Homeobox genes son genes reguladores, a menudo asociados con tumores en los organismos adultos. Investigamos su expresión comparativa por inmunohistoquímica y análisis PCR en tiempo real, en normal e inflamatoria de la mucosa nasal y en neoplasmas de sinonasal para utilizarlas como posibles dianas diagnósticas y terapéuticas.
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Artículo de método
Identificación de OTX1 y OTX2 como dos posibles marcadores moleculares para los Carcinomas Sinonasal y Neuroblastomas olfatorios
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En este artículo
Resumen
Resumen
Los genes homeobox (HB) OTX se expresan durante la morfogénesis embrionaria y durante el desarrollo del epitelio olfativo en organismos adultos. Las mutaciones en estos genes suelen relacionarse con la tumorigénesis en humanos. No hay datos están disponibles en la actualidad respecto a la posible correlación entre los genes OTX y tumores de la cavidad nasal. El objetivo de este trabajo es entender si OTX1 y OTX2 pueden considerarse como marcadores moleculares en el desarrollo de tumores nasales. Se seleccionaron los adenocarcinomas nasales y sinonasal para investigar la expresión de los genes OTX1 y OTX2 mediante inmunohistoquímica y análisis PCR en tiempo real. OTX1 y OTX2 estuvieron ausentes en todas las muestras de sinonasal Adenocarcinomas de tipo Intestinal (ITACs). OTX1 mRNA fue identificado solamente en los Adenocarcinomas de tipo Intestinal no (NITACs) mientras que el mRNA de OTX2 fue expresado solamente en Neuroblastomas olfatorios (ONs). Hemos demostrado que la expresión génica diferencial de los genes OTX1 y OTX2 podría ser un marcador molecular útil para distinguir los diferentes tipos de tumores sinonasal.
Introducción
OTX Los genes de la HB son el homólogo vertebrado de los genes de orthodenticle de Drosophila (otd) codifican para factores de transcripción que se expresan normalmente durante la morfogénesis embrionaria, y puede expresarse también en el organismo adulto con diversas funciones . Durante el desarrollo embrionario que controlan la especificación de identidad celular, diferenciación celular y la colocación de la axis¹ del cuerpo. La familia OTX incluye genes OTX1 y OTX2 que muestran diversas funciones. OTX1 participa en el cerebro y el desarrollo del órgano sensorial. En el organismo adulto, que se expresa en órganos sensoria....
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Protocolo
Todos los estudios fueron realizados según la declaración de Helsinki (1975) con el consentimiento informado por escrito y aprobado por el Comité de ética de la Universidad de Insubria en Varese.
1. recolección de las muestras
- Recoger y todas las muestras humanas de Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) se dividen en diferentes subgrupos según la clasificación del WHO de tumores de cabeza y cuello14.
Nota: Aquí utilizamos las siguientes muestras: mucosa sinonasal Normal como control (10 muestras); Papiloma invertido (PI, código de la CIE-O 8121/1); ITAC Sinonasal (ICD-O code 8144/3, 32....
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Resultados
En la mucosa normal se observó reactividad nuclear fuerte y homogénea para los genes OTX en el epitelio seudoestratificado ciliado de tipo respiratorio y en las células glandulares submucosas (figura 1A). Encontramos expresión nuclear para OTX1 en todas NITACs las muestras (figura 1B), mientras que poco o ausente immunoreactivity fue destacada en ITACs (figura 1). Immunoreactivity intenso estuvo pres.......
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Discusión
Este estudio muestra por primera vez que, a niveles del mRNA, se expresan los genes de la HB OTX1 y OTX2 sinonasal normal mucosa y las glándulas submucosal, pólipos inflamatorios, papilomas de Schneiderian sinonasal y en las distintas epiteliales y neuroectodérmicos Neoplasias, incluyendo epidermoide sinonasal adenocarcinomas de tipo no-intestinales, tumores tipo glándula salival, neoplasias neuroendocrinas y ONs.
Modificaciones y resolución de problemas:
Para evitar l.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por Centro Grandi Strumenti Università dell'Insubria, Fundación Comunitaria del año, Fundación del Monte de Lombardía y Fondazione Anna Villa e Felice Rusconi.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| RecoverAll Aislamiento total de ácidos nucleicos | Biosistema aplicado | AM1975 | |
| Kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad | Applied Biosystem | 4368814 | |
| TaqMan Mezcla maestra de PCR universal, sin AmpErase UNG | Biosistema aplicado | 4326614 | |
| ABI Prisma 7000 | Applied Biosystem | 270001857 | |
| sonda ACTB | Applied Biosystem | Fuera de producción. Secuencia protegida por derechos de autor | |
| Sonda OTX1 | Applied Biosystem | Fuera de producción. Secuencia protegida por derechos de autor | |
| Sonda OTX2 | Applied Biosystem | Fuera de producción. Secuencia protegida por derechos de autor | |
| Peróxido de hidrógeno acuoso | Merk | 1072090250 | |
| Tampón de citrato | Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Cabra Anticuerpo Anti-OTX2 | Laboratorios | Fuera de producción. Número de catálogo no disponible | |
| Conejo Anticuerpo Cabra | Vector Laboratorios | BA5000 | |
| ABC-Peroxidasa Complejo | Vector Laboratorios | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidina tetrahidrocloruro (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxilina | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
Referencias
- Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).
- Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor....
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Reimpresiones y permisos
