Waiting
Procesando inicio de sesión ...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

ניצול אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה על צג תחילת גידול וצמיחה מודלים מהונדס גנטית לסרטן הלבלב

Published: April 7, 2018 doi: 10.3791/56979
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Department Gastroenterology and Gastrointestinal Oncology, University Medical Center Goettingen

Summary

מאמר זה מתאר את הניצול של אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה בעכברים מהונדסים גנטית לסרטן הלבלב. המטרה העיקרית היא לספק הדרכה מפורטת של זיהוי, הערכה של הלבלב גידולים אנדוגני.

Abstract

LSL-קראס G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) העכבר מודל מייצג מודל הטרנסגניים הוקמה ומשמש לעתים קרובות כדי להעריך טיפולים בסרטן הלבלב. תחילת הגידול הוא משתנה במודל KPC בין 8 שבועות מספר חודשים. לכן, כלי הדמיה לא פולשנית נדרשים מסך עבור תחילת הגידול ולפקח על התגובה לטיפול. כדי לטפל בבעיה זו, גישות שונות הופיעו במהלך השנים האחרונות. אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יש יתרונות חשובים כגון אי-invasiveness, הפעלה מהירה פעמים רזולוציה תמונה גבוהה ללא חשיפה לקרינה. עם זאת, אולטרסאונד בעכברים אינו טריוויאלי ומספיק ידע אנטומי, מיומנויות מעשיות נדרשים לבצע בהצלחה אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה במודלים פרה סרטן הלבלב. במאמר שלהלן מוצג מדריך מעשי מפורט עבור אולטרסאונד בטן במודלים מאתר עם דגש מיוחד בדגמים סרטן הלבלב אנדוגני. יתר על כן, סיכום של טעויות נפוצות, וכיצד להימנע מהם מסופק.

Introduction

מודלים מהונדס גנטית עכבר השיגו חשיבות הולך וגדל בחקר הסרטן, בשל היכולת שלהם מקרוב לסכם את המורכבות האנושית carcinogenesis1,2,3. ביותר בשימוש תכוף מודלים ללמוד סרטן הלבלב התפתחות, התקדמות, תגובה טיפולית מאופיין של הפעלת מוטציה ב- אונקוגן קראס בשילוב של איון של הגידול p53 משתיק קול, או4. קראס-LSL הזה G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre דגם העכבר (KPC) מחקה את התקדמות צעד חכם של נגעים טרום פולשנית neoplasia intraepithelial הנרתיק הלבלב (הייתה) כדי קרצינומה פולשנית. . Phenotypically, כמעט כל העכברים לפתח PDAC בתוך ששת החודשים הראשונים לאחר הלידה. עם זאת, לעומת מודלים המושתלים, המודל KPC מגלה של תחילת גידול משתנה מאוד מ- 8 שבועות חודשים מספר4. ברגע הלבלב גידולים מגיע בגודל מסוים (5-9 מ מ קוטר), הגידול מאיץ במהירות, עכברים יהיה חייב להיות רשום ניסויים פרה5. לכן, זיהוי מדויק של תחילת גידול וגודל הגידול הוא תנאי חיוני מחקר קליני הלוגיסטי וניטור הטיפול. באופן כללי, מספר גישות אוהב תהודה מגנטית (MRI)6, טומוגרפיה סריקה7,8,9 או אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יכול להיות מועסק לערוך הקרנת הגידול, טיפול10. בכל שיטה יש את החסרונות והיתרונות שלה. למרות MRI- או טומוגרפיה ממוחשבת (CT)-הדמיה מאפשר רכישת נתונים ברזולוציה גבוהה כמו גם חישוב נפח מדויק, זמן ממושך הבדיקה תחת הרדמה כללית, וכן ציוד יקר מאוד נדרש, אינו מתיר בתדירות גבוהה סריקה על פני תקופה ארוכה של זמן. לעומת זאת, בדיקת אולטרה סאונד בעלי חיים קטנים היא שיטה ותיקה זה יכול להיות מועסק על המסך עבור פתולוגיות בטן עכברים11. היתרונות של שיטת ההדמיה הם קצרים סריקה פעמים, ברזולוציה גבוהה, ואם האפשרות להשתמש אולטרסאונד דופלר או חדות משופרת אולטרסאונד (CEUS) כדי להמחיש זלוף איברים במקביל. עם זאת, ידע אנטומי דמיון תלת-ממד, הכשרה מעשית מקיפה נדרשים לפרשנויות התמונה הנכונה.

