Summary
Aquí descritos es orthotopic trasplante ovárico protocolos para modificar el ovario influencia sobre la fisiología del ratón receptor. Este procedimiento quirúrgico se utiliza para exponer ratones hembra a los varios tipos de influencia ovárico y puede incluir trasplantes heterocrónicas y el trasplante de ovarios que han experimentado diversos tratamientos ex vivo .
Abstract
Trasplante de ovario fue realizado primero en Utah State University en 1963. En la obra más reciente, heterocrónicas trasplante de ovarios mamíferos se utiliza para investigar los efectos protectores de la salud de jóvenes ovarios en mujeres jóvenes. Los procedimientos actuales emplean un método de trasplante orthotopic, donde se trasplantaron ovarios alógenos regresa a su posición original en la bursa ovárica. Esto está en contraste con el más comúnmente usado heterotopic trasplante de tejido ovárico/ovarios por vía subcutánea o bajo la cápsula renal. Todos los tres lugares ofrecen eficiente revascularización de los tejidos trasplantados. Sin embargo, el trasplante orthotopic del ovario proporciona el medio de señalización más natural y es el único procedimiento que ofrece la oportunidad del animal para reproducirse naturalmente postoperatoriamente. Uno debe tener cuidado para eliminar todo el tejido ovárico endógeno durante el procedimiento de la ovariectomía. Si queda cualquier tejido endógeno o si sólo se extirpa un ovario, el tejido trasplantado permanecerá inactivo hasta que el tejido existente se vuelve senescente. Mientras que la revascularización de los ovarios trasplantados se produce muy rápidamente, el receptor de trasplante puede tomar una cantidad considerable de tiempo para adaptarse a un nuevo eje de (HPG/A) hipotalámico/pituitario/gonadal/suprarrenal señalización régimen asociado con el trasplante tejido. Esto normalmente toma alrededor de 100 días en el ratón. Por lo tanto, experimentos de trasplante deben ser diseñados para acomodar este período de adaptación. Resultados típicos con el trasplante de ovario incluyen cambios en la salud de la receptora que reflejan la edad del ovario trasplantado, en lugar de la edad cronológica del destinatario.
Introduction
La influencia de la reproducción sobre la salud y la vida es a menudo erróneamente considerado como restringido sólo al período que abarca la competencia reproductiva. Mientras que el estilo de vida y fenotipos asociados a la fase reproductivamente competente de la vida se distinguen fácilmente de las fases previas y postreproductive, estado reproductivo influye en la salud en todas las fases de la vida. El período de capacidad reproductiva se refiere a menudo como la vida reproductiva, diferenciarse de la vida cronológica. Esta terminología se presta a una separación artificial de las dos designaciones de vida cuando en realidad, ambos están estrechamente ligada entre sí con los eventos que afectan a uno, más a menudo que no, que afectan a la otra así.
Evidencia en la última década indica que estado reproductivo de un individuo se asocia con un mayor riesgo de desarrollar condiciones de salud crónicas1. Un estudio documentaron una asociación entre vidas más cortas y falla reproductiva para una cohorte de hombres2. La asociación es aún más llamativo en las mujeres. La enfermedad cardiovascular es rara en las mujeres premenopáusicas3, pero fallo ovárico aumenta la enfermedad cardiovascular considerablemente en la menopausia4 y en mujeres jóvenes con falla ovárica prematura5. Pérdida de hueso y6 de resistencia de insulina aumentan en la menopausia7 y casi dos tercios de los estadounidenses con la enfermedad de Alzheimer son mujeres8. Cambios bien definidos en la señalización de ovario marcan la transición de un estado premenopáusico, resistentes a enfermedades, a un estado posmenopáusico, carga de enfermedad. Esta transición estable, presenta una oportunidad para identificar mecanismos que aceleren los riesgos de enfermedad en el envejecimiento.
