El presente Protocolo describe los pasos para obtener mediante un modelo de estancamiento de la trombosis venosa. Además, estamos utilizando un método no invasivo para medir la formación de trombos y resolución con el tiempo.
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Artículo de método
El presente Protocolo describe los pasos para obtener mediante un modelo de estancamiento de la trombosis venosa. Además, estamos utilizando un método no invasivo para medir la formación de trombos y resolución con el tiempo.
La trombosis venosa es una condición común que afecta a 1-2% de la población, con una incidencia anual de 1 en 500. La trombosis venosa puede conducir a la muerte por embolia pulmonar o resultados en el síndrome post-trombótico, caracterizada por la ulceración, inflamación y dolor crónico de la pierna, o en la hipertensión pulmonar crónica dando por resultado significativa crónica respiratoria compromiso. Esto es la enfermedad cardiovascular más común después de infarto de miocardio y accidente cerebrovascular isquémico y es un desafío clínico para todas las disciplinas médicas, como puede complicar el curso de otros trastornos como cáncer, enfermedad sistémica, cirugía y trauma mayor.
Modelos experimentales son necesarios para el estudio de estos mecanismos. El modelo de estasis induce tamaño del trombo consistente y una cantidad cuantificable de trombo. Sin embargo, es necesario ligar sistemáticamente ramas laterales de la vena cava inferior para evitar la variabilidad en el tamaño del trombo y cualquier interpretación de datos erróneos. Hemos desarrollado una técnica no invasiva para medir el tamaño del trombo utilizando ecografía. Usando esta técnica, podemos evaluar desarrollo de trombos y resolución con el tiempo en el mismo animal. Este enfoque limita el número de ratones que se requiere para la cuantificación de la trombosis venosa consistente con el principio de sustitución, reducción y refinamiento de los animales en la investigación. Hemos demostrado que peso del trombo y el análisis histológico de trombo tamaño correlativo con la medida obtienen con la ecografía. Por lo tanto, el estudio actual describe cómo inducir trombosis venosa profunda en ratones utilizando el modelo de estasis de la vena cava inferior y seguimiento con ultrasonido de alta frecuencia.
Tromboembolismo venoso (TEV), que se compone de trombosis venosa profunda (TVP) y embolia pulmonar, es la tercera causa de muerte cardiovascular después de infarto de miocardio y accidente cerebrovascular. Es una condición común que afecta a 1-2% de la población, con una incidencia anual de1de 1 en 500. VTE puede conducir a: 1) la muerte por embolia pulmonar; 2) postrombótico síndrome, caracterizado por dolor crónico, inflamación y ulceración; o 3) hipertensión pulmonar crónica dando por resultado significativo compromiso respiratorio crónico. TEV es una enfermedad multifactorial y puede resultar de estasis sanguíneo, daño a las paredes del vas....
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Todos los procedimientos fueron aprobados por el institucional Animal cuidado Comité de McGill University Montreal, QC, Canadá. Todo el equipo requerido se muestra en tabla I.
1. murino (C57BL/6J) IVC estasis protocolo
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Modelo de la trombosis venosa por estasis
En el modelo de estasis, ratones están anestesiados, y se hace una incisión para exponer la vena cava inferior (IVC). La incisión se realiza en el lado izquierdo o derecho del ratón en lugar de una laparotomía media de manera que no interfiera con la sonda de ultrasonido. Los músculos abdominales y la piel son doblez hacia atrás para exponer la vena cava inferior (
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Hay varios pasos fundamentales para la formación del trombo venoso exitosa utilizando el modelo de estasis. Inducción de trombosis de la vena es más difícil en los ratones viejos debido a la acumulación de grasa alrededor de la vena cava inferior y la aorta. Idealmente, los ratones sometidos a este procedimiento deben ser 8 - 10 semanas de edad. Debe tenerse gran cuidado no para inducir daño endotelial en la vena cava inferior durante la disección Roma y ligadura. Además, es crucial para mantener el animal en una incubad.......
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Los autores no tienen nada que revelar.
Este trabajo fue financiado por una donación del corazón y accidente cerebrovascular Fundación de Canadá y por la Morris y Bella Fainman Family Foundation. Los autores desean agradecer a Michaud Veronique por su ayuda técnica con el sistema de proyección de imagen de ultrasonido de VEVO770.
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 6-0 sutura de seda a mano permanente | Ethicon | 706G | |
| Tijeras quirúrgicas | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| pinza de atado de sutura | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| pinzas romas (rectas y curvas) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| destornillador de agujas | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Tijeras de resorte Moria | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| Jeringas de 1 ml | Agujas BD Biosciences | ||
| 26G | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 Sistema de Imagen de Alta Resolución | Visualsonics | Ya no se vende | |
| SR Buprenorfina | ZooPharm | Dada a LDI por | |
| Microscopio de Cirugía Veterinaria | Leica Leica | M651 | |
| Systan ungüento oftálmico | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2x2 Gasa estéril | CDMV | #104148 | |
| Punta de algodón Aplicadores | de JGH | ||
| Transpore cinta quirúrgica hipoalergénica | CDMV | #7411 | |
| Gel de ultrasonido (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubadora | de JGH | ||
| Isoflurano | despomada | ||
| , mangueras y equipo de administración | Depilador despomed | ||
| Nair | |||
| Almohadilla dura calentada con agua | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Bomba de agua para calentador Gaymar TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Lámpara calefactora infrarroja | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Ratón de temperatura rectal prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Agua | de JGH |
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