במאמר הבא, פרוטוקול מפורט עבור ניצול אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה במודל KPC מסופק. יתר על כן, תמונות אולטרסאונד רגיל מתואר, בלוחיות איברים מבנים כדי להקל על התמצאות עם החוקר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

פרוטוקול זה הוא בהתאם להנחיות טיפול בבעלי חיים-אוניברסיטת רפואי מרכז גטינגן, גרמניה (33.9-42502-04-15/2056). בהתאם לדרישות ספציפיות לחיה הבודדת סקירה לוחות, חלק מהשלבים פרוטוקול יכול להיות שונה בהתאם.

1. בטן מישוש של KPC עכברים

  1. כדי להימנע מיותרים-אולטרסאונד סריקות, ימשש את הבטן בעכבר כדי לזהות עכברים אשר אולי יכול לשאת הנגע intraabdominal, לאחר מכן כדאי לעבור אולטרסאונד בטן.
    1. לבצע מישוש הבטן לשבוע החל מגיל במודל עכבר KPC 8 שבועות. אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה ניתן להחיל גם הגידול המושתלים מודלים (למשל, orthotopics) או דגמים אחרים העכבר מהונדסים גנטית.
      הערה: בהתאם הגידול קינטיקה והלימוד המטרה (מניעת מחקר, מחקר התערבות טיפולית), זיהוי של גידולים קטנים מאוד (1-2 מ מ) הוא ריאלי לתחילת גידול צג לפני גידולים יכולים להיות palpated.
  2. הנח את העכבר ברשת הכלוב בעדינות להרים את העכבר בזנבו, ימשש את הבטן על ידי בעדינות הולך למעלה ולמטה עם אינדקס והאגודל של היד הלא-תיקון (איור 1).
  3. אם העכבר סובלנית מישוש רך, להמשיך על-ידי לאט הגברת הלחץ. התנגדות גדולה יותר ניתן להבחין בקלות על הבטן העליונים והתחתונים. לפעמים, צואה קשה אפשר בטעות לפרש גידול בנפח גדול.

2. הכנת מרחב העבודה

  1. לספק מקום לפחות שלוש יחידות עבודה שונים: אזור הסריקה טרום, סריקה כלוב הבמה ושחזור. החומר הנדרש מתוארת באיור2.
  2. לנקות את הצלחת העבודה הראשי (לדוגמה עם 70% אתנול) ולעבור על פלטפורמת חימום לפני סריקה (איור 3). ודא כי הטמפרטורה יעד של 38-40 ° C הוא הגיע לפני העברת העכבר הראשון.
  3. . הפעילי את מכונת האולטרסאונד, צור תיקיה חדשה עבור הנתונים נרכשים (איור 4). ההגדרה B-מצב מוחל עבור הדמיה בטן. עוד יותר, ודא שמתמר הבטן מחובר הנמל הפעיל של המכונה. לתקן בראש מתמר בחלק העליון של השלב עבודה באמצעות מתמר הרכבה מערכת.
  4. להכין כלוב ההתאוששות על צלחת חימום או שטיחוני חום (או שימוש מנורת חימום) כדי להבטיח הומיאותרמיות procedural החלמה מהירה של עכברים שנסרקו. לשים שכבה דקה של רקמה כמו כרית בתחתית הכלוב הזה כדי למנוע שאיפה של מצעים עם הסיכון של חנק (איור 5).