Recientemente, el trasplante de tejido ovárico criopreservado se ha utilizado para restaurar la fertilidad en las mujeres que se someten a procedimientos médicos que pueden poner en peligro las células de la línea del germen, como la quimioterapia. Trasplante de tejido ovárico también puede utilizarse para producir descendencia viable en animales con infertilidad en base no ovárico, incluyendo ratones transgénicos9. Trasplante de ovario es un método eficiente para separar la influencia de la función reproductiva o envejecimiento reproductivo de envejecimiento cronológico por sí.
El papel de apoyo bien establecido para las hormonas ováricas en muchos aspectos de la salud implica la pérdida de producción de la hormona de ciclismo activamente las células germinales, como la principal causa de los riesgos de la enfermedad creciente en la menopausia. Mientras que el valor de las hormonas ováricas en la mujer salud es incuestionable, reemplazo de estas hormonas en peri y postmenopáusicas ha sido poco fiable en la restauración de los beneficios de salud de mujeres jóvenes con ovarios pequeños. Estos beneficios para la salud se restauran confiablemente por heterocrónicas trasplante de ovarios joven a ratones hembra postreproductive10,11,12,13,14.
Estado reproductivo de los ratones tanto donante como receptor debe determinarse antes y después del trasplante o procedimientos de ovariectomía. Ratones postreproductive presuntivos que muestran signos de entrada gonadal antes de la cirugía a los 12 meses de edad quedan excluidos de estos experimentos. Entrada gonadal está determinado por citología vaginal. Se recogen datos sobre citología vaginal cirugía previa por lo menos 10 días consecutivos para un estado postreproductive en ratones receptores y ciclismo activamente los ovarios de ratones donantes. Un ciclo estral se define como el período comprendido entre el día nucleated células epiteliales aparecen por primera vez (es decir, proestro) hasta el día anterior a la próxima aparición de las células epiteliales nucleadas en el frotis vaginal, siempre que exista un período de leucocitos presencia (es decir, diestro) en el medio. Estro es determinado por la presencia de células epiteliales escamosas, grandes, con o sin núcleos. Ratones no mostrar ninguna actividad cíclica para un período de 10 días antes o después de la cirugía están decididos a no tener ninguna entrada gonadal para dicho período. Ratones mostrar al menos un ciclo estral completo en un período de 10 días antes o después de la cirugía están decididos a tener entrada gonadal para dicho período. Ratones hembra deben ubicados en presencia de ratones machos o expuestos a la ropa de cama sucia de la jaula del macho para asegurar la constante exposición a los estímulos inductores de ciclo.
Estos procedimientos de trasplante se logran más eficientemente con dos cirujanos trabajando simultáneamente en donante y receptoras ratones. Sin embargo, los procedimientos se logran fácilmente por un cirujano, con los ovarios de la donante suele recuperados antes de iniciar el procedimiento de la ovariectomía sobre el ratón receptor. Este protocolo describe el procedimiento para el cirujano solo. Exposición del tracto reproductivo y el cierre del sitio normalmente se hacen sin un microscopio, mientras que la remoción y reemplazo de los ovarios se hace bajo un microscopio. Como con cualquier procedimiento quirúrgico de aprendizaje, sitios de la incisión pueden ser más grandes y cirugías pueden durar mientras el procedimiento de aprendizaje primera y generalmente disminuyen con la experiencia.
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Protocol
Todos los métodos aquí descritos se desarrollaron bajo el Consejo Nacional de investigación pautas encontraron en la guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio y han sido aprobadas por la Comisión de uso y de Utah estado Universidad institucional Animal Care.
Nota: Procedimientos de trasplante ovárico pueden involucrar ratones (cepa CBA/J) de 21 días de edad a los 18 meses de edad. Ratones de la cepa CBA J ser reproductivamente competentes entre 45 y 60 días de edad y reproductivo senescente entre 10 y 12 meses de edad.
