Artículo de método

Partícula magnética de ADN vinculante el análisis por la dispersión ligera dinámica y electroforética

DOI:

10.3791/56815

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9 de noviembre de 2017

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1Department of Chemistry and Biochemistry, Mendel University in Brno, 2Central European Institute of Technology, Brno University of Technology

En este artículo

Resumen

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Este protocolo describe la síntesis de partículas magnéticas y evaluación de sus propiedades de unión al ADN mediante dispersión de luz dinámica y electroforética. Este método se centra en monitorear los cambios en el tamaño de las partículas, su polidispersidad y potencial zeta de superficie de la partícula que juegan importante papel en el atascamiento de materiales como el ADN.

Resumen

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Aislamiento de ADN utilizando partículas magnéticas es un campo de gran importancia en la investigación de biotecnología y biología molecular. Este protocolo describe la evaluación de las partículas magnéticas de DNA de enlace vía dispersión ligera dinámica (DLS) y dispersión de la luz electroforética (ELS). Análisis por DLS ofrece valiosa información sobre las propiedades fisicoquímicas de las partículas incluyendo tamaño de partícula, polidispersidad y potencial zeta. Este último describe la carga superficial de la partícula que juega papel importante en la Unión electrostática de materiales como el ADN. Aquí, un análisis comparativo explota tres modificaciones químicas de nanopartículas y micropartículas y sus efectos sobre la Unión de ADN y elución. Modificaciones químicas por ramificaron polietilenimina, Tetraetilo ortosilicato y (3-aminopropil) trietoxisilano son investigados. Puesto que el ADN exhibe una carga negativa, se espera que potencial zeta de superficie de la partícula disminuye al atascamiento de la DNA. Formación de clusters debe afectar también a tamaño de partícula. Para investigar la eficacia de estas partículas en el aislamiento y la elución de la DNA, las partículas se mezclan con el ADN en pH bajo (~ 6), la alta fuerza iónica y el ambiente de la deshidratación. Se lavan las partículas de imán y luego ADN es eluido por tampón Tris-HCl (pH = 8). Número de copias de ADN se estima usando la reacción en cadena cuantitativa de la polimerasa (PCR). Tamaño de partícula, potencial zeta y datos cuantitativos de PCR, polidispersidad se evaluó y se comparó. DLS es una perspicaz y método de análisis que agrega una nueva perspectiva para el proceso de proyección de partículas de ADN de apoyo.

Introducción

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Extracción de ADN es uno de los pasos más esenciales en biología molecular. El desarrollo de métodos de extracción de ácidos nucleicos tiene gran impacto en los campos emergentes de la genómica, la metagenómica, la epigenética y la transcriptómica. Hay una amplia gama de aplicaciones biotecnológicas para el aislamiento de la DNA incluyendo médicos (herramientas forenses y diagnóstico y pronóstico) y aplicaciones medioambientales (diversidad biológica de la metagenómica, prevalencia del patógeno y vigilancia). Ha habido una creciente demanda para purificar y aislar ADN de diversos materiales y en diferentes escalas como sangre, orina, tierra, madera y otros tipos de muestras. 1 , 2 , 3 , 4

Partículas de tamaño nano y micro son convenientes para el aislamiento de ADN debido a su alta área superficial y, en particular cuando puede ser inmovilizados por un campo magnético. Propiedades fisicoquímicas de las partículas, tales como tamaño o carga, pueden influir mucho su capacidad objetivo biomoléculas. 5 para mejorar aún más la Unión de biomoléculas y estabilizar las partículas, se pueden utilizar diferentes modificaciones químicas (capas superficiales). Las muchas estrategias diferentes para el atascamiento se clasifican según las interacciones covalentes y no covalentes. 6 el tamaño de las partículas afecta directamente a sus propiedades de magnetización, considerando que la composición de partículas puede ser adaptado por la incorporación de metal, aleación u otros materiales que pueden influir en su densidad, porosidad y superficie. 7 hay no hay manera confiable para medir la carga superficial de las partículas pequeñas. En cambio, se puede medir potencial eléctrico en el plano de deslizamiento (lejos de superficie de nanopartículas). 8 este valor se llama zeta potencial y es una potente herramienta que se utiliza generalmente para la evaluación de estabilidad de nano y micropartículas por DLS. 9 puesto que su valor depende no sólo el pH y fuerza iónica del medio dispersivo, sino también en las características superficiales de las partículas, puede también probar los cambios en esta superficie causado por la interacción entre el partículas y moléculas de interés. 10