3. שאיפת הרדמה

  1. המשך על ידי הצבת עכבר אל החדר אינדוקציה. לפתוח את השסתום לזרימה המוביל גז (1 ליטר/דקה חמצן או אוויר) ולהגדיר את הריכוז איזופלוריין 4% ומאפשר רוויה לאט גדל והולך של התא אינדוקציה. ודא כי ראוי איזופלוריין ניקוי (סינון פסיבי או אקטיבי) נמצא במקום. לאחר כ- 2-4 דקות העכבר יהיה בדרך כלל תחת הרדמה עמוקה.
    1. לשמור על הרגעה על ידי ניהול 2% איזופלוריין באמצעות קונוס האף על הבמה עבודה.
  2. להעביר בזהירות את החיה מן החדר אינדוקציה לשלב עבודה. בדוק את האף חרוט זרימת גז קבוע טובה. הכניסו את החוטם העכבר האף חרוט לשקע הקו הרדמה. מיקום קבוע לצורך הסריקה הראשונית היא עמדה פרקדן. ניתן גם להניח את העכבר על צידו הימני או השמאלי כדי לשפר את הנראות של ראש הלבלב או זנב גידולים (איור 6).
  3. למרות אולטרסאונד בטן אינו כואב כשלעצמה, לבצע הבדיקה קמצוץ רגל כמחוון תנאי ללא כאב, מצב עמוק הרדמה. אם העכבר עדיין פעיל או פעיל זז, retransfer החיה בחזרה התא אינדוקציה עבור אינדוקציה חוזרות וממושכת.
  4. השתמש משחה הגנה העין כדי למנוע פציעות הקרנית בשל אובדן נוזלים.
  5. במהלך ההרדמה, להשתמש מערכת ניטור. עם זאת, אק ג, טמפרטורה רקטלית לא בקביעות משמש עבור סריקת אולטרסאונד בטן. חשוב לציין, עכברים לאבד את היכולת thermoregulate תחת הרדמה. לכן, מתצפתים הסימנים הקליניים על היפותרמיה או מצוקה נשימתית כגון להשתנק או דום נשימה. אם כל סימפטום הוא עצור ברור איזופלוריין ומקום העכבר בכלובי ההתאוששות מיד.

4. אולטרסאונד הגדרות

  1. לעבור על מערכת סאונד כפי שתואר על ידי הוראות היצרן. ודא כי ההגדרה הראשית הפעות דימות כללי עם החבילה בטן מופעל. בדרך כלל B-מצב-הדמיה משמשת כסטנדרט והקפאה.
  2. להשיג איכות תמונה ממוטבת עם הפרמטרים הבאים: תדירות 40 מגה-הרץ, 2D-רווח של 25-30 dB, תמונת עומק 10 מ"מ, רוחב תמונה 10 מ"מ, 3 אזורי מיקוד עם מרכז בין 3-6 מ מ.

5. העכבר הכנה

  1. לתקן את הגפיים העליונים והתחתונים באמצעות סרט דביק. להיזהר כמו ככל האפשר להימנע בכל פגיעה החיה עקב קיבוע (איור 7).
  2. הסר כל פרווה בבטן באמצעות אלקטרונית קוצץ לחיות מחמד. בשל המרקם הפרווה, להתחיל בבטן התחתונה עד קשת הצלעות. . שמור על עצמך- processus xiphoideus כדי למנוע פציעות העור באזור זה.
    הערה: עכבר פרווה משקף גלי אולטרסאונד ומקטינות את הראות.
  3. השתמש קרם depilatory כדי לבצע הסרה מלאה של פרווה והכנה של העור ממוטבת. לנהל שכבה דקה של קרם על גבי הבטן מגולח באמצעות טיפים כותנה (איור 8). הסר את השמנת (לאחר 30 s או מאוחר יותר בהתאם הקרם משמש) עם רקמות יבש ואחריה שפע של מים כדי להסיר לחלוטין את כל שאריות (איור 9, 10 איור, איור 11). שאריות קרם עלול לגרום גירויים העור ורירית לאחר האולטרסאונד, ובכך עלול להשפיע על הבריאות.
  4. כדי להבטיח סריקה הולם תנאים להחיל הרבה ג'ל אולטרסאונד על הבטן (איור 12). בדרך כלל, סאונד חם ג'ל משמש כדי למזער היפותרמיה על העכבר.
  5. באופן ידני למרוח שכבה דקה של אולטרסאונד ג'ל על הראש מתמר. לבצע בדיקה על-ידי נגיעה בקצה מתמר עם החריץ. על המסך סימן בצד העליון השמאלי ניתן לראות אם המתמר ממוקם כהלכה.