1. trasplante de ovarios intactos a los ratones envejecidos
Nota: Este primer protocolo describe el procedimiento utilizado durante la transferencia de ovarios de un ratón joven (60 días de edad) a una postreproductive hembra (12 meses de edad) de la misma cepa endogámica. El mismo procedimiento se utiliza para trasplante ovárico entre cualquier dos ratones hembra.
- Pesar y anestesiar el animal donante por intraperitoneal (I.P., 27 ga aguja) inyección, por ejemplo, usando una combinación de ketamina y xilacina acepromazina (65 mg/kg ketamina, 13 mg/kg xilacina 2.0 mg/kg, acepromazina; dosis cóctel - 6,5 ml/kg). Devolver el animal a la jaula casa climatizada hasta la anestesia ha hecho efecto.
- Una vez anestesiados, quitar el animal de la jaula casera y en toallas de papel caliente. Usando tijeras (#40 cuchilla preferido), desmontar el pelo unos mm lateral a la línea media de cada lado, empezando justo por debajo de las costillas y movimiento distal, preparando una recortada 'parche' Plaza de 2 a 3 cm aproximadamente a ambos lados del ratón propensos a dejar una franja de pelo aproximadamente 1-2 cm sobre la línea media.
- Suavemente Limpie las áreas recortadas con etanol al 70% y, aplicar betadine solución al sitio recortado con un hisopo de algodón.
- Aplique el gel antibiótico protección para los ojos y administrar meloxicam (2.0 mg/kg) por vía subcutánea (S.C., 27 ga aguja) en el aspecto lateral del cuello del animal para aliviar el dolor postoperatorio.
- Coloque el animal en posición prona sobre un campo quirúrgico estéril calentado y limpie el área recortado con una gasa de algodón empapado en etanol 2 cm x 2 cm 70%.
- Haga una incisión de paralumbar 1.0-1.5 cm y sin rodeos, disecar la piel de la fascia subyacente. Hacer otra incisión a través de la fascia. Sin rodeos diseca lateralmente bajo esta fascia superficial como sea posible hasta llegar a la cavidad abdominal
- Lugar un pequeño paño quirúrgico sobre la incisión (corte de Gasa de 2 x 2 cm) y húmedo el paño con solución salina estéril.
- Utilizando pinzas pequeñas, localizar el tejido adiposo que rodea el ovario en la cavidad abdominal y suavemente Extraiga la almohadilla de grasa y el ovario y colóquelo en el drapeado de gasa mojada. El cojín gordo ovárico aparece más blanco que el tejido adiposo circundante.
- Coloque una pinza de Bulldog de 1,5 pulgadas en la almohadilla de grasa (teniendo cuidado de no obstruir la bursa ovárica) para mantener las vías en su lugar durante el procedimiento.
- Mover el microscopio de disección en lugar e identificar claramente la bursa ovárica. Agarre la bursa con dos pinzas de relojero y haga una incisión en la bursa ovárica frente el hilio ovárico a exponer el ovario. Si el área prevista de la bursa es altamente vascularizado, aplique una gota de la epinefrina (1: 100, 000) con una jeringa a la superficie bursal para reducir el sangrado en el momento del desgarro.
- Suavemente Retire el ovario de la bursa ovárica y suprimir el ovario por fijación en el hilio ovárico con unas pinzas de relojero para prevenir el sangrado.
- Colocar los ovarios de la donante en vidrio de reloj con solución salina estéril de 4° C, cubra ligeramente y reservar hasta que esté listo para el trasplante. Ideal el vidrio de reloj con un microscopio de disección adicional para que los ovarios pueden ser fácilmente captados por el cirujano en el momento del trasplante.
- En este punto, eutanasia o apartar el ratón donante (deben ser continuamente vigilados) para recibir un ovario trasplantado, tejido, células o un grano de cristal del marcador de posición en un momento posterior.
