Immunophenotyping de Orthotopic la homoplastia (Syngeneic) de Adenocarcinoma Ductal pancreática KPC primaria murinas por citometría de flujo

Xiaoyu An; Xuesong Ouyang; Hui Zhang; Tingting Li; Yu-yang Huang; Zhiyuan Li; Demin Zhou; Qi-Xang Li

doi:10.3791/57460

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Artículo de método

Immunophenotyping de Orthotopic la homoplastia (Syngeneic) de Adenocarcinoma Ductal pancreática KPC primaria murinas por citometría de flujo

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DOI:

10.3791/57460

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9 de octubre de 2018

Xiaoyu An^*¹^,² , Xuesong Ouyang^*¹ , Hui Zhang¹ , Tingting Li¹ , Yu-yang Huang¹ , Zhiyuan Li¹ , Demin Zhou² , Qi-Xang Li¹^,²

¹Crown Bioscience Inc., ²State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, Peking University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El procedimiento experimental en el immunophenotyping de homoinjertos PDAC Murino ortotópico pretende perfilar el inmuno-microambiente tumoral. Los tumores son orthotopically implantado mediante cirugía. Tumores de 200 – 600 mm³ en tamaño fueron cosechados y disociados para preparar suspensiones de unicelular, seguidos del análisis de marcador múltiple inmunológico FACS utilizando diferentes anticuerpos marcados con fluorescencia.

Resumen

Tumores (syngeneic) homoplastia son el caballo de batalla de investigación preclínica de la inmuno-Oncología (entrada-salida) de hoy. El microambiente del tumor (TME), particularmente sus inmune-componentes, es de vital importancia para el pronóstico y la predicción de los resultados del tratamiento, especialmente los de inmunoterapia. TME inmune-componentes están compuestos de diferentes subconjuntos de células inmunes tumor-infiltración evaluables por FACS de varios colores. Adenocarcinoma ductal pancreática (PDAC) es entre el malignances mortales falta de opciones de buen trato, así una necesidad médica urgente y no satisfecha. Una razón importante para su no respuesta a diversos tratamientos (quimio-, apunta, I/O) ha sido su abundante TME, formado por fibroblastos y leucocitos que protegen las células del tumor de estas terapias. Orthotopically PDAC implantada parece más precisa recuperar la TME de los cánceres pancreáticos humanos que los modelos convencionales de (SC) subcutáneos.

Tumores de la homoplastia (KPC) son transplantes de ratón espontáneo PDAC origina KPC-ratones transgénicos (Kras^{G12D / +}/ /Pdx1-53^{- / -}PCre) (KPC-GEMM). El tejido del tumor primario se corta en fragmentos pequeños (~ 2 mm³) y trasplantado por vía subcutánea (SC) a los destinatarios syngeneic (C57BL/6, 7 – 9 semanas de edad). Los homoinjertos fueron entonces quirúrgico orthotopically trasplantado en el páncreas de ratones C57BL/6 nueva junto con la implantación de SC, que volúmenes tumor de 300 – 1.000 mm³ por 17 días. Sólo tumores de 400 – 600 mm³ fueron cosechados por el procedimiento de autopsia aprobado y limpiarse para eliminar los tejidos no tumorales adyacentes. Se disocia según el protocolo utilizando un Disociador de tejido en suspensión unicelular, seguida de tinción con paneles designados de anticuerpos marcados con fluorescencia para diversos marcadores de células inmunes diferentes (linfoide, mieloide y NK, DCs). Las muestras teñidas se analizaron varios colores FACS para determinar el número de células inmunes de diferentes linajes, así como su porcentaje relativo dentro de los tumores. Los perfiles inmunes de los tumores ortotópicos entonces fueron comparados con los de tumores de SC. Los datos preliminares demostraron significativamente elevadas infiltración TILs/TAMs en tumores en el páncreas y mayor infiltración de células B en orthotopic en lugar de tumores SC.

Introducción

Adenocarcinoma ductal pancreática (PDAC) provoca casi la mitad un millón mortalidades por todo el mundo anualmente, uno de los asesinos de cáncer top 5. Hay pocas opciones de tratamiento eficaz y no inmunoterapias aprobadas; por lo tanto, se necesitan desesperadamente nuevos tratamientos. Tipos de cáncer están siendo reconocidos cada vez más como enfermedades inmunológicas, incluyendo la PDAC, además de las enfermedades genéticas como hoy. Factores inmunológicos y genéticos probablemente determinaría pronóstico de la enfermedad así como el tratamiento de los resultados. Los tumores evaden la vigilancia inmune del anfitrión y eventualmente avanzan para causar la muerte....