6. אולטרסאונד בטן

  1. להתאים את המתמר על הבטן תוך שימוש בלחץ חזק. דחיסה כבד של הבטן העכבר עשוי להוביל לקות בדרכי הנשימה או במחזור הדם, יש להימנע.
  2. סריקה למעלה ולמטה. להתאים את המסגרת של פלטפורמת העבודה ואת הגלגלים עבור ציר ה-x וציר ה-y.
  3. בשלב הראשון לזהות שתי הכליות. בדרך כלל הם מופיעים כמבני הומוגנית hyperechogenic בבטן התחתונה. מחוברת vena renalis ניתן בקלות למצוא נוסף שמוביל הווריד הנבוב נחות (איור 13).
  4. השתמש את מגישה vena lienalis ציון דרך קיבול עבור הלבלב. ניסיון להבחין בין vena renalis vena lienalis. על הגילוי של vena lienalis הלבלב יכול להיות בדיוק לשפות אחרות. הלבלב נורמלי הוא מעדיף קרום מתפשט דרך חלל הבטן מאשר מבנה מוצק (איור 14 ו- 15 איור).

7. בלבלב זיהוי והערכה נפח

  1. לזהות נגעים הלבלב של כל המבנים שמסביב. הם בדרך כלל מופיעים כגושים רקמות עגול או מאורך inhomogeneous hypoechoic (איור 16). הגידול הוא בדרך כלל מוצק, ניתן לדחוס בקושי על ידי ראש הסריקה. הערה, מפעם לפעם שזה עלול להיות מסובך להבחין בבירור בין גידול לולאת המעי הגס קטן. שים לב הפריסטלטיקה המעי לא להתייחס בגידולים בלבלב.
  2. על מסך זיהוי הגידול למעלה או למטה כדי לקבל רושם של הגודל הכולל ולמדוד את הקוטר הגדול ביותר על-ידי שימוש של caliper אולטרסאונד. ברגע דימוי ראוי נמצא, הקפאת המסך והשתמש בכלי מדידה כדי לקבוע במדויק את גודל הגידול. שימו לב, לשימוש מאוחר יותר, שיהיה חשוב להבדיל בין אם הגידול הוא מקומי הזנב, הגוף או הראש של הלבלב.
  3. לפני שינוי חזרה לחיות במצב, הקפד לשמור תמונות כדי להקליט את העבודה. שימו לב, בעת הקפאת את התמונה שזה עלול לקרות כי הגלגל ההתאמה הוא שוחרר, החללית אולטרסאונד נלחץ עוד יותר בבטן העכבר. לכן, לתקן את ההתאמה של הדחיסה לפני שתשנה את מצב להקפיא.
  4. לאחר שסיים את המדידה של המטוס הראשון לסובב את הראש סריקה 90 ° בעמדה האורך (איור 17), או להפעיל את העכבר על הצד שלו, כדי לזהות התרחבות האורך של הגידולים. כמה גידולים עשויים לדרוש שינוי המיקום של העכבר עבור ניראות נאותה. זנב הלבלב גידולים, ניתן להניח את העכבר בצד ימין שלה (איור 10 , איור 19), גידולים בראש הלבלב על צד שמאל שלו (איור 11 , באיור 20).

8. כימות של נפח הגידול

הערה: מטרתו העיקרית הינה של כל המאמצים היא הקביעה הנכונה של נפח הגידול. אמנם קיימות מספר טכניקות שיטת החישוב כולל את הנוסחה של אליפסואיד עדיף ב גטינגן במרכז הרפואי אוניברסיטת.

  1. מצויד כל שלושה קטרים שהושג בעבר, לחשב נפח הגידול המתאימה (באיור 21).
  2. לחלופין, השתמש של המערכת המוטורית של הראש סריקה כדי לבצע בסריקה אוטומטית של אזור הגידול עם נפח לאחר מכן חישוב ו 3-ממד-שחזור.