- Con instrumentos y un campo quirúrgico limpio, ovariectomize el animal receptor que el anterior. Ratones más viejos tienden a tener un aumento en la cantidad de tejido adiposo y pueden requerir un anestésico mayor dosis (hasta 20%).
- Después de la supresión del ovario del receptor, colocar un pequeño trozo de esponja hemostática dentro de la bursa vacíela para controlar el sangrado y ayuda en la coagulación y coloque un pedazo pequeño de Gasa remojados en solución salina en el sitio expuesto.
- Localizar un ovario donante (o tejido, células, grano de cristal del marcador de posición) con un relojero pinzas en una mano y mover en el microscopio de campo de visión. Con otro fórceps en la otra mano, retire la gasa y al mismo tiempo Retire la esponja hemostática de la bursa colocando el nuevo ovario dentro de la bursa.
- Si el ovario nuevo no encaja dentro de la bursa destinataria, cortar de los ovarios de la donante en la mitad (1/3 o 1/4) y en la bursa en pedazos. Si la bursa no cubre totalmente el ovario entero, colocar una sutura a través de la bursa, el ovario y a través de la bursa para sostener al ovario en su lugar (véase la sección discusión).
Nota: Los granos de cristal de marcador de posición pueden ser difíciles de manejar con pinzas de relojero. - Al colocar un grano de cristal dentro de la bursa, recoger el grano con el fórceps mayor y colocar encima de la almohadilla de grasa al lado de la bursa ovárica. Rodar las bolas en la bursa.
- Recoger un Portaagujas de Castroviejo ya cargadas con una afilada aguja y sutura de monofilamento de 9-0 o 10-0, localizar el borde desgarrado de la bursa y cerca de la bursa con una o dos suturas de Halsted.
Nota: Puede también ser realiza la sutura con relojero u otras pinzas pequeñas. - Regar el sitio ligeramente con solución salina estéril, retire la abrazadera de panículo adiposo y retomar la almohadilla del ovario o la grasa del abdomen.
- Quite el cobertor y cerrar la pared abdominal con gut crómico o vicryl 6-0. Este paso puede hacerse con o sin el microscopio.
- Mover el microscopio a un lado (si no se mueve en el paso anterior) y cierre la piel con los clips de 9 mm de la herida.
- Coloque el animal en una jaula de recuperación climatizada bajo la sombra de la luz y controlar al animal continuamente hasta la recuperación de la anestesia. Meloxicam adicional puede usarse 24 horas postoperatoriamente si está indicado. Quite los clips de herida aproximadamente nueve días postoperatoriamente.
Nota: Hay técnicas de inmunosupresores se emplean y se ha detectado ninguna evidencia de injerto - versus - host disease posterior al trasplante o a la muerte.
2. trasplante de la célula de germen había agotado los ovarios de ratones intactos.
Nota: Este protocolo consiste en la transferencia de ovarios de un ratón joven, agotado de la célula de germen para una mujer postreproductive. En el presente Protocolo, los destinatarios del ovario y los procedimientos de trasplante y ovariectomía son igual que el anterior con la excepción de que los ovarios trasplantados han sido químicamente agotado de las células de los folículos primordiales y primarios/germen. Restante los folículos antrales y secundarios será sometidos a reclutamiento/atresia dejando el ovario desprovisto de células germinales. Agotamiento de la célula de germen con diepoxide 4-vinylcyclohexene (VCD) es descrito bien16. VCD es una toxina. Porque los ovarios tratados con VCD son ser trasplantados a un ratón no tratadas, este procedimiento se beneficia de un ovario tratados con VCD en un ratón no expuesto a los efectos tóxicos de VCD. Este protocolo describe el procedimiento de agotamiento de la célula de germen en ratones jóvenes, de ovario y los donantes.
- Diluir VCD (64 mg/mL) aceite de sésamo para la inyección y conservar a 4° C hasta su uso.
