Un método conveniente para la extracción y análisis con cromatografía líquida de alta presión de los neurotransmisores catecolaminas y sus metabolitos

Li Xie; Liqin Chen; Pan Gu; Lanlan Wei; Xuejun Kang

doi:10.3791/56445

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Artículo de método

Un método conveniente para la extracción y análisis con cromatografía líquida de alta presión de los neurotransmisores catecolaminas y sus metabolitos

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DOI:

10.3791/56445

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1 de marzo de 2018

Li Xie¹ , Liqin Chen³ , Pan Gu⁴ , Lanlan Wei¹ , Xuejun Kang²

¹School of Public Health of Southeast University, Laboratory of Environment and Biosafety Research Institute of Southeast University in Suzhou, ²Key Laboratory of Child Development and Learning Science (Ministry of Education), School of Biological Science & Medical Engineering, Southeast University, ³School of Public Health, Tianjin Medical University, ⁴British Columbia Academy, Nanjing Foreign Language School

En este artículo

Resumen

Presentamos una cómoda extracción en fase sólida acoplada a cromatografía líquida de alta presión (HPLC) con detección electroquímica (ECD) para la determinación simultánea de los tres neurotransmisores monoamina y dos de sus metabolitos en la orina de los bebés. También identificamos el metabolito MHPG como un potencial biomarcador para el diagnóstico precoz de daño cerebral para los niños.

Resumen

La extracción y análisis de los neurotransmisores catecolaminas en fluidos biológicos es de gran importancia en la evaluación de la función del sistema nervioso y las enfermedades, pero su medida exacta es todavía un reto. Muchos protocolos se han descrito para la medición de neurotransmisores por una variedad de instrumentos, incluyendo la cromatografía líquida de alta presión (HPLC). Sin embargo, existen deficiencias, tales como operación complicada o difícil de detectar múltiples objetivos, que no se puede evitar, y en la actualidad, la técnica de análisis dominante sigue siendo HPLC juntada con sensible electroquímica o fluorimétrica detección, debido a su alta sensibilidad y buena selectividad. Aquí, se describe un protocolo detallado para el pretratamiento y la detección de catecolaminas con cromatografía líquida de alta presión con detección electroquímica (HPLC-ECD) en muestras de orina real de neonatos, mediante electrospun nanofibras compuesto compuesto de éter de corona poliméricos con el poliestireno como adsorbente, también conocido como el método de extracción (PFSPE) de la fase sólida de fibra lleno. Mostramos cómo orina muestras pueden ser precleaned fácilmente por una columna de fase sólida llena de nanofibras, y cómo los analitos en la muestra pueden enriquecerse rápidamente, desorbida y detectado en un sistema ECD. PFSPE simplifica notablemente los procedimientos de pretratamiento para las muestras biológicas, lo que permite disminución de tiempo, costo y reducción de la pérdida de objetivos.

En general, este trabajo ilustra un protocolo simple y conveniente para la extracción en fase sólida acoplada a un sistema de HPLC-ECD para determinación simultánea de los tres neurotransmisores monoamina (norepinefrina (NE), epinefrina (E), dopamina (DA)) y dos de sus metabolitos (3-metoxi-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) y ácido 3, 4-dihydroxy-fenilacético (DOPAC)) en la orina de los bebés. Se aplicó el protocolo establecido para evaluar las diferencias de catecolaminas urinarias y sus metabolitos entre neonatos de alto riesgo con daño cerebral perinatal y controles sanos. Análisis comparativo reveló una diferencia significativa de MHPG urinario entre los dos grupos, indicando que los metabolitos de catecolaminas pueden ser un marcador importante candidato para el diagnóstico precoz de casos en riesgo de daño cerebral en recién nacidos.

Introducción

Neurotransmisores de catecolamina y su contenido de metabolitos en los fluidos corporales puede afectan la función neuronal y afectar el equilibrio de los Estados de la respuesta a estímulo a una gran parte¹. Anomalías que puede causar una variedad de enfermedades, tales como pheochromacytoma, ganglioneuroma, neuroblastoma y trastornos neurológicos¹^,². La extracción y la determinación de catecolaminas en fluidos corporales es significativo para el diagnóstico de las enfermedades relevantes. Sin embargo, las catecolaminas en muestras biológicas existen en bajas concentraciones y se oxida....