El enfoque del marcador trófica ácidos grasos, es decir, la asimilación de ácidos grasos como toda molécula y transferencia en tejido consumidor leves o no modificación, se ve obstaculizada por las brechas de conocimiento en el metabolismo de ácidos grasos de invertebrados de suelo pequeño. Isotopologue perfilado se presenta como una valiosa herramienta para desentrañar las interacciones tróficas.
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Artículo de método
Perfiles de ácidos grasos 13C Isotopologue proporciona una idea de la transferencia trófica de carbono y metabolismo de los lípidos de los consumidores invertebrados
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Resumen
Resumen
Los ácidos grasos (FAs) son biomarcadores útiles en ecología trófica porque normalmente son asimiladas como una molécula completa y transferidos en tejido de consumo con menor o ninguna modificación, lo que permite la dieta encaminamiento entre los diferentes niveles tróficos. Sin embargo, el enfoque de marcador trófica FA todavía está obstaculizado por el conocimiento limitado en el metabolismo lipídico de la fauna del suelo. Este estudio utilizó totalmente con ácido palmítico (C16: 013, 99% del átomo) como trazador en vías de metabolismo de ácidos grasos de dos suelos generalizada Collembola, Protaphorura fimata y Heteromurus nitidus. Para investigar la suerte y la modificación metabólica de este precursor, se presenta un método de generación de perfiles isotopologue, realizado por spectrometry total de ion solo bajo control. Por otra parte, se describe el laboratorio aguas arriba experimento de alimentación, así como la extracción y metilación de fracciones dominantes lípidos (lípidos neutros, fosfolípidos) y los relacionados con fórmula y el cálculo. Isotopologue perfilado no sólo rendimiento el enriquecimiento de 13C total de ácidos grasos derivado de 13C etiquetado precursor pero también produce el patrón de isótopos superior a la masa del ion del padre (es decir, el ion molecular de la FA M+) de cada etiqueta FA por una o más unidades de masa (M+ 1M+ 2M+ 3, etc.). Este conocimiento permite conclusiones sobre la relación de la encaminamiento de la dieta de un FA enteramente consumida en comparación con la biosíntesis de novo . El isotopologue perfilado se sugiere como una herramienta útil para la evaluación del metabolismo de ácidos grasos en animales del suelo desenredar las interacciones tróficas.
Introducción
En un hábitat críptico como suelo, relaciones tróficas son difíciles de dirección y otros están restringidas por el tamaño pequeño de la fauna. La última década ha visto avances en ecología bioquímica, particularmente en el uso de ácidos grasos como biomarcadores para definir las estrategias de alimentación de la fauna del suelo bajo condiciones de campo1,2,3. Esto es basado en el hecho de que ácidos grasos de recursos puede ser incorporados en el tejido del consumidor como moléculas de todas, un proceso denominado enrutamiento dieta4. Transferencia de....
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Protocolo
El protocolo descrito no cae bajo la competencia de la ética Animal. Sin embargo, cuando gente adapta los protocolos descritos en animales superiores, tenga cuidado de que el Comité institucional de ética Animal aprobado el protocolo para el manejo de animales.
1. cultivo de animales
Nota: Todo explicado pasos experimentales se basan en protocolos bien establecidos26,27,28. Biotests en el laboratorio necesita un suministro continuo de los organismos fácilmente cultivables. Aquí, se han utilizado las especies de Collembola<....
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Resultados
Contenido lípidos y peso fresco de Collembola
En el curso del experimento descrito, el contenido en NLFAs y PLFAs no cambió significativamente con el tiempo, mientras que el peso fresco de las muestras aumentó ligeramente pero no de forma significativa24. Ambos parámetros indican un buen nivel de condición física de los especímenes de Collembola. Tenga en cuenta investigar de Collembola fresco peso y lípidos el contenido durante todo el experime.......
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Discusión
Isotopologue perfiles
Un análisis detallado de los aspectos cuantitativos en la distribución de 13C en FAs necesita tecnología de punta para asignar carbono repartir en redes tróficas. El presente trabajo empleado isotopologue perfilado para evaluar 13C /12C relaciones en común biomarcadores de FA para las interacciones trópico. Este método es establecido para el análisis de aminoácidos por cromatografía líquida (LC-MS) y se aplicó para las inv.......
