Proliferación y diferenciación de precursores mieloides murinas 32D/G-CFS-R las células

Polina Zjablovskaja; Petr Danek; Miroslava Kardosova; Meritxell Alberich-Jorda

doi:10.3791/57033

Artículo de método

Proliferación y diferenciación de precursores mieloides murinas 32D/G-CFS-R las células

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DOI:

10.3791/57033

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21 de febrero de 2018

Polina Zjablovskaja^*¹^,² , Petr Danek^*¹ , Miroslava Kardosova¹ , Meritxell Alberich-Jorda¹^,²

¹Department of Hemato-Oncology, Institute of Molecular Genetics of the ASCR, ²Childhood Leukaemia Investigation Prague, Department of Paediatric Haematology and Oncology, 2nd Faculty of Medicine, Charles University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí se presentan protocolos detallados para el cultivo de la línea de célula 32D/G-CSF-R precursor mieloide murinas, realizar infecciones virales y llevar a cabo ensayos de proliferación y diferenciación. Esta línea celular es conveniente para el estudio de desarrollo de las células mieloides y el papel de los genes de interés en el crecimiento de las células mieloides y diferenciación neutrofílica.

Resumen

Comprensión de la biología de células madre y progenitoras hematopoyética tiene implicaciones importantes para la medicina regenerativa y el tratamiento de patologías hematológicas. A pesar de los datos más relevantes que se pueden adquirir con modelos en vivo o cultivos primarios, la baja abundancia de células madre y progenitoras hematopoyéticas restringe considerablemente el conjunto de técnicas apropiadas para su investigación. Por lo tanto, el uso de líneas celulares permite suficiente producción de material biológico para la realización de pruebas o ensayos que requieren un número grande de células. Aquí presentamos una descripción detallada, lectura e interpretación de ensayos de proliferación y diferenciación que se utilizan para la investigación de los procesos implicados en la diferenciación neutrofílica y mielopoyesis. Estos experimentos emplean la línea de células mieloides murinas dependiente 32D/G-CSF-I del cytokine, que posee la capacidad de proliferar en presencia de IL-3 y diferenciar en el G-CSF. Ofrecemos protocolos optimizados para manipular células 32D/G-CSF-R y discutir los principales escollos e inconvenientes que pudieran comprometer el análisis descritos y los resultados esperados. Además, este artículo contiene protocolos de producción lentivirales y retroviral, titulación y transducción de las células 32D/G-CSF-R. Demostramos que la manipulación genética de estas células puede emplearse para realizar con éxito los estudios funcionales y moleculares, que pueden complementar los resultados obtenidos con primarias células madre y progenitoras hematopoyéticas o modelos en vivo .

Introducción

La población de madre y progenitoras hematopoyética suministra al organismo una gran variedad de células maduras, incluyendo las células del linaje mieloide (neutrófilos, eosinófilos, basófilos y monocitos). El proceso que impulsa la producción de células mieloides de las células madre hematopoyéticas se conoce como mielopoyesis y producción adecuada de células mieloides maduras en respuesta a las cambiantes demandas es un prerrequisito para el adecuado afrontamiento del organismo con el estrés condiciones, como infecciones y la pérdida de sangre. Producción insuficiente de células mieloides maduras puede provocar incapacidad para eliminar patógenos, coagulación de la....