Fabricación de superficies de cristal de calidad óptica para estudiar la fusión de macrófagos

James J. Faust; Wayne Christenson; Kyle Doudrick; John Heddleston; Teng-Leong Chew; Marko Lampe; Arnat Balabiyev; Robert Ros; Tatiana P. Ugarova

doi:10.3791/56866

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Artículo de método

Fabricación de superficies de cristal de calidad óptica para estudiar la fusión de macrófagos

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DOI:

10.3791/56866

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14 de marzo de 2018

James J. Faust¹^,² , Wayne Christenson³^,⁴^,⁵ , Kyle Doudrick⁶ , John Heddleston⁷ , Teng-Leong Chew⁷ , Marko Lampe⁸ , Arnat Balabiyev¹^,² , Robert Ros³^,⁴^,⁵ , Tatiana P. Ugarova¹^,²

¹Center for Metabolic and Vascular Biology, Mayo Clinic, ²Molecular and Cellular Biosciences, School of Life Sciences, Arizona State University, ³Department of Physics, Arizona State University, ⁴Center for Biological Physics, Arizona State University, ⁵Biodesign Institute, Arizona State University, ⁶Department of Civil and Environmental Engineering and Earth Sciences, University of Notre Dame, ⁷Advanced Imaging Center, HHMI Janelia Research Campus, ⁸Advanced Light Microscopy Facility, European Molecular Biology Laboratory

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe la fabricación de las superficies de cristal de calidad óptica adsorbido con compuestos que contengan hidrocarburos de cadena larga que pueden ser utilizados para controlar la fusión de macrófagos de ejemplares vivos y permite la microscopía de superresolución de muestras fijas .

Resumen

Visualizar la formación de células gigantes multinucleadas (MGCs) de ejemplares vivos ha sido un desafío debido a que las técnicas de imagen más vivo requieren de propagación de la luz a través del vidrio, pero en vidrio fusión de macrófagos es un acontecimiento raro. Este protocolo presenta la fabricación de varias superficies de cristal de calidad óptica donde la adsorción de compuestos que contienen hidrocarburos de cadena larga transforma vidrio una superficie fusogénicas. En primer lugar, se describe la preparación de limpieza de superficies de vidrio como material para la modificación superficial de partida. En segundo lugar, un método se proporciona para la adsorción de compuestos que contienen hidrocarburos de cadena larga para convertir no fusogénicas vidrio en un substrato fusogénicas. En tercer lugar, este protocolo describe fabricación de micropatrones superficie que promueven un alto grado de control spatiotemporal sobre formación de MGC. Por último, se describe fabricación de platos de fondo de vidrio. Se muestran ejemplos de uso de este sistema de célula en vitro como un modelo para estudiar la fusión de macrófagos y la formación de MGC.

Introducción

La formación del MGCs acompaña a una serie de estados patológicos en el cuerpo humano caracterizado por inflamación crónica¹. A pesar del acuerdo que mononucleated macrófagos se fusionan para formar MGCs², sorprendentemente pocos estudios han demostrado fusión en contexto con vivas muestras de³^,⁴. Esto es porque las superficies de vidrio limpio que se requieren para la mayoría de técnicas de imagen no favorecer la fusión de macrófagos cuando inducida por citoquinas inflamatorias⁵. De hecho, si limpio de vidrio se utiliza como sustrato para....