9. שחזור

  1. לאחר סריקה, הסר בזהירות כל דבק, הסר בזהירות את כל הג'ל אולטרסאונד עם רקמות יבש.
  2. בזהירות להעביר את העכבר לתוך הכלוב השחזור ( איור 21). הימנע כל רקמות המכסה את פני mouse´s שעלול לגרום ליקוי במערכת הנשימה. עמדה בצד עבור שחזור צריך להיות המועדפת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

אולטראסאונד הדמיה היא טכניקה צדדי, לא פולשנית, המשמש לטיפול בבעיות מספר דגמים מאתר של מחלות אנושיות. לעומת כל שאר הדמיה גישות יתרונות חשובים הן יעילות תפוקה גבוהה, עלות, זמן קצר רכישה הדמיה בזמן אמת. עם זאת, כלי זה צריך מומחיות כדי להפיק תמונות באיכות גבוהה, מדויקת. במיוחד במקרה של חפצים בלתי רצויות, לפחות קצת. נסיון עם אולטראסאונד הדמיה באופן כללי זה עזר מאוד ביחס סרטן הלבלב כלי זה מאפשר לקבוע את תחילת הגידול, התקדמות, התגובה לטיפול. יתר על כן, על ידי מדידה של קטרים שונים זה מאפשר כימות מדויק של אמצעי האחסון גידול לאורך זמן. מחקר זה מדגים ומתאר בפרוטרוט כיצד להשתמש ברזולוציה גבוהה אולטראסאונד הדמיה ככלי מיון עבור סרטן הלבלב במודלים של העכבר מהונדס גנטית.

Figure 1
איור 1 : מישוש הבטן. מתקן היד בעדינות מושך את הזנב בזמן שאינו מתקן יד הפעלת נוהל על-ידי בעדינות נע מעלה ומטה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : סריקה אזור עם סקירה של כל הפריטים הדרושים. העור חיטוי (1), גזה ספוגים (2), 70% אלכוהול איזופרופיל (3), אולטרסאונד ג'ל עם זכוכית המעי (4), משחה אופטלמולוגי (5), רקמות מגבונים (6), הקלטת רפואי (7), מיכל המים (8), קוצץ לחיות מחמד (9) דפילציה קרם עם מיכל קטן (10), כותנה טיפים כדי להחיל משחה או אולטרסאונד ג'ל לאזור העיניים (11). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3 : סריקת שטח עם מכשיר אידוי איזופלוריין. שלב העבודה עם בדיקה מתכווננת מחזיק (1), אינדוקציה קאמרית (2) כולל מכשיר אידוי איזופלוריין (3). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4 : מכשיר אולטרסאונד. מערכת סאונד מסופק עם שלושה רגשים אולטרסאונד ויציאות המתאימים. מקלדת ועכבר PC כלולים במערכת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5 : בכלובי ההתאוששות. בתחתית הכלוב שהוכנו עם רקמה דקה, שחומם מראש כדי לאפשר חימום מספיק לאחר ההליך סריקה. הטמפרטורה מוצג צלזיוס (C °). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 6
איור 6 : העכבר קבוע על הבמה עבודה. העכבר ממוקם במצב פרקדן על הבמה עבודה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 7
איור 7 : העכבר מגולח לאחר שימוש קוצץ לחיות מחמד. חותכים את הפרווה בטן, אבל חלקים קטנים של שיער נמשכות באופן קבוע אשר גורמות חפצי אמנות. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 8
איור 8 : השימוש קרם depilatory. לנהל שכבה דקה של קרם depilatory על האזור המגולח של הבטן. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 9
איור 9 : הבטן מגולח לגמרי של עכבר. שפע של מים משמש כדי לשטוף כל שאריות קרם, רק הסרה מלאה של פרווה מאפשר הליך סריקה אופטימלית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 10
איור 10 : הצד הימני של העכבר. הכיוון האופטימלי לסריקה זנב הלבלב גידולים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 11
איור 11 : צד של עכבר שמאל. הכיוון האופטימלי לסריקה גידולים בראש הלבלב. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 12
איור 12 : החללית אולטרסאונד על הבטן העכבר. כדי למנוע כל פגיעה העכבר אין להשתמש לחץ רב מדי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 13
איור 13 : אולטרסאונד תמונה של החלק בטן נכון הכלי העיקרי מבנים כגון העורק הנבוב נחות ממוקמים בסמיכות לכליות ולכבד. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 14
איור 14 : תמונת אולטרסאונד החלק השמאלי בטן בין הכליות הטחול ממוקם המבנה עלי הלוואי קרומיים של הלבלב, כנקודת ציון, vena lienalis רץ דרך איבר המין (חץ צהוב) והוא יכול לשמש כמבנה המנחה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 15
איור 15 : הגבול של הלבלב- הקיבה (עם תוכן) מסמן את הגבול השמאלי של הלבלב (חץ צהוב). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 16
איור 16 : זיהוי הגידול בלבלב. המיקום פרקדן עם hypodense הופעת הגידול בלבלב עגול, החץ מציין את הגבול של הרקמה הסובבת רגיל. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 17
איור 17 : מיקום האורך. קביעת האורך של הגידול בלבלב. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 18
איור 18 : סריקה האורך של הגידול בלבלב. הפרעה הנגרמת על ידי אוויר מלא התריסריון. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 19
איור 19 : הצד הימני של העכבר: זנב הלבלב הגידול אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 20
באיור 20 : צד עכבר שמאל: גידול בראש הלבלב אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 21
איור 21 : גידול נפח כמת. לאחר רכישת כל שלושה קטרים בעמדות סריקה שני שצוין קודם לכן, מתבצע חישוב נפח. לכן, הנוסחה של אליפסואיד משמש: 4/3 π / 2 * b/2 * ג/2. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 22
איור 22 : שחזור. לאחר סריקה החיה מועבר אל צלחת חימום עד החלים לחלוטין, שים לב המשחה בעין לבן על העין של העכבר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