Por otra parte, estructura del ADN en condiciones deshidratado (forma A-ADN) exposiciones conformaciones compactada que facilitan su precipitación (agregación) en comparación a comúnmente ocurriendo forma de B-DNA. Electrostática (iónico y el enlace H) son las principales fuerzas controlando el atascamiento de la DNA a otros materiales debido a su accesible sterically fosfato y nitrógeno bases (sobre todo guanina). 7 , 10

En este trabajo se analizan tres modificaciones químicas representativas de nanopartículas magnéticas y micropartículas (figura 1A). Se describen el método de síntesis y modificación química de nanopartículas y micropartículas. Una solución vinculante, acuerdos de principios teóricos de la precipitación de ADN (pH, fuerza iónica y deshidratación) se utiliza para evaluar la elución y atascamiento de la DNA. PCR cuantitativa se utiliza para evaluar la eficacia de la elución de la DNA de la representante de nanopartículas y micropartículas (figura 1B). Granulometría, índice de polidispersidad y potencial zeta son parámetros importantes que se utilizan para visualizar los cambios fisicoquímicos que ocurren en la superficie de la partícula (figura 1). Es importante destacar en la caracterización química de la superficie de la partícula magnética. Mientras que este paso era más allá del alcance de este protocolo, pueden aplicarse varias técnicas modernas para investigar la eficacia de modificaciones químicas. 11 , 12 , 13 , 14 espectroscopia de infrarrojo de transformación de Fourier (FTIR) puede utilizarse para evaluar el espectro infrarrojo de la superficie de la partícula y se compara con el espectro de modificadores químicos gratis. Espectroscopía de fotoelectrones de rayos x (XPS) es otra técnica que puede utilizarse para identificar la composición elemental de la superficie del material. Pueden utilizar otros métodos electroquímicos, microscópicas y espectroscópicas para arrojar luz sobre la calidad de síntesis de partículas. Este trabajo pone de relieve una nueva perspectiva para el análisis de ADN magnético interacciones de partículas a través de DLS.

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Protocolo

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1. síntesis de nanopartículas magnéticas

  1. síntesis de nanopartículas magnéticas estabilizan con citrato (MNPs)
    1. Añadir 20 mmol de FECLAS 3 ∙ 6 H 2 O (5,406 g) y 10 mmol de FECLAS 2 ∙ 4 H 2 O (1,988 g) en 20 mL de agua bidestilada desoxigenada (agua de ddd). Revuelva obtenida la solución vigorosamente en vaso bajo atmósfera de N 2 con un agitador mecánico hasta obtener una solución transparente.
    2. Bajo agitación mecánica rápida, añadir 150 mL de 1 M NH 4 OH, gota a gota con embudo (tomar 1 h o más si es necesario). Transferir la solución en un vaso screwable después de agregar todos los NH 4 OH. Tornillo de la solución del recipiente y el calor a 75 ° C durante 30 minutos
      PRECAUCIÓN: NH 4 OH está clasificado como corrosivo y peligroso para el medio ambiente.
      Nota: Preparar NH 4 OH solución de alto grado 28% NH 4 OH en agua usando agua desoxigenada.
    3. Recoger el precipitado negro con imán y lavado con 100 mL de agua de ddd. Repita 3 veces. Añadir 50 mL de 0,5 M tri-sodio citrato dihidrato para precipitar. Tornillo de la nave.
      Nota: Utilizar solución desoxigenada de tri-sodio citrato dihidrato.
    4. Volver a dispersar el precipitado mediante sonicación (35 kHz, amplitud del 100%) y un recipiente de calor a 80 ° C por 1 h.
      Nota: Es necesario un sonicador de suficiente potencia.
    5. Deje que la solución se enfríe a temperatura ambiente. Recoger el precipitado usando un imán y eliminar el sobrenadante. Volver a dispersar a barro negro en 50 mL de agua de ddd con sonicador (35 Hz, amplitud de 100%).
    6. Transferir alícuotas (~ 25 mL) en tubos de centrífuga de 50 mL y agregar 20 mL de acetona. Centrifugue a 2400 x g durante 10 min y retirar el sobrenadante.
    7. Volver a dispersar precipitado y dializo solución contra agua con dispositivo de diálisis de corte de bajo peso molecular (500-1.000 Da) de volumen adecuado para 24 h.
      Nota: Prepare el dispositivo de diálisis según fabricante ' requisitos de s.
  2. Síntesis de nanopartículas magnéticas modificadas con polietilenimina ramificado (MNPs_PEI)
    1. añadir 2 mL de la solución obtenida de MNPs (~0.1 g/mL) en un vaso de vidrio. Añadir 38 mL de agua de ddd y someter a ultrasonidos (35 Hz, amplitud de 100%) la suspensión (10 min).
    2. Bajo agitación mecánica rápida, añadir 10 mL de 10% ramificado polietilenimina (promedio 25 kDa). Agitar la solución para posteriores 3 h
    3. Recoger precipita con imán y eliminar el sobrenadante. Volver a dispersar precipitado en 20 mL de agua de ddd. Repita 5 veces y luego someter a ultrasonidos la suspensión final (35 Hz, amplitud de 100%).
  3. Síntesis de nanopartículas magnéticas de partículas modificación con silicona (MNPs_TEOS)
    1. añadir 10 mL de la solución obtenida de MNPs (~0.1 g/mL) en un vaso de vidrio. Añadir 60 mL de agua y 130 mL de etanol. Someter a ultrasonidos solución y agregar 6 mL de 28% NH 4 OH.
    2. Bajo agitación mecánica rápida, añadir 1 mL de Tetraetilo ortosilicato. Agitar la solución para la posterior h. 12
    3. Recoger el precipitado negro con imán y lave con 50 mL de etanol (3 veces) y 50 mL de agua (3 veces). Volver a dispersar las partículas en 10 mL de ddd de agua y someter a ultrasonidos la suspensión (35 Hz, amplitud de 100%).
  4. Síntesis de nanopartículas magnéticas, modificadas con grupos amino (MNPs_APTES)
    1. añadir 5 mL de la solución obtenida de MNPs_TEOS (~0.1 g/mL) en un vaso de vidrio. Agregar 45 mL de agua y 50 mL de etanol. Someter a ultrasonidos solución (35 Hz, amplitud de 100%).
    2. Bajo agitación mecánica rápida, Añadir 0,5 mL de trietoxisilano (3-aminopropil). Agitar la solución para posteriores 3 h
    3. Recoger el precipitado negro con imán y lave con 50 mL de etanol (3 veces) y 50 mL de agua (3 veces). Volver a dispersar las partículas en 5 mL de ddd de agua y someter a ultrasonidos la suspensión (35 Hz, amplitud de 100%).

