Detección visual de los ácidos nucleicos múltiples en un arreglo de capilares

Jianwei Chen; Ning Shao; Jiaying Hu; Rong Li; Yuanshou Zhu; Dabing Zhang; Shujuan Guo; Junhou Hui; Peng Liu; Litao Yang; Sheng-Ce Tao

doi:10.3791/56597

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Artículo de método

Detección visual de los ácidos nucleicos múltiples en un arreglo de capilares

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DOI:

10.3791/56597

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15 de noviembre de 2017

Jianwei Chen^*¹^,²^,³ , Ning Shao^*¹^,²^,³ , Jiaying Hu^*⁴ , Rong Li⁴ , Yuanshou Zhu¹^,²^,³ , Dabing Zhang⁴^,⁵ , Shujuan Guo¹^,²^,³ , Junhou Hui⁶ , Peng Liu⁶ , Litao Yang⁴ , Sheng-Ce Tao¹^,²^,³

¹Key Laboratory of Systems Biomedicine (Ministry of Education), Shanghai Center for Systems Biomedicine, Shanghai Jiao Tong University, ²State Key Laboratory of Oncogenes and Related Genes, ³School of Biomedical Engineering, Shanghai Jiao Tong University, ⁴Collaborative Innovation Center for Biosafety of GMOs, National Center for the Molecular Characterization of Genetically Modified Organisms, School of Life Sciences and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, ⁵Key Laboratory of Crop Marker-Assisted Breeding of Huaian Municipality, Jiangsu Collaborative Innovation Center of Regional Modern Agriculture and Environmental Protection, ⁶Department of Biomedical Engineering, Collaborative Innovation Center for Diagnosis and Treatment of Infectious Diseases, School of Medicine, Tsinghua University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe la fabricación de una cinta pequeña, lista para usar que se puede aplicar para detección visual de varios ácidos nucleicos en una prueba individual, que es fácil de operar. En este enfoque, una gama capilar fue utilizada para la detección multiplex y altamente eficiente de los objetivos de la OMG.

Resumen

Múltiples destinos, a corto plazo y recursos asequibles metodologías para la detección de los ácidos nucleicos múltiples en un único, fácil de operar prueba se necesitan urgentemente en la diagnosis de la enfermedad, vigilancia microbiana, detección de organismo genéticamente modificado (OGM), y Análisis forense. Anteriormente hemos descrito la plataforma llamada calma (Capillary Array basado en Lprogramación orientada a objetos-mediada isoterma amplificación para Multiplex visual detección de ácidos nucleicos). Adjunto, describimos mejor fabricación y procesos de funcionamiento de esta plataforma. Aquí, aplicamos un casete pequeño, listo para su uso por matriz capilar para multiplex visual detección de ácidos nucleicos. La matriz capilar es pretratada en un patrón hidrofóbico e hidrofílico antes de fijar la amplificación isotérmica mediada lazo (lámpara) primer sets en tubos capilares. Después del montaje del adaptador de carga, mezcla de reacción de la lámpara es cargada y aislada en cada capilar, debido a la fuerza capilar por un solo paso de pipeteo. Las reacciones de la lámpara se realizan en paralelo en los capilares. Los resultados se leen visualmente hacia fuera iluminarse con una linterna de UV de mano. Usando esta plataforma, se demuestra control de 8 que con frecuencia aparecen elementos y genes en muestras de OMG con sensibilidad y alta especificidad. En Resumen, la plataforma descrita en este documento se pretende facilitar la detección de ácidos nucleicos múltiples. Creemos que será ampliamente aplicable en campos donde se requiere el análisis de ácidos nucleicos de alto rendimiento.

Introducción

Sistemas de bajo costo, rápidos y fácil de usar para la detección simultánea de varios ácidos nucleicos se necesitan urgentemente en una amplia gama de campos, tales como diagnósticos clínicos¹^,²^,³, detección de OGM⁴^, ⁵^,⁶, microbiana control⁷^,⁸^,⁹, análisis forense¹⁰^,¹¹y pruebas especialmente point-of-care (POCTs), donde recursos son....