Mover hacia arriba: Un Simple y Flexible In Vitro invasión tridimensional protocolo

Tanner J. McArdle; Brenda M. Ogle; Felicite K. Noubissi

doi:10.3791/56568

Artículo de método

Mover hacia arriba: Un Simple y Flexible In Vitro invasión tridimensional protocolo

5.6K vistas

⸱

DOI:

10.3791/56568

⸱

12 de marzo de 2018

Tanner J. McArdle¹ , Brenda M. Ogle¹^,²^,³^,⁴^,⁵ , Felicite K. Noubissi⁶

¹Department of Biomedical Engineering, University of Minnesota - Twin Cities, ²Stem Cell Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ³Masonic Cancer Center, University of Minnesota - Twin Cities, ⁴Lillehei Heart Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ⁵Institute for Engineering in Medicine, University of Minnesota - Twin Cities, ⁶Department of Biology, Jackson State University

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un ensayo de invasión vertical invertido que podría ser utilizado para cuantificar la capacidad de migración y la invasión de las células en un entorno tridimensional conservando el microambiente celular. Este ensayo es adecuado para las células raras o sensibles.

Resumen

Aunque se han desarrollado ensayos de invasión 3D, el desafío sigue siendo estudiar las células sin afectar la integridad de su microambiente. 3D tradicionales ensayos tales como el compartimiento de Boyden requieren que las células son desplazadas de la ubicación original de la cultura y se trasladó a un nuevo entorno. No sólo hace esto interrumpir los procesos celulares que son intrínsecos al microentorno, pero a menudo resulta en una pérdida de células. Estos problemas son especialmente difíciles cuando se trata de las células que son raros, o extremadamente sensibles a su microambiente. Aquí, describimos el desarrollo de un ensayo de invasión 3D que evita ambos problemas. En este ensayo, las células se platean dentro de un pequeño bien y una matriz del ECM que contiene un chemoattractant se coloca encima de las células. Esto no requiere desplazamiento de la célula y permite a las células invadir hacia arriba en la matriz. En este ensayo, invasión celular y morfología celular puede ser evaluada en el gel de colágeno. Usando este análisis, se caracteriza la capacidad invasiva de las células raras y sensibles; las células híbridas resultantes de la fusión entre las células de cáncer de mama MCF7 y mesenquimales multipotentes/tallo/estroma células (MSCs).

Introducción

La motilidad celular es un proceso fisiológico y de desarrollo normal de las células. Sin embargo, cambios en el patrón y la capacidad de las células para migrar e invadir están asociados a condiciones patológicas como enfermedades inflamatorias y cáncer metástasis¹^,²^,³. La metástasis es posiblemente el aspecto más mal entendido en cáncer. Para metástasis, las células cancerosas deben degradar la matriz extracelular (ECM), invaden el tejido local y intravasate. Una vez en circulación, las células cancerosas se difundir el sitio distante extravasate y formar tumores secundario....