2. Síntesis de micropartículas magnéticas

  1. síntesis de micropartículas magnéticas estabilizan con citrato (MMPs)
    1. añadir 25 mL de 2 M 3 de KNO, 12,5 mL de 1 M de KOH y 205,875 mL de ddd agua en un vaso screwable. Añadir 6,675 mL de 1 M de FeSO 4 durante la agitación magnética. Inmediatamente transferencia buque a un baño de agua precalentada (90 ° C) durante 2 h.
      Nota: Preparar soluciones KOH en ddd y KNO 3 agua.
    2. Deje que la solución se enfríe a temperatura ambiente. Recoger el precipitado negro con imán y lavado con 50 mL de agua de ddd (5 veces). Añadir 50 mL de 0,5 M tri-sodio citrato dihidrato para precipitar. Tornillo de la nave.
    3. Redisperse el precipitado mediante sonicación (35 kHz, amplitud del 100%) y un recipiente de calor a 80 ° C para precipitado negro recoge 1 h. con imán y lavado con 50 mL de agua de ddd (10 veces).
    4. Modificar MMP con polietilenimina ramificado (MMPs_PEI), sílice (MMPs_TEOS) y grupos amino (MMPs_APTES) similares al Protocolo de MNPs. Consulte las secciones 2.2, 2.3 y 2.4, respectivamente para más detalles.
  2. Síntesis de micropartículas magnéticas modificadas con polietilenimina ramificado (MMPs_PEI)
    1. añadir 5 mL de solución de MMPs (~0.1 g/mL) en un vaso de vidrio. Añadir 38 mL de agua de ddd y someter a ultrasonidos la solución (35 Hz, amplitud del 100%, 10 min). Bajo agitación mecánica rápida agregar 10 mL de 10% ramificado polietilenimina (promedio 25 kDa). Agitar la solución para posteriores 3 h
    2. Recoger el precipitado usando un imán y eliminar el sobrenadante. Redisperse precipitado 20 ml de agua bidestilada. Repita 5 veces y luego someter a ultrasonidos la solución final (35 Hz, amplitud de 100%).
  3. Síntesis de micropartículas magnéticas modificada con silicona (MMPs_TEOS)
    1. añadir 5 mL de solución de MMPs (~0.1 g/mL) en un vaso de vidrio. Añadir 60 mL de agua y 130 mL de etanol. Someter a ultrasonidos suspensión (35 Hz, amplitud de 100%) y añadir 6 mL de 28% NH 4 OH.
    2. Bajo agitación mecánica rápida, añadir 1 mL de Tetraetilo ortosilicato. Agitar la solución para la posterior h. 12
    3. Recoger el precipitado negro usando un imán y lave con 50 mL de etanol (3 veces) y 50 mL de agua (3 veces). Redisperse partículas en 5 mL de agua de ddd y someter a ultrasonidos la suspensión (35 Hz, amplitud de 100%).
  4. Síntesis de micropartículas magnéticas modificado con grupos amino (MMPs_APTES)
    1. añadir 3 mL de solución de MMPs_TEOS (~0.1 g/mL) en un vaso de vidrio. Agregar 45 mL de agua y 50 mL de etanol. Someter a ultrasonidos la suspensión (35 Hz, amplitud de 100%).
    2. Bajo agitación mecánica rápida, Añadir 0,5 mL de trietoxisilano (3-aminopropil). Agitar la solución para posteriores 3 h
    3. Recoger el precipitado negro con imán y lave con 50 mL de etanol (3 veces) y 50 mL de agua (tiempo 3). Redisperse partículas en 3 mL de agua de ddd y someter a ultrasonidos la suspensión (35 Hz, amplitud de 100%).

