Se introduce un método para el trasplante omental de islotes en un ratón. Los islotes aislados se mezclan con hidrogel y la mezcla se coloca en la bolsa omental de un ratón diabético. Luego, se controla la glucosa en la sangre, y se realiza el análisis inmuno-histoquímico.
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Artículo de método
Un método para el trasplante de islotes pancreáticos para el epiplón en ratón
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En este artículo
Resumen
Resumen
Trasplante de islotes pancreáticos se ha propuesto ser un potencial tratamiento para la diabetes tipo 1. Reciente evidencia convincente indica que infusión intravascular del islote está lejos de ser ideal y por lo tanto, el epiplón es reapareciendo como un sitio potencialmente valioso para el trasplante de islotes pancreáticos. Este experimento requiere el aislamiento de islotes de alta calidad y la implantación de los islotes a los destinatarios diabéticos. Trasplante para el epiplón requiere pasos quirúrgicos que pueden demostrarse mejor visualmente. Aquí, se presentan los pasos detallados para este procedimiento. Aquí se describen dos métodos de mezcla de los islotes aislados con hidrogel antes de colocar la mezcla en la bolsa omental de ratones diabéticos. Diferentes hidrogeles se utilizan para las diferentes condiciones. Niveles de glucosa en sangre de los receptores de ratón diabético de syngeneic islotes en el epiplón fueron monitoreados durante 35 días. Algunos animales fueron sacrificados después de 14 días para realizar el análisis inmuno-histoquímico. Este enfoque preclínicos de trasplante puede utilizarse como datos preliminares previos a la traducción a un trasplante clínico.
Introducción
Según la Federación Internacional de Diabetes (FID), mellitus de la diabetes afecta actualmente a 382 millones de personas, con un aumento proyectado a 592 millones personas en 20351. En ambos trasplante allogeneic y xenogeneicos islote, terapia inmunosupresora sistémica es necesaria. Sin inmunosupresión, rechazo inmune es una causa importante de pérdida de injerto2. También es un problema importante de pérdida de islotes trasplantados debido a la sangre inmediata mediada por reacción inflamatoria (IBMIR)3,4. Sin embargo, incluso en la ausencia de una respuesta i....
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Protocolo
Todos los ratones utilizados en este estudio se obtuvieron en el Animal Medical Center de Guangdong Provincia. El uso de los animales fue aprobado por Hospital de la ética informe Comité de Shenzhen segunda personas, conforme a los principios del bienestar animal.
1. islote trasplante para el epiplón
Nota: Este protocolo requiere 2 personas para llevar a cabo.
- Ensamble de materiales quirúrgicos que se enumeran en la tabla 1. Preparar campo aséptico en área con material estéril, tales como cortinas y materiales desechables y mantener condiciones de asepsia en cirugía. Esterilizar todos l....
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Resultados
Post-Digestive estado del páncreas se muestra en la figura 1A. Purificada islotes se muestran en la figura 1B. Tinción de ditizona y pruebas de viabilidad de los islotes se muestran en la figura 2. Los pasos principales del trasplante de islotes pancreáticos en el epiplón se muestran en la figura 3. Los niveles de glucosa de la sangre de los recipientes después del trasp.......
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Discusión
El trasplante de islote al hígado vía la vena porta es el más de uso general método de trasplante de islotes pancreáticos en humanos, pero todavía hay preocupaciones de eficacia y seguridad como vena porta trombosis y hígado esteatosis17. Estudios recientes muestran que el epiplón puede ser una alternativa adecuada para el hígado, pero necesita más investigación para llevarse a cabo antes de la traducción clínica12,14,
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Divulgaciones
Los autores no divulgan conflictos de interés.
Agradecimientos
Algunos de los autores de este trabajo fueron apoyadas en parte por subvenciones de nacional clave de R & D programa de China (2017YFC1103704), proyecto de Sanming de medicina en Shenzhen (SZSM201412020), Fondo para el alto nivel médico disciplina construcción de Shenzhen (2016031638), Shenzhen Fundación de ciencia y tecnología (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), Fundación de Shenzhen de la Comisión de salud y planificación familiar (SZXJ2017021).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Equipo | |||
| 5 pulgadas (12-13 cm) Tijeras | RWD Ciencias de la Vida | S12030-11 | |
| Pinzas finas | RWD Life Science | F11010-13 | |
| Pinzas para heridas pequeñas | RWD Life Science | R33003-01 | |
| Acutenaculum | RWD Life Science | F31044-13 | |
| Pinzas de tejido de 2 pares | RWD Life Science | F13023-10 | |
| 4-0 Sutura con aguja | Chenghe, China | 17094 | |
| 200 μ L Pipeta y puntas | Gilson | PN11 | |
| One Touch ultraeasy Sistema básico de control de glucosa en sangre | Johnson & Hoja | ||
| Philips | HC1099/15 | ||
| Material y animales | |||
| Pentobarbital Sodio | Sigmaaldrich.com | P3761 | Para anestesia |
| Hidrogel | bdbiosciences.com | 356234 | Matriz de membrana basal |
| Hidrogel de fibrina-trombina | Baxter.com | 1501250 | Los componentes se coagulan cuando se mezclan |
| con un 70% de etanol | Yingniu medical, Anhui, China | 23170608 | |
| Iodophor | Lierkang medical technology, Shangdong, China | 170521 | |
| solución salina normal | Baxter.com | 2B1324 | |
| Cefalosporina | Lukang medical, Shangdong, China | 150303 | |
| Cefazolina | Baxter.com | 2G3508 | |
| ungüento lubricante para los ojos Major | Pharmaceuticals | 203964 | |
| estreptozotocina | Sigmaaldrich.com | S0130 | |
| colagenasa tipo V | Sigmaaldrich.com | C9262 | |
| CMRL-1066 media | celltrans, Wenzhou, China | X018D1 | |
| histopaque | Sigmaaldrich.com | 10771 | gradiente de densidad |
| Tubería PE50 | Braintreesci.com | PE50 100 FT | Polietileno .023" x .038 |
| Calceína AM | Sigmaaldrich.com | C1359 | |
| Yoduro de propidio | Sigmaaldrich.com | P4864 | |
| compuesto de temperatura de corte óptima (OCT) | Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL | 4583 | de inclusión de |
| anticuerpos de insulina | Tecnología de señalización celular, Danvers, MA 01923 | 8138S | |
| medios de tinción de hematoxilina | Tecnología de señalización celular, Danvers, MA 01923 | 14166S | |
| eosina | Beyotime Biotech, China | C0109 | |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific Inc. | D1306 | |
| C57Bl/6 Ratones | Centro Médico de Animales de la Provincia de Guangdong | / | |
| Suero Fetal Bovino | GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| Matraces T175 | Falcon | 353112 | |
| 1,5 mL Tubos con tapa a presión | Axygen | MCT-150-C |
Referencias
- Guariguata, L., et al. Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035. Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).
- Bellin, M. D., et al.
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Reimpresiones y permisos