- Se inyectan a los donantes del ovario una vez al día con VCD I.P. (160 mg/kg) durante 15 días empezando a los 28 días de edad. Inyectar a ratones control con aceite de sésamo, después del horario del mismo.
- A los 50 días de edad, comprobar ratones tratados con VCD y aceite sólo tratados para el cese de la ciclicidad reproductiva durante 10 días que el anterior. A los 60 días de edad, los ratones tratados con VCD no deben mostrar ninguna evidencia citológica de entrada gonadal.
- Recuperar los ovarios de ratones de 60 días de edad y de trasplante como el anterior.
- Determinar el exitoso trasplante de ovarios de la célula de germen-agotado por la detección de una falta de ciclo reproductivo y aumento de los niveles de androstenediona en circulación. Relación estrógeno: andrógeno aumenta significativamente después del agotamiento de la célula de germen con VCD17.
- Iniciar citología vaginal 10-14 días después de la operación y recoger datos durante al menos 10 días consecutivos para asegurar la exacta determinación de la ciclicidad.
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Representative Results
Ovariectomía en 21 días de edad se evite grandes para arriba-regulación del sistema reproductivo en el inicio de la pubertad y eliminar otras influencias que la gónada femenina puede tener además efectos directos de las hormonas gonadales. Disminución de la reproducción en ratones CBA/J comienza generalmente con ciclos irregulares en 8-10 meses de edad. A los 11 meses de edad, mayoría de las hembras en esta línea de ratones ha alcanzado un punto de falla reproductiva15 con una completa pérdida de ovocitos responde por 12 meses de edad. Estas edades varían en diferentes cepas de ratones. Trasplante de la ovariectomía bilateral, ovario usualmente resulta en la activación de los ovarios trasplantados dentro de algunos días. Quitar ambos ovarios endógeno del receptor (hemi-ovariectomía) antes del trasplante contrario, en el ovario trasplantado queda latente hasta que se retira el ovario endógeno restantes. Procedimientos quirúrgicos se llevan a cabo más a menudo en campo abierto (exteriorizar las vías) y con un microscopio de disección (procedimientos de la ovariectomía y a trasplante).
Extensión de vida útil
La vida media de ratones femeninos CBA/J es 644 días18. Ratones que experimentaron la cirugía (trasplante o sham [extirpación de ovario y reemplazo inmediato]) fueron seleccionados para vivir al menos a la hora de cirugía. Según el experimento, esto fue entre 11 y 18 meses de edad. En inicial experimenta19, cirugías se realizaron en 11 meses de edad y sham ratones vivieron una media de 728 días (393 días después del tiempo de la cirugía) y ratones intactos que reciben nuevos ovarios vivieron días 811 (476 días pasado cirugía, GC-TX-1, figura 1). En un experimento más reciente, las cirugías se realizaron en 17 meses de edad y ratones que reciben nuevos ovarios vivieron días 798 (281 días pasado cirugía, GC-TX-2). Los ratones que recibieron disminución de células germinales de los ovarios esto extendido a una vida útil promedio de 880 días (363 días postoperatoriamente).
Extensión del palmo de la salud
Ratones que recibió ovarios nueva, que contiene la célula de germen aparecen significativamente disminuida enfermedad cardiovascular10 y enfermedad ortopédica11 y demostraron una mejoría significativa de la salud varios abarcan parámetros. Ratones postreproductive ovarios nuevo a los 12 meses de edad y se evaluaron a 16 meses de edad, demostró la sarcopenia disminución12, mejora la función inmune y renal13y mejor comportamiento cognitivo y función sensorial14 .
Verificación del agotamiento de la célula de germen
Tratamiento de ratones CBA/J femeninos de 28 días de edad durante 15 días con VCD resulta en agotamiento de folículos primordiales y primarios (que contiene la célula de germen). Ratones CBA/J analizados en sólo 37 días después de la iniciación de la cesación del tratamiento ya muestra de VCD de ciclicidad reproductiva (cornification vaginal persistente), reducido peso ovárico (1,7 mg en aceite solo vs 0,9 mg en VCD-tratados) y agotan primordial y folículos ováricos primarios, en comparación con los controles (figura 2).
