Colección de postnupcial Semen del aparato reproductor femenino y las mediciones de licuefacción del Semen en ratones

Resumen

Licuefacción del semen es necesario para liberarse del gel seminal de los espermatozoides. Este estudio proporciona los procedimientos para la recogida de semen del coito posterior al tracto reproductor femenino y medir el tiempo de licuefacción del semen.

Resumen

En ratones, el eyaculado se deposita en el útero. Después de la eyaculación, el semen cambia de consistencia de gel-como acuosa, un proceso llamado licuefacción. En este estudio, se muestra cómo recoger el post eyaculado en el aparato reproductor femenino en un modelo murino. Ratones hembra en primer lugar, adulto en la etapa de estro se alojaron en la jaula del macho durante la noche. A la mañana siguiente, la cópula fue confirmada por la presencia de copula tapón en la abertura vaginal. Ratones hembra con enchufes copulador fueron sacrificados, y cada tracto reproductivo fue recogido como un todo (vagina, útero, oviductos, ovarios), asegurando un sistema cerrado para contener el semen. El tracto reproductivo fue colocado en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mL, y la vagina fue cortada para liberar el semen en el tubo. Para asegurar el volumen de semen máximo para el análisis, pinzas sin dientes se utilizan para exprimir los cuernos uterinos del extremo ovárico al extremo vaginal expulsando el semen restante. El tracto reproductivo entero luego fue descartado. El tubo que contiene el semen brevemente fue hecho girar hacia abajo. Una pipeta capilar de 25 μL se colocó en el tubo en un ángulo de 180 º (paralelo a la pared del tubo). Se registró la cantidad de tiempo usada para llenar el tubo capilar hasta la 25 μL. Semen de un criador macho probado generalmente toma aproximadamente 60-180 s para llenar un tubo capilar de 25 μL. Esta técnica de recogida de semen también puede ser utilizada en otras aplicaciones posteriores como el análisis de la proyección de imagen y de la motilidad de esperma.

Introducción

El tracto reproductor femenino se compone de los tractos superiores e inferiores. El tracto reproductivo superior incluye las trompas de Falopio, el útero y el endocervix. El tracto reproductivo inferior incluye el exocérvix y la vagina. En los seres humanos, el eyaculado se deposita en la pared anterior de la vagina, junto al ectocérvix¹. En ratones, sin embargo, el semen se barre en el útero dentro de minutos después del acoplamiento².

Semen contiene gel seminal que se solidifica dentro de segundos de la eyaculación, causando el esperma para ser atrapados e inmovilizados³

Protocolo

Todos los animales y los procedimientos utilizados en este estudio se manejaron según las directrices de la Comisión de uso y cuidado de animales de la Universidad de estado de Washington (WSU) y en cumplimiento de protocolos de animales aprobado WSU #4702 y #4735.

1. ratones

1. Uso estándar C57BL/6J ratones machos adultos u otras cepas de interés. Mantener los animales bajo un ambiente controlado de temperatura y humedad, con acceso ad libitum de agua y alimentos.
   1. Utilizar mejoradores masculinos desde 8 semanas de edad hasta 10 meses de edad. Utilice sólo los criadores probados en los experimento....

Resultados

Semen se recolectó de CTRL y KO hembras aproximadamente 8 h después de aparearse con los machos fértiles de CTRL. Licuefacción (o viscosidad del semen) se cuantifica por el tiempo necesario para llenar el tubo capilar de 25 μL de semen. Asumió el esperma recogido de úteros CTRL 2.06 min ±0.12 (mean±S.E.M, n = 5) para llenar el tubo capilar (figura 1). Sin embargo, el esperma recogido de úteros KO tomó más de 60 min (60,0 ±0.0, mean±S.E.M, n = 5) de tiempo experimental. Esto.......

Discusión

Recogida de semen de úteros de ratón puede proporcionar ventajas sobre el análisis de semen en vitro como la anterior puede ilustrar las interacciones fisiológicas entre el semen y las secreciones del tracto reproductivo femenino. Las técnicas presentadas en este estudio permiten a los investigadores a determinar la calidad del semen así como viabilidad espermática y la motilidad en condiciones fisiológicas ideales. Además, hay varios análisis posteriores que se pueden realizar utilizando el esperma rec.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Palillo	de dientes Diamond	750-Flat	esterilizado en autoclave, use palillo de dientes romo. No utilice
tijeras de disección de	Fisher	08-940
Tijeras de resorte	Roboz	RS-5600
Pinzas finas	Roboz	RS-5045
25-μ Tubo capilar de vidrio L	VWR	53432-761
Leibovitz' s L-15 medios	Life Technologies 11415064		Suplemento con 1% de
suero fetal bovino (FBS)	Gemini Bio-Products	100-106
Tubo de microcentrífuga de 1,5 ml	Axygen	MCT-150-C
Tubo de microcentrífuga de 2 mL	Axygen	MCT-200-A
Calefactor digital de bloque seco	VWR	13259-052	Para calentar el tubo de microcentrífuga antes de la extracción de semen
minicentrífuga	Corning	LSE 6765
placa de cultivo de 35 mm	VWR	10861-656
tubo de centrífuga de polipropileno de 15 ml	VWR	10025-686
Baño de agua	Precision	TSGP05
Microscopio estereoscópico de platina calefactada	Leica Microsystems	MZ10F	Para mantener el tejido caliente antes de Recogida de semen
Microscopio de campo claro	Leica Microsystems	DMi8	Opcional. Para la obtención de imágenes de vídeo de la motilidad de los espermatozoides, la
cámara	Leica Microsystems	DMC2900	opcional. Para la obtención de imágenes de vídeo de la motilidad de los espermatozoides
Portaobjetos	de vidrio Fisher	12-552-3	Opcional. Para la adquisición de imágenes de vídeo de la motilidad de los espermatozoides
Coverslip	VWR	48393-059	Opcional. Para la obtención de imágenes de vídeo de la motilidad de los espermatozoides
lejía			diluida en dH2O a una concentración del 10%

punta ,