3. Magnética partícula tamaño análisis utilizando DLS

  1. tamaño de partícula en agua
    1. uso un DLS instrumento que se aplica un posterior dispersión detector de ángulo (173 °) y una longitud de onda del haz de 633 nm.
      Nota: Back scattering DLS es adecuado para muestras concentradas donde puede evitarse la dispersión múltiple. Dispersión lateral (ángulo 90° de detector) y dispersión hacia delante (15° de ángulo del detector) DLS son convenientes para las partículas más pequeñas y mezcladas partículas, respectivamente.
    2. Previo a la medición en el agua, someter a ultrasonidos partículas por 3 minutos
      Nota: Utilizar una solución diluida de las partículas. Para ello, mezcla 9,6 μl de partículas con 96 μl de agua.
    3. Cuidadosamente pipetee 50 μl de solución de la partícula en látex poliestireno cubetas y evitar formación de burbujas de.
      Nota: Para cada muestra usar cubeta desechable (véase la tabla de materiales).
    4. En cuenta la claridad de la cubeta y la dirección del haz de luz. Insertar la celda en el porta muestra y cerrar la cámara de.
    5. Utiliza los siguientes parámetros de medición: temperatura: 25 ° C, índice de refracción de la fase dispersa (hierro): 2.344; índice de refracción del medio dispersivo (agua): 1,333
      Nota: Realizar la medida del índice de refracción utilizando un refractómetro para obtener resultados más precisos, especialmente cuando el desarrollo de materiales de la novela o el híbrido.

4. Preparación de Stock de ADN, partículas magnéticas y tampón de Binding

  1. stock de ADN
    1. uso tampón de 10 mM Tris-HCL (pH = 8) para la dilución y almacenamiento de ADN. Utilizar una muestra de ADN estándar que puede ser amplificada específicamente con un protocolo PCR directo en el laboratorio (consulte la sección 5.2 para las condiciones y parámetros de reacción). Para amplificar 498 par base (bp) del gene de xis de control de bacteriófago λ, utilice los siguientes iniciadores. Adelante la cartilla: 5 ' - CCTGCTCTGCCGCTTCACGC - 3Ɔ Revertir la cartilla: 5 ' - TCCGGATAAAAACGTCGATGACATTTGC - 3 '
    2. producto de PCR de purificar mediante kit de purificación de ADN comercial.
      Nota: Producción de kits comerciales mediante procedimiento basado en la columna de sílice > purificado de 100 ng/μl ADN.
    3. Medida de concentración de ADN mediante el método espectrofotométrico (absorbancia a 260 nm). Diluir el stock de ADN de 10 11 copias/μl como se indica arriba a soluciones de trabajo de 10 10 10 9 10 8 y 10 7 copias/μl.
      Nota: El número de copias del producto de PCR se puede calcular según la siguiente ecuación, asumiendo el peso molecular promedio es de 650 Da para cada bp:
      copias/μl de ADN = (cantidad en ng/μl * 6.022x10 23 copias/mol) / (498 bp * 650 g/mol de bp * 1 x 10 9 ng/g)
  2. partículas magnéticas
    1. permite las partículas de sedimento sin el imán y eliminar el sobrenadante. Mezcla de 1:20 ratio v/v de partículas magnéticas con ddd agua (partículas: agua).
      Nota: Enfoque basado en el volumen se utiliza para describir cantidades de partículas magnéticas, ya que eran fácilmente difíciles comparar masas iguales de MNPs y MMPs.
  3. Binding buffer
    1. para la preparación rápida de solución de HCL de acetato de sodio de 0.75 M (pH = 6), mezclar 1 mL de acetato de sodio de 3 M con 3 mL de ácido clorhídrico de 1 mM.
      Nota: Todas las soluciones utilizadas en encuadernación pueden almacenarse a 4 ° C. Nota que baja temperatura aumenta significativamente la Unión particular en el caso de solución de etanol. Controlar la temperatura de las soluciones para la mejor reproducibilidad y exactitud de la detección.