Figura 1: Influencia de ovarios joven en vida en recipientes postreproductive. Jóvenes ovarios trasplantados a ratones de meses 11 extendida vida útil en un 11% (GC-Tx-1 n = 14, recibida 60 días de edad, los ovarios nuevo que contiene la célula de germen en 11 meses de edad). Trasplante de ovarios joven a los 17 meses de edad no produjo ningún cambio en la extensión de vida útil (GC-Tx-2 n = 5, recibida 60 días de edad, que contiene la célula de germen nuevo ovarios a los 17 meses de edad). Agotamiento de las células germinales de los ovarios joven antes del trasplante duplicó la extensión de vida útil al 21% (GD-Tx n = 5, recibida 60 días de edad, agotado de la célula de germen nuevo ovarios a los 17 meses de edad). Edad al morir: AAD. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: agotamiento de VCD de folículos pequeños en ratones CBA/J. H & secciones manchadas de E (25 X) mostrando abundantes folículos pequeños (A) en aceite-tratados (n = 6) ratones, (B) reducción en el número de folículos pequeños en VCD-tratado (n = 4) ratones y (C) y diferencias significativas en primordial y primaria números del folículo. Las flechas indican los folículos primordiales y primarios. Representan barras de error SE. por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Ovariectomía y a trasplante de ovarios intactos y agotamiento de la célula de germen se han realizado en ratones de 21 días hasta 18 meses de edad. Cuando se realiza una ovariectomía donde es conveniente mantener la bursa ovárica intacta, se debe tener cuidado cuando incidiendo el tejido bursal. En los ratones mayores de seis meses de edad, gran parte de la bursa se convierte overlaid con la almohadilla de grasa, lo que limita las zonas que pueden utilizarse para el acceso. En estos casos, es a menudo ventajoso para rasgar la bolsa abierta cerca de la frontera de la almohadilla de grasa. Este método deja a menudo un más fácil acceso bolsillo de tejido bursal a 'meter' el nuevo ovario dentro de la bursa. Este enfoque también puede requerir menos de sutura para cerrar el tejido bursal. Girar lateralmente la abertura de la bursa también puede ayudar a mantener el nuevo ovario en su lugar durante la sutura.
Ocasionalmente, el tejido bursal necesita abrirse ampliamente debido a la cobertura de la almohadilla de grasa excesiva, inusual orientación del tracto o recuperar fragmentos de tejido ovárico difícil de recuperar. En estos casos, el nuevo ovario puede no efectivamente 'meterse' en la bursa. Si el ovario está situado encima de la bursa abierta y más de la mitad del ovario está cubierta por el tejido bursal restante, se coloca una sutura en jareta bien desde el borde roto de la bursa y rodeando el ovario. La jareta se aprieta lentamente, el ovario es empujado hacia abajo en la bursa restantes y la bursa se cierra lo suficiente para mantener los ovarios en su lugar, pero no puede cerrar completamente. Si el ovario está situado encima de la bursa abierta y menos de la mitad del ovario está cubierta por el tejido bursal restante, una sutura se coloca bien desde el borde roto de la bursa por un lado, a través del ovario, a través de la bursa en el lado opuesto y anudada en la parte superior del ovario. Este método puede requerir múltiples suturas y no dará lugar a una cobertura completa del ovario por el tejido bursal. Sin embargo, este método se sostienen el ovario en su lugar y permitir revascularización eficiente y la eventual reanudación de la actividad ovárica.
Cuando se realiza una ovariectomía donde es deseable para mantener intacta la bursa ovárica, debe tener cuidado para asegurar que todo el tejido ovárico endógeno se extrae. Esto puede ser difícil con un grande ovario endógeno. Para conservar como tejido bursal tanto como sea posible, se pueden quitar ovarios grandes en pedazos. Sin embargo, cuando se utiliza este método, vigilancia adicional debe utilizarse para asegurar que se extirpa todo el tejido ovárico endógeno. Esto puede ser difícil después de que se extirpa parte del ovario y la bursa se ha llenado de sangre. Puede colocar un pequeño trozo de esponja hemostática en la bursa abierta para desplazar la sangre y ayuda en la coagulación dentro de la bursa. Después de 30-60 s, se retira la esponja hemostática y se inspecciona la bursa (la bursa puede también enjuagarse ligeramente con una solución salina) para la presencia de cualquier fragmento ovario restante.
Trasplante de ovario requiere que del ovario trasplantado se separará de su suministro de sangre establecido y revascularización del ovario en su nuevo hogar no es inmediata. Debido a esto, el ovario trasplantado sufre algunas necrosis, principalmente involucrando los folículos maduros o contratación. Sin embargo, la gran mayoría de ovarios trasplantados muestra la actividad cíclica poco después del trasplante y algunos trasplantados continuará ciclo hasta la muerte. Por lo tanto, la pérdida de los folículos debido a la necrosis del trasplante parece no influir fuertemente el establecimiento de la integración del ovario trasplantado en su nuevo huésped.
Una opinión predominante en mamífero envejecimiento es que el estrógeno representa la influencia reproductiva sólo importante en la salud. Los dramáticos cambios observan en la salud de ratones que recibieron nuevos ovarios podrían ser despedidos fácilmente como una simple restauración de los niveles de estrógeno en circulación. Sin embargo, en un estudio reciente, replicado independientemente por tres laboratorios20, 17-α-estradiol no tuvo efecto en la vida femenina cuando se alimenta desde los 10 meses de edad. Ciertamente no es la misma hormona como la 17-β-estradiol más bien conocida, pero muchos de los efectos de salud asociados de estrógeno se han atribuido al 17-α-estradiol señalización21. Terapia de estrógenos se ha demostrado que tiene influencias tanto positivas como negativas en muchas patologías relacionadas con la edad en mujeres postmenopáusicas y claramente no posee la misma influencia en las mujeres posmenopáusicas como lo hace en mujeres jóvenes. Mientras que la producción de estrógeno estimula a la célula de germen es crítica para la reproducción, en la menopausia, disminución de células germinales de los ovarios todavía poseen atributos de promoción de la salud, como la extirpación de los ovarios postreproductive más aumenta las tasas de mortalidad, incluyendo enfermedades relacionadas con la edad22. Ovariectomizadas ratones tienen ligeramente vidas más cortas que los ratones de cirugía simulada (715 días vs. 728 días, respectivamente19). Si evolutivamente se conservan los mecanismos que influyen en la longevidad, evidencia de organismos modelo discute contra una explicación sólo estrógeno para salud abarcan extensión en mamíferos.
Trasplante de ovarios con y sin células de germen activadas ha restaurado beneficios para la salud a un nivel que solo la terapia hormonal ha luchado para alcanzar. Muchos aspectos de la salud, que son influenciados negativamente por el envejecimiento en las mujeres, pueden ser influenciados positivamente por el reestablecimiento de la función ovárica activa en ratones envejecidos. Sin embargo, estudios experimentales recientes sugieren que estos efectos pueden ser, hasta cierto punto, independiente de las hormonas ováricas de células germinales.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Investigación en esta publicación fue apoyada por una generosa donación de ratones CBA hembra de 14 meses de edad del Instituto Nacional sobre el envejecimiento, de Colonia de roedores (Nancy Nadon) y por la Universidad del estado de Utah, escuela de medicina veterinaria, Departamento de animales, productos lácteos y Ciencias Veterinarias.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2x2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
References
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