עם פרוטוקול זה, תיאור מפורט עבור לכימות הלבלב גידולים באמצעות דימות ברזולוציה גבוהה אולטרסאונד בטן במודלים של העכבר מהונדסים הינו מסופק. לאחרונה, Sastra. et al. לאור תיאור מפורט כיצד ניתן לכמת הלבלב גידולים העכבר דגמים, אבל אין הוראות מטמיעים אודות ההכנה וטיפול כמוצג תנאי מוקדם לקבלת צעדים נוספים היו11. המטרה הכוללת של כתב יד זה נועד לספק מדריך חזותי מקיף עבור אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה בעכברים.

למרות נתמקד לתיאור על אנדוגני הלבלב גידולים בעכברים מהונדסים גנטית, ניתן להשתמש בשיטה זו גם לדגמי השתלת orthotopic. לדגמים orthotopic, אפילו גידולים קטנים מאוד עד 1-2 מ מ ניתן להבחין abdominally לחקור את התחלתה של וקצב הגידול לקחת. כמו מישוש בטן יכול להיות סובייקטיבי, קשה לשחזר, ניתן להחיל אולטרסאונד הקרנה גם ללא מישוש מוקדמת במודל KPC כדי לזהות את תחילתה של הלבלב גידולים קטנים מאוד. יתר על כן, ייתכן בטן מבנים כגון לולאות המעי הגס קטן מלא באוויר-גבי. בהקשר זה, ייתכן שיהיה זה יעיל לשנות את המיקום של החיה על הבמה עבודה. רוב הגידולים, ניתן לאבחן במצב פרקדן; עם זאת, גידולים מסוימים ייתכן רק יזוהו כאשר העכבר מושם על צד שמאל (גידולים בראש הלבלב) או בצד ימין (זנב הלבלב גידולים) שלה. לפיכך, מיצוב נאותה של העכבר הוא קריטי כדי להגדיל את הנראות יעיל.

ראות מספיקה של אברי הבטן או השתנות האנטומי עשוי להתרחש. כדי לשפר את הראות ואת הרזולוציה של תמונות אולטרסאונד, הגדרות הבהירות והניגודיות, כמו גם את המוקד צריך להשתנות בהתאם. חפצי אמנות התמונה עשויה להיות בדיקה תקינה/לא נכון, הסרת לא שלם של עכבר פרווה, כמויות מספיקות של אולטרסאונד ג'ל או לא מספיק לחץ ליצירת קשר של המכשיר עם הבטן העכבר. יתר על כן, מעט הטיית המכשיר עשוי במידה ניכרת גם לשפר את הראות.

יתר על כן, קינטיקה גידול הגידול ניתן לנטר longitudinally על ידי אולטרסאונד חיות קטן. היתרונות העיקריים של הטכניקה כוללים עלויות נמוכות (נתון הזמינות של מכונת אולטראסאונד), אין חשיפה לקרינה, בזמן סריקה קצר ובכך קטן מאמץ עבור עכברים. במיוחד לאור מחקרים סרטן האורך, סריקה חוזרת ונשנית הוא קל לביצוע, מעמיסה קטן על החיות ללא צורך ממושך של הרגעה או הרדמה כי הוא הכרחי עבור סריקות CT או MRI בעלי חיים קטנים.

