Establecimiento de un cultivo primario de Sarcoma de tejidos blandos derivados del paciente

Resumen

El siguiente protocolo se centra en el establecimiento de un cultivo primario de sarcoma de tejidos blandos derivados del paciente (STS). Este modelo podría ayudarnos a entender mejor el fondo molecular y perfil farmacológico de estos raros tumores malignos y podría representar un punto de partida para futuras investigaciones destinadas a mejorar la gestión de STS.

Resumen

Sarcomas de tejidos blandos (STB) representan un espectro de neoplasias heterogéneas con un difícil diagnóstico, clasificación y gestión. Hasta la fecha, se han identificado más de 50 subtipos histológicos de estos raros tumores sólidos. Así, debido a su extraordinaria diversidad y baja incidencia, nuestra comprensión de la biología de estos tumores es todavía limitada. Paciente derivados de culturas representan la plataforma ideal para el estudio de la farmacología y patofisiología de STS. Así desarrollamos un modelo humano de preclínico de STS a partir de muestras tumorales de pacientes sometidos a resección quirúrgica. Paciente derivado STS cultivos celulares fueron obtenidos de los especímenes quirúrgicos por digestión de colagenasa y aislados por filtración. Las células cuentan, semillas y quedaban durante 14 días en cultivos monocapa estándar y luego procesadas por análisis aguas abajo. Antes de realizar el análisis moleculares o la farmacia, el establecimiento de cultivos primarios STS fue confirmado a través de la evaluación de características cytomorphologic y, cuando esté disponible, marcadores immunohistochemical. Este método representa una herramienta útil 1) para estudiar la historia natural de estas neoplasias pobremente explorados y 2) para probar los efectos de diferentes fármacos en un esfuerzo para aprender más sobre sus mecanismos de acción.

Introducción

Sarcomas de tejidos blandos (STB) incluyen un espectro de lesiones heterogéneas de origen mesenquimal representa 1% de todos los tumores sólidos^1,2, y la nueva clasificación de la Organización Mundial de la salud reconoce la presencia de más de 50 diferentes subtipos³. Entre estos, los histotypes más comunes son sarcoma del adipocito o liposarcoma y el leiomiosarcoma, representando el 15% y 11% de todos adultos STS, respectivamente^4,5. Aunque STS puede desarrollar en diferentes partes del cuerpo, las extremidades y retroperitone....

Protocolo

STS células están aisladas de un tumor suprimido masa quirúrgico de pacientes con STB. El protocolo ha sido aprobado por el Comité de ética Local y se realiza según las directrices de buena práctica clínica y la declaración de Helsinki. Todos los pacientes dieron consentimiento informado para participar en el estudio. Los especímenes quirúrgicos son analizados por un patólogo experimentado sarcoma y procesados dentro de 3 horas de cirugía.

1. tumor recogida de muestras y procesamiento:

1. Recoger las muestras de tumor con la ayuda de un patólogo de sarcoma en un contenedor de orina estéril de 100 mL con 50 mL de DMEM glucosa baja med....

Resultados

Hemos diseñado un método sencillo para obtener el establecimiento de un cultivo primario de sarcoma de tejidos blandos derivados del paciente e informar aquí un ejemplo de los resultados obtenidos en un determinado histotype de STS¹³. El protocolo fue utilizado para el establecimiento de cultivos primarios de diferentes histotypes de STS como liposarcoma bien-distinguido, dedifferentiated liposarcoma, liposarcoma mixoide, liposarcoma pleomórfico, myxofibrosarcoma, .......

Discusión

Modelos preclínicos bien definidos son necesarios para dilucidar el fondo molecular de tumores, predecir pronóstico pobre y desarrollar nuevas estrategias terapéuticas para pacientes con cáncer. Esto es especialmente importante para los tumores raros como STS cuya alta heterogeneidad en términos de morfología, comportamiento agresivo de la clínico y potencial desafía nuestra comprensión de la biología de STS y tratamiento del paciente²¹. Por otra parte, las líneas de células de sarcoma comercial p.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM Alta glucosa	EuroClone	ECB7501L
Suero fetal bovino	EuroClone	ECS0180D
Glutamina	Gibco	25030-024
Solución acuosa de paraformaldehído al 4%, grado EM	Ciencias de la Microscopía Electrónica	157-4-100
Penicilina estreptomicina	Gibco	15140122
Reactivo de triazol	Ambion Life-Technologies	15596018
Tripsina	EuroClone	ECB3052D