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Agradecimientos
Se agradece el apoyo financiero de la R. Menzel y L. Ruess por la Deutsche Forschungsgemeinschaft (RU RU780/11-1). R. Nehring fue financiado por RU 780/10-1. Finalmente, estamos muy agradecidos al Dr. Hazel Ruvimbo Maboreke para corregir el manuscrito.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| neoLab-Frascos redondos | neoLab | 2-1506 | 69 x 40 mm, 10 pacs/paquete |
| Carbón activado | Carl Roth | X865.1 | p.a., polvo, CAS Nº 7440-44-0 |
| Alabastro Dental | RÖ HRICH-GIPSE | http://www.roehrich-gipse.de/dentalgipse.php | |
| Cloroformo | Carl Roth | 7331.1 | HPLC ≥ 99,9 % |
| Metanol | Carl Roth | P717.1 | HPLC ≥ 99,9 % |
| Hexan | Carl Roth | 7339.1 | HPLC ≥ 98 % |
| tert-Éter metílico butílico (MTBE) | Carl Roth | T175.1 | HPLC ≥ 99,5 % |
| Acetón | Carl Roth | 7328.2 | HPLC ≥ 99,9 % |
| NaOH | Carl Roth | 6771.1 | p.a. ≥ 99 %, en pellets |
| di-Natriumhidrogenfosfato | Carl Roth | P030.1 | p.a. ≥ 99 %, libre |
| de agua Na-dihidrogenofosfato Dihydrat | Carl Roth | T879.1 | p.a. ≥ 99 % |
| Ácido hipoclorídrico (6 N) | VWR International | 26.115.000 | AVS TITRINORM vol. |
| solución Bond Elut (Columnas) | Agilent Tech. | 14102037 | HF Bond Elut-SI, 500 mg, 3 mL, 50/PK |
| Prä Paratenglä ser Duran | Glasgerä tebau Ochs | 135215 | Ø 16 x 100 mm, más tapón de rosca con práctico moleteado y junta integrada de PTFE/silicona |
| Supelco 37 Component FAME Mix | Sigma-Aldrich | 47885-U Supelco | 10 mg/mL en cloruro de metileno, estándar analítico |
| FlowMesh | Carl Roth | 2796.1 | Malla de polipropileno, de aproximadamente 0,3 mm de espesor, con espaciado de hebras de 1 mm |
| Mezcla de éster metílico de ácido bacteriano (BAME) | Sigma-Aldrich | 47080-U Supelco | 10 mg/mL en caproato de metilo, patrón analítico |
| Nonadecanoato de metilo | Sigma-Aldrich | 74208 | patrón analítico ≥ 98.0 % |
| Ácido hexadecanoico-1-13C (palmítico) | Larodan Fine Chemicals | 78-1600 | GC ≥ 98.0 % (13C: 99.0 %) |
| RVC 2-25 CDplus | Martin Christ Gefrier-trocknungsanlagen | Concentrador | |
| midi compacto de sobremesaAlpha 2-4 LDplus | Martin Christ Gefrier-trocknungsanlagen | Colector de secado | |
| MZ 2C | NT Vacuubrand GMBH | Bomba de vacío | |
| Roto-Shake Genie | Scientific Industries | Dispositivo combinado de balanceo y rotación | |
| XP64 Micro Comparador | Mettler Toledo | Balanza de súper alta precisión | |
| GC-System 7890A | Agilent Tech. | Cromatógrafo de gases | |
| 7000 GC/MS Triple Quad | Agilent Tech. | Espectrómetro de masas Triple Quad | |
| Serie 7683B Inyector | Agilent Tech. | Inyector de muestras | |
| Heraeus Multifuge 3SR+ | Thermo Scientific | Centrífuga con rotor de tubo de 10 ml |
Referencias
- Ruess, L., et al. Application of lipid analysis to understand trophic interactions in soil. Ecology. 86 (8), 2075-2082 (2005).
- Ruess, L., et al. Lipid composition of Collembola and their food resources in deciduous forest stands - Implications for feeding strategies. Soil Biology and Biochemistry. 39 (8), 1990-2000 (1990).
- Chamberlain, P. M., Bull, I. D., Black, H. I. J., Ineson, P., Evershed, R. P.
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