כיוון ההתקדמות הטכנית עם מערכות סאונד חזק יותר מפותחים כיום עם רזולוציה משופרת, כלי אופטימיזציה תמונה יותר ויותר אוטומטיות, חיים קטן, אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה ישמש לעיתים קרובות יותר שונות פרה דיסציפלינות בעתיד. שלבים קריטיים בתוך הפרוטוקול לכלול מיקום והכנה העכבר הנכון, כמו גם לתקן זיהוי של אברי הבטן וכלי.

ברזולוציה גבוהה, אולטראסאונד הוא כלי בעל ערך זיהוי, כימות של הלבלב גידולים מהונדסים גנטית ומודלים העכבר orthotopic. לעומת טכניקות אחרות imagining הוקמה שיטה זו מבוססת על אולטרסאונד משלב הפעלה מהירה פי עלות יעילות. מאז הרכישה הנכונה של פרשנות של תמונות אולטרסאונד דורש הכשרה מעשית מתאימה וניסיון פרוטוקול וידאו זה משמש כקו מנחה מפורט עבור כל ההיבטים במודלים של סרטן הלבלב.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

מחקר זה נתמך על ידי דויטשה Krebshilfe (מקס Eder לקבוצה AN: 110972), DGVS עבודת הדוקטורט מלגה (SMB), מלגת אחרת-Kröner-Fresenius-קרן (כדי המדור) ב גטינגן במרכז הרפואי אוניברסיטת. אנו מודים יוטה בלומברג, אולריקה Wegner לסיוע טכני מומחה. אנו מודים גם טכנאים בעלי חיים כל במתקן בעלי חיים של אוניברסיטת רפואי גטינגן מרכז עבור העכבר שמירה. כל הניסויים בוצעו לפי תקנות רווחת גרמני.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada VS-11945
Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz) FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada VS-11874
Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet) FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada SA-12055
Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply) FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada SA-11982
 electronic pet clippers Panasonic Marketing Europe, Germany 5025232484324 Panasonic ER-PA10-s
Labotect Hot plate Labor tech Göttingen, Germany 13854
eye cream (ophthalmic ointment) Schülke&Mayr, Germany 9080249
veterinary isoflurane Abbvie, Germany 4831867
depilatory cream RB healthcare UK, United Kingdom 8218535
70% ethanol (v/v) in distilled water TH. Geyer, Germany 22941000
ultrasound gel Asmuth, Germany 13477
tissue wipes Kimberly-Clark Germany, Germany 7558
cotton tips Meditrade, Germany 75481116
glass bowl for ultrasound gel ARC France, France H1149
water bowl W & P Trading Co., USA B00K2P6PLQ
gauze sponges Fuhrmann, Germany 960504

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine. EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).
  2. Olive, K. P., Politi, K. Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), Cold Spring Harbor. 131-143 (2014).
  3. Westphalen, C. B., Olive, K. P. Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer. The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).
  4. Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).
  5. Frese, K. K., et al. nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer. Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).
  6. Paredes, J. L., et al. A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI. PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).
  7. Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).
  8. Aung, W., et al. Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model. Molecular Imaging. 15, (2016).
  9. Akladios, C. Y., et al. Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats. Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).
  10. Neesse, A., et al. CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer. Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).
  11. Sastra, S. A., Olive, K. P. Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound. Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).

Tags

חקר הסרטן בעיה 134 KPC העכבר אולטרסאונד מודל ברזולוציה גבוהה אדנוקרצינומה ductal הלבלב הלבלב סרטן גידול כמת ניסוי פרה
ניצול אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה על צג תחילת גידול וצמיחה מודלים מהונדס גנטית לסרטן הלבלב
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Goetze, R. G., Buchholz, S. M.,… More

Goetze, R. G., Buchholz, S. M., Patil, S., Petzold, G., Ellenrieder, V., Hessmann, E., Neesse, A. Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models. J. Vis. Exp. (134), e56979, doi:10.3791/56979 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter