclimatize करने की अनुमति । पूर्व मामले के संबंध में, प्रारंभिक परीक्षणों में हम अनुभव कैसे परिणाम जो हाथ चूहे शुरू में सामना करना पड़ा पर निर्भर करता है; वहां हाथ है कि चूहे का सामना करना पड़ रखा था पर प्रवेश करने की एक वृद्धि हुई घटना थी । इसके अलावा, जब चूहों को एक बंद बांह का सामना करना पड़ रखा था, कुछ जानवरों को पहली प्रविष्टि के बाद कि बंद बांह से बाहर ले जाया नहीं किया । ऐसी स्थिति में, यह अंतर करना मुश्किल है कि चूहों के खुले और बंद हथियारों के बीच संघर्ष का अनुभव है या कि वे केवल कभी खुली बाहों की उपस्थिति पहचानने के बिना एक बंद जगह में रहना पसंद करते हैं । हालांकि हमारे अध्ययन में हम एक खुले हाथ का सामना करना पड़ चूहों जगह चुना, संघर्ष के तहत किया जा रहा की एक उच्च घटना सुनिश्चित करने के लिए, हम अनुशंसा करते है कि आगे के अध्ययन सुनिश्चित करने के लिए कि प्रयोगात्मक परिणामों पर इस प्रोटोकॉल अंतर का प्रभाव ठीक से आयोजित किया जा जांच.
खुले हाथ और मिनट दर मिनट विश्लेषण के बाहर खंड के अन्वेषण की माप चूहे की चिंता की तरह व्यवहार के बारे में अतिरिक्त विस्तृत जानकारी प्रदान की है । इन माप अलग हाथ डिजाइन के बीच का पता लगाने संवेदनशीलता में मतभेद दिखाने में मदद की । इस के बावजूद, चिंता अनुसंधान के परिणाम की सूचना दी ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण का उपयोग अक्सर विस्तृत माप13,17,18के इन प्रकार की रिपोर्ट नहीं है । इसलिए, हम उच्च अनुशंसा करते है कि शोधकर्ताओं ने भी चूहे खोजपूर्ण गतिविधियों के बारे में अधिक जानकारी, बाहर की खोज सहित, मिनट दर मिनट विश्लेषण, और भी फैला-आसन में भाग लेने की रिपोर्ट ।
अंत में, हमारे निष्कर्षों का सुझाव है कि तंत्र के विभिंन प्रकार के अपने स्वयं के लक्षण हो सकता है । इन परीक्षणों से, हमने दिखा दिया है कि कोई कगार/अपारदर्शी उपकरण बेहतर दवाओं के प्रभाव संभवतः एक anxiolytic प्रभाव होने का पता लगा सकते हैं । इसके विपरीत, यह है कि कगार/पारदर्शी उपकरण एक समान लाभ जब संभावित anxiogenic दवाओं के परीक्षण हो सकता है कि कल्पना है । तारीख करने के लिए, व्यवहार परीक्षण न केवल दवा स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया गया है, लेकिन यह भी उत्परिवर्ती पशुओं में phenotyping परख के लिए । दरअसल, उंनत जीनोम संपादन तकनीक उत्परिवर्ती पशुओं के तेजी से उत्पादन की अनुमति देते हैं । इसलिए, यह बेहतर शुद्धता और व्यवहार में भिन्नता का पता लगाने के लिए संवेदनशीलता के साथ परीक्षण प्रक्रियाओं को विकसित करने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है । यह रिपोर्ट दवा या लक्ष्य जीन की उंमीद कार्यों पर आधारित पशु चिंता अनुसंधान के लिए ऊंचा प्लस परीक्षण के एक बेहतर आवेदन प्रदर्शित करता है । इस प्रकार, हमें विश्वास है कि हमारे प्रयासों को अग्रिम अनुसंधान उन्नत प्लस भूलभुलैया रोजगार में मदद मिलेगी ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
लेखकों को अनुकूलित उपकरण के उत्पादन में उनकी सहायता के लिए श्री Akihiro Hirano शुक्रिया अदा करना चाहता हूं । लेखक श्री कोसुके ताकाहाशी और श्री Shingo Nakajima को उनकी तकनीकी सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं. यह काम रासायनिक पदार्थों, स्वास्थ्य और प्रयोगशाला विज्ञान अनुसंधान अनुदान, स्वास्थ्य, श्रम और कल्याण मंत्रालय, जापान (H25-अरु-IPPANN-003) और अनुसंधान परियोजना अनुदान ए द्वारा विज्ञान और प्रौद्योगिकी संस्थान के जोखिम पर अनुसंधान द्वारा समर्थित किया गया मीजी विश्वविद्यालय, जापान ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Customized container (W1500 × D1500 × H2000 mm) | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Lighting | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Elevated plus maze apparatus | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Digital video camera | Watec | WAT-250D2 | Any suitable video camera can be attached to a hard disk recorder for recording tracking profiles. |
| Hard disk recorder | TOSHIBA | RD-R200 | Any suitable hard disk recorder can be attached to the digital video camera. |
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories Japan, Inc. | NA | Any suitable rats can be used for your study |
| Standard rat cage | Toyoriko | TP-105 | Any suitable rat cage be used for your study |
| Instrument to measure light intensity | AS ONE | 1-5818-02 | Any suitable instrument to measure light intensity |
| EthoVision XT version 8.0 | Noldus | NA | Any suitable software to measure animal behavior |
| Diazepam | Taiyo Pharmaceutical Industry | 1124402A2061 | Any suitable drug can be used for your study |
| Tween 80 | Wako Pure Chemical Industries | 9005-65-6 | Any suitable drug can be used for your study |
References
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