Se describe un protocolo básico para evaluar la toxicidad de productos químicos en un animal modelo, elegans de Caenorhabditis. El método es conveniente y útil para el desarrollo de productos farmacéuticos, así como para la evaluación del riesgo de diversos contaminantes ambientales.
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Artículo de método
Medir el efecto de productos químicos sobre el crecimiento y reproducción de Caenorhabditis elegans
En este artículo
Resumen
Resumen
Evaluación toxicológica es crucial para entender los efectos de sustancias químicas en los organismos vivos en los campos de la ciencia biológica básica y aplicada. Un suelo no mamíferos ronda gusano, Caenorhabditis elegans, es un organismo modelo valioso para estudios de Toxicología por su comodidad y la falta de temas de ética animal en comparación con sistemas de animales mamíferos. En este protocolo, se describe un procedimiento detallado de evaluación toxicológica de sustancias químicas en C. elegans . Un medicamento contra el cáncer clínico, etopósido, que dirige humano topoisomerasa II e inhibe la replicación del ADN de las células cancerosas humanas, fue seleccionado como modelo de pruebas químicas. Edad-sincronizado C. elegans huevos estaban expuestos a dimetilsulfóxido (DMSO) o etopósido, y entonces el crecimiento de C. elegans fue monitoreado cada día durante 4 días por la observación del microscopio estéreo. El número total de huevos puestos de C. elegans tratados con DMSO o etopósido también fue contado utilizando el microscopio estéreo. Etoposide tratamiento afectó significativamente el crecimiento y la reproducción de C. elegans. Por la comparación del número total de huevos de gusanos con períodos diferentes de tratamiento de productos químicos, se puede decidir que la toxicidad para la reproducción de productos químicos en la reproducción de C. elegans es reversible o irreversible. Estos protocolos pueden ser útiles para ambos el desarrollo de varias drogas y evaluación de riesgos de sustancias tóxicas ambientales.
Introducción
Evaluación toxicológica es esencial para el desarrollo de productos farmacéuticos y nutracéuticos, cosmecéuticos, así como la evaluación del riesgo de varias toxinas ambientales. El modelo de roedor es uno de los sistemas más populares en vivo experimentales para este estudio de la toxicología; por otra parte, organismos no mamíferos como C. elegans son también ampliamente utilizados. Modelos de evaluación toxicológica de mamíferos no son beneficiosos debido a no sólo animal cuestiones éticas, pero también su conveniencia y utilidad considerando rentabilidad, mantenimiento, velocidad y reproducibilidad1,
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Protocolo
Nota: todo el experimento debe realizarse en un laboratorio aislado limpio mantenido a 20 ° C con poco polvo y con minimización de contaminación durante el gusano y manejo bacteriana. Para ello, deben realizarse experimentos bajo la llama de una lámpara de alcohol o de usar un banco limpio.
1. mantenimiento de C. elegans y huevo preparación para la prueba de química
- mantenimiento C. elegans N2 (var. Bristol) en una placa de agar NGM hartos de vivir OP50 de e. coli a 20 º C 12 , 13.
- Prepare Huevos sincronizados de edad mediante lejí....
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Resultados
El tratamiento de etopósido (24-96 h) había retarda significativamente el crecimiento de C. elegans. Después de 96 h de incubación, gusanos tratados con etopósido crecieron 0,86 mm de longitud corporal, mientras que los gusanos tratados con vehículo crecieron a 1,04 mm (figura 1). Retraso de crecimiento se observó también al parecer bajo observación microscopio estéreo (figura 2). Empezamos a ver los huevos de los gusano.......
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Discusión
En este artículo, se describe la evaluación de la toxicidad de productos químicos en C. elegans, un nematodo de suelo, uso de etopósido como un ejemplo de sustancias tóxicos. Para ello, se utilizaron dos condiciones experimentales. En el primer set, C. elegans fueron cultivadas en etopósido que contiene placas de huevos a la etapa de adulto joven, y entonces los gusanos podían poner huevos en las placas NGM normales sin productos químicos. En el segundo set experimental, C. elegans fueron trata.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por el Instituto Coreano de ciencia y tecnología beca de investigación intramuros (2E27513) y el alto valor agregado alimentos tecnología desarrollo programa (IPET) financiado por el Ministerio de agricultura, alimentación y asuntos rurales (315067-03).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Agar | Affymetrix, EE. UU | 10906 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Colesterol de tipo salvaje | |
| Sigma, EE. UU | C3045 | ||
| Dimetilsulfóxido Sigma | , EE. UU | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Centro de Genética de Caenorhabditis (CGC) | ||
| Etopósido | Sigma, EE. UU. | E1383 | |
| Image J software (ver 1.4) | Instituto Nacional de Salud, EE. UU. | https://imagej.nih.gov/ij/ | |
| Cámara microscópica | Jenopitk, Progress Gryphax, Alemania | ||
| . UU. | 107213 | ||
| 35 × Placa de Petri de 10 mm | SPL Ciencias de la Vida, Corea del Sur | 10035 | |
| 90 × 15 mm Placa de Petri | SPL Life Sciences, Corea del Sur | 10090 | |
| Microscopio estereoscópico | Nikon, Japón | SMZ800N | |
| Extracto de levadura | Becton Dickinson, Estados Unidos | 212750 |
Referencias
- Blomme, E. A., Will, Y. Toxicology strategies for drug discovery: present and future. Chem. Res. Toxicol. 29 (4), 473-504 (2016).
- Lilienblum, W., et al. Alternative methods to s....
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Reimpresiones y permisos
