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Artículo de método

Trombosis venosa profunda inducida por estasis en los ratones controlados por sonografía de alta frecuencia

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DOI:

10.3791/57392

13 de abril de 2018

En este artículo

Resumen

El presente Protocolo describe los pasos para obtener mediante un modelo de estancamiento de la trombosis venosa. Además, estamos utilizando un método no invasivo para medir la formación de trombos y resolución con el tiempo.

Resumen

La trombosis venosa es una condición común que afecta a 1-2% de la población, con una incidencia anual de 1 en 500. La trombosis venosa puede conducir a la muerte por embolia pulmonar o resultados en el síndrome post-trombótico, caracterizada por la ulceración, inflamación y dolor crónico de la pierna, o en la hipertensión pulmonar crónica dando por resultado significativa crónica respiratoria compromiso. Esto es la enfermedad cardiovascular más común después de infarto de miocardio y accidente cerebrovascular isquémico y es un desafío clínico para todas las disciplinas médicas, como puede complicar el curso de otros trastornos como cáncer, enfermedad sistémica, cirugía y trauma mayor.

Modelos experimentales son necesarios para el estudio de estos mecanismos. El modelo de estasis induce tamaño del trombo consistente y una cantidad cuantificable de trombo. Sin embargo, es necesario ligar sistemáticamente ramas laterales de la vena cava inferior para evitar la variabilidad en el tamaño del trombo y cualquier interpretación de datos erróneos. Hemos desarrollado una técnica no invasiva para medir el tamaño del trombo utilizando ecografía. Usando esta técnica, podemos evaluar desarrollo de trombos y resolución con el tiempo en el mismo animal. Este enfoque limita el número de ratones que se requiere para la cuantificación de la trombosis venosa consistente con el principio de sustitución, reducción y refinamiento de los animales en la investigación. Hemos demostrado que peso del trombo y el análisis histológico de trombo tamaño correlativo con la medida obtienen con la ecografía. Por lo tanto, el estudio actual describe cómo inducir trombosis venosa profunda en ratones utilizando el modelo de estasis de la vena cava inferior y seguimiento con ultrasonido de alta frecuencia.

Introducción

Tromboembolismo venoso (TEV), que se compone de trombosis venosa profunda (TVP) y embolia pulmonar, es la tercera causa de muerte cardiovascular después de infarto de miocardio y accidente cerebrovascular. Es una condición común que afecta a 1-2% de la población, con una incidencia anual de1de 1 en 500. VTE puede conducir a: 1) la muerte por embolia pulmonar; 2) postrombótico síndrome, caracterizado por dolor crónico, inflamación y ulceración; o 3) hipertensión pulmonar crónica dando por resultado significativo compromiso respiratorio crónico. TEV es una enfermedad multifactorial y puede resultar de estasis sanguíneo, daño a las paredes del vas....

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Protocolo

Todos los procedimientos fueron aprobados por el institucional Animal cuidado Comité de McGill University Montreal, QC, Canadá. Todo el equipo requerido se muestra en tabla I.

1. murino (C57BL/6J) IVC estasis protocolo

  1. Preparación de la cirugía
    Nota: Esta es una cirugía de supervivencia y por lo tanto, la técnica aséptica apropiada debe seguirse en todo momento. Esto incluye asegurándose de que todos los materiales están a mano, limpieza y esterilización instrumentos antes y entre uso y designar una zona estéril en la superficie de trabajo para todo el material estéril.
    1. Esterilizar todos los instrumento....

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Resultados

Modelo de la trombosis venosa por estasis

En el modelo de estasis, ratones están anestesiados, y se hace una incisión para exponer la vena cava inferior (IVC). La incisión se realiza en el lado izquierdo o derecho del ratón en lugar de una laparotomía media de manera que no interfiera con la sonda de ultrasonido. Los músculos abdominales y la piel son doblez hacia atrás para exponer la vena cava inferior (

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Discusión

Hay varios pasos fundamentales para la formación del trombo venoso exitosa utilizando el modelo de estasis. Inducción de trombosis de la vena es más difícil en los ratones viejos debido a la acumulación de grasa alrededor de la vena cava inferior y la aorta. Idealmente, los ratones sometidos a este procedimiento deben ser 8 - 10 semanas de edad. Debe tenerse gran cuidado no para inducir daño endotelial en la vena cava inferior durante la disección Roma y ligadura. Además, es crucial para mantener el animal en una incubad.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo fue financiado por una donación del corazón y accidente cerebrovascular Fundación de Canadá y por la Morris y Bella Fainman Family Foundation. Los autores desean agradecer a Michaud Veronique por su ayuda técnica con el sistema de proyección de imagen de ultrasonido de VEVO770.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
6-0 sutura de seda a mano permanenteEthicon706G
Tijeras quirúrgicasFine Science Tools20830-00
pinza de atado de suturaFine Science Tools20830-00
pinzas romas (rectas y curvas)Fine Science Tools20830-00
destornillador de agujasFine Science Tools13002-10
Tijeras de resorte MoriaFine Science Tools15396-00
Jeringas de 1 mlAgujas BD Biosciences
26GBecton Dickinson & Co.
VEVO 770 Sistema de Imagen de Alta ResoluciónVisualsonicsYa no se vende
SR BuprenorfinaZooPharmDada a LDI por
Microscopio de Cirugía VeterinariaLeica LeicaM651
Systan ungüento oftálmicoAlcon288/28062-0
2x2 Gasa estérilCDMV#104148
Punta de algodón Aplicadoresde JGH
Transpore cinta quirúrgica hipoalergénicaCDMV#7411
Gel de ultrasonido (Aquasonic-100)Dufort & Lavigne#AKEN4061
Incubadorade JGH
Isofluranodespomada
, mangueras y equipo de administraciónDepilador despomed
Nair
Almohadilla dura calentada con aguaBraintree Scientific, Inc.#HHP-2
Bomba de agua para calentador Gaymar TP500MATVET Inc.#R-500305
Lámpara calefactora infrarrojaelectrimat inc.#1R175R-PAR
Ratón de temperatura rectal propeemkaTECHNOLOGIES
Aguade JGH
Cámara de anestesia estéril

Referencias

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes b....

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

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