5. Pruebas de eficiencia de ADN aislamiento utilizando PCR cuantitativa

  1. aislamiento de ADN modificado MMPs o MNPs
    1. utilizar una placa de 96 pocillos y un imán personalizado para placa de 96 pocillos para experimentos de pequeño volumen.
    2. Use el siguiente enlace solución mezcla: 8 μl modificado MMPs o MNPs, 10 μl sodio acetato-HCl (0.75 M, pH = 6), 60 μL de etanol al 85%, 10 μl de DNA (solución de copias de 10 10).
    3. Mezcla bien mediante pipeteo y coloca la placa sobre el imán durante 3 minutos. Mientras que la placa está en el imán, retirar la solución y añadir 100 μl de etanol al 85% para el lavado.
    4. Quitar etanol.
      Nota: Deje que el etanol se seque durante unos segundos pero no deje que las partículas demasiado seco o mostrar grietas. Si las partículas se secan demasiado será difíciles de disolver con solución de elución.
    5. Extraiga la placa del imán y agregar 40 μl de solución de elución. Mezclar por pipeteo. Coloque la placa en el imán y recoger ADN eluída (~ 37 μL). Almacenar eluyente a-20 ° C hasta análisis.
  2. PCR cuantitativa
    1. utilizar los iniciadores que se utilizaron para preparar stock ADN en el paso 4.1.1 cuantificar copias del gen xis, según el Protocolo por Haddad et al. 10
    2. mix master la solución según la cantidad de muestras a ensayar, a continuación, distribuir la mezcla en tubos PCR o una placa de 96 pocillos de fondo blanco.
    3. Utilizar las siguientes cantidades para un volumen total de la mezcla PCR de 20 μl: 10 polimerasa μl / intercalando mezcla de tinte (véase tabla de materiales), 2 μl de muestra de ADN, primer avance 2 μl (10 μm), primer revés de 2 μl (10 μm)
    4. Configurar el termociclador según el siguiente programa: 95 ° C por 120 s, 40 ciclos (95 ° C por 15 s, 64 ° C por 15 s, 68 ° C por 45 s), 68 ° C por 5 min
    5. Triplicado usando estándares y muestras, calcular el umbral de ciclo y construir una curva estándar para estimar el número de copias de ADN obtenido en cada muestra. El instrumento utilizado aquí realiza esto automáticamente.
    6. , El número de copias de ADN se estima para el volumen de elución total (~ 40 μL). Porcentaje de ADN obtenido corresponde a la cantidad original añadida obligatorio solución (totalmente 10 11 copias) puede variar más allá del intervalo de 0 a 100.

