Un en Vivo Barrera Blood - brain permeabilidad ensayo en ratones usando fluorescencia etiquetada trazadores

Kavi Devraj; Sylvaine Guérit; Jakranka Macas; Yvonne Reiss

doi:10.3791/57038

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Artículo de método

Un en Vivo Barrera Blood - brain permeabilidad ensayo en ratones usando fluorescencia etiquetada trazadores

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DOI:

10.3791/57038

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26 de febrero de 2018

Kavi Devraj¹^,² , Sylvaine Guérit¹ , Jakranka Macas¹ , Yvonne Reiss¹

¹Institute of Neurology (Edinger Institute), Goethe University Hospital, ²Pharmazentrum Frankfurt, Institute for General Pharmacology and Toxicology, Goethe University Hospital

En este artículo

Resumen

Aquí presentamos un ensayo de permeabilidad vascular de cerebro de ratón mediante inyección intraperitoneal de trazadores fluorescentes seguido de perfusión que es aplicable a los modelos animales de disfunción de la barrera blood - brain. Una hemi-cerebro se utiliza para evaluar cuantitativamente la permeabilidad y el otro para tracer visualización/immunostaining. El procedimiento toma 5-6 h por 10 ratones.

Resumen

Barrera Blood - brain (BBB) es una barrera especializada que protege el microambiente del cerebro de toxinas y agentes patógenos en la circulación y mantiene la homeostasis cerebral. Los sitios principales de la barrera son las células endoteliales de los capilares del cerebro cuya función barrera resulta de uniones intercelulares estrechas y transportadores de eflujo expresados en la membrana plasmática. Esta función está regulada por los pericitos y los astrocitos que juntos forman la unidad neurovascular (NVU). Varias enfermedades neurológicas tales como accidente cerebrovascular, enfermedad de Alzheimer (EA), tumores cerebrales se asocian con un deterioro de la función BBB. Evaluación de la permeabilidad BBB, por tanto, es crucial en la evaluación de la severidad de la enfermedad neurológica y el éxito de las estrategias de tratamiento empleadas.

Presentamos aquí un simple pero ensayo de permeabilidad robusto que se han aplicado con éxito al ratón de varios modelos tanto genética como experimental. El método es muy cuantitativa y objetiva en comparación con el análisis de fluorescencia de tracer por microscopía que comúnmente se aplica. En este método, los ratones se inyectan por vía intraperitoneal con una mezcla de marcadores fluorescentes inertes acuosos seguido de anestesiar los ratones. La perfusión cardíaca de los animales se realiza antes de la cosecha el cerebro, los riñones u otros órganos. Órganos se homogeneizó y se centrifugó seguido de medición de la fluorescencia del sobrenadante. Sangre de la punción cardiaca justo antes de la perfusión sirve para el propósito de la normalización en el compartimento vascular. La fluorescencia de tejidos se normaliza a la fluorescencia húmeda peso y suero para obtener cuantitativo índice de permeabilidad de trazador. Para la confirmación adicional, contralateral hemi-cerebro preservado por inmunohistoquímica puede ser utilizado para fines de visualización de la fluorescencia tracer.

Introducción

La barrera blood - brain (BBB) consiste en las células endoteliales microvasculares (ECs) apoyadas por pericitos estrechamente (PC), que son rodeadas en la lámina basal, y astrocitos (ACs) que envuelven la membrana del sótano con sus final-pies¹ ^,². ECs interactúan con varios tipos de células que apoyan y regulan la función de barrera, principalmente ACs y PC, y también las neuronas y microglia, que juntos forman la unidad neurovascular (NVU). El NVU es crítico para la función de la BBB, que limita el transporte de toxinas transmitidas por la sangre y patógenos entren en el cerebro. Esta función es el resulta....