6. Utilizando DLS de obligatorio análisis de ADN magnético partículas

experimentos
  1. Atascamiento de la DNA
    1. de gran volumen (en tubo de 1,5 mL), utilizar la siguiente mezcla de solución vinculante: 96 μl modificado MMPs o MNPs, 120 μl sodio acetato-HCl (0,75 M, pH = 6), 720 μl de etanol al 85%, 120 μl ADN (solución de copias de 10 10) o 120 μl de tampón Tris-HCL (10 mM, pH = 8) para el control de.
  2. Análisis de potenciales zeta
    1. Prepare dos soluciones de enlace, uno con el ADN y otro con tampón Tris-HCL para control como se indica en el paso 6.1.1. Para evitar formación de burbujas, cuidadosamente pipetear 800 μl de la mezcla obligatoria en una celda disponible.
      Nota: Use cubeta desechable para medición de potencial zeta superficial (véase la tabla de materiales).
  3. Utilice los siguientes parámetros para la medición en el instrumento DLS: modelo de Smoluchowski con una F(ka) de 1.5, temperatura: 25 ° C, índice de refracción de la fase dispersa (hierro): 2.344, índice de refracción del medio dispersivo (agua): 1,333.
    Nota: La tasa de interacción partícula magnética de ADN afecta directamente a la medición de repeticiones. Una sola medición en el instrumento toma s 60-70. Aquí, el instrumento se le ordenó tomar 10 medidas con 1 min de intervalos de retardo. Para simplificar, los resultados se mostrarán en tiempo = 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 y 18 minutos de la primera lectura.

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Resultados

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Utilizando el protocolo descrito aquí para síntesis química y la modificación de las partículas magnéticas, seis partículas magnéticas se sintetiza y se analizaron para el atascamiento de la DNA. Un resumen del análisis se muestra en la tabla 1. Comparando el tamaño de las partículas en el agua y en la solución de Unión, es claro que todas las partículas de agregaron en enlace solución por pliegues 2-22. Algunas partículas más agregan a más pliegues en la presencia de ADN...

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Discusión

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En el presente Protocolo, los principios teóricos que explican la Unión de ADN a las partículas magnéticas vía potencial zeta estaban bajo pregunta. El protocolo describe la síntesis y modificación de nanopartículas magnéticas y micropartículas. También se describen el método para la preparación de la solución de control y enlace de ADN. Aquí se muestran dos estrategias para la detección de interacciones de partículas de ADN: PCR cuantitativa y DLS se acerca. DLS ofrece tres indicadores de cambios fisicoquímicos en las p...

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Divulgaciones

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Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mucho se reconoce el apoyo financiero por la Fundación para la ciencia Checa (proyecto GA CR 17-12816S) y CEITEC 2020 (LQ1601).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cloruro de hierro (III) hexahidratadoSigma-Aldrich207926Síntesis de partículas magnéticas
Cloruro de hierro (II) tetrahidratadoSigma-Aldrich380024Síntesis de partículas magnéticas
Sulfato de hierro (II) heptahidratadoSigma-AldrichF8263Síntesis de partículas magnéticas
AcetonaPenta10060-11000 Síntesis departículas magnéticas
Citrato de sodio dihidratadoSigma-AldrichW302600Síntesis de partículas magnéticas
Ortosilicato de tetraetiloSigma-Aldrich 131903Síntesis de partículas magnéticas
(3-aminopropil)trietoxisilanoSigma-Aldrich440140Síntesis de partículas magnéticas
Polietilenimina, ramificada, promedio Mw ~25,000Sigma-Aldrich408727Síntesis de partículas magnéticas
Solución de hidróxido de amonioSigma-Aldrich221228-M Síntesis de partículas magnéticas
EtanolPenta71250-11000Síntesis de partículas magnéticas
Nitratode potasio Sigma-AldrichP6083Síntesis de partículas magnéticas
Hidróxido de potasioSigma-Aldrich1.05012Síntesis de partículas magnéticas
membrana de corte de peso molecular (Mw = 1 kDa)Laboratorios de espectroG235063Síntesis
de partículas magnéticasAgitador de techocon Labortechnik GmbHDH. WOS01035Síntesis de partículas magnéticas
Baño de aguaMemmert GmbH + Co.84198998Síntesis de partículas magnéticas
SonicatorBandelin795Síntesis de partículas magnéticas
MARCA Cubeta UV microSigma-AldrichBR759200-100EACubeta para medición de tamaño
Tapón de MARCA para cubeta UV microSigma-AldrichBR759240-100EATapones de cubeta para medición de tamaño
Capilar Plegado Zeta Cell MalvernDTS1070Cubeta para la medición del potencial zeta
Zetasizer Nano ZSMalvernZEN3600Dispositivo para la medición del tamaño y el potencial zeta
Infinite 200 PRO
NanoQuant instrumento		Tecan396 227 V1.0, 04-2010dispositivo para la medición de la concentración de ADN
SYBR Green Kit RT-PCR CuantitativoSigma-AldrichQR0100Kit de PCR
Mastercycler pro S instrumentoEppendorf6325 000.013Termociclador
Kit MinEluteQiagen28004Kit de purificación de ADN
Acetato de sodioSigma-AldrichS7670Unión de ADN

Referencias

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