Artículo de método

Un modelo de asa Intestinal ligados en pollos libre anestesiados patógenos específicos para el estudio de virulencia de Clostridium Perfringens

DOI:

10.3791/57523

⸱

11 de octubre de 2018

 ,  ,  , 
1Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Université de Montréal, 2University of Bristol

En este artículo

Resumen

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Aquí presentamos un protocolo quirúrgico crear «loops ligados intestinales» en intestino de pollo. Este procedimiento permite la comparación de virulencia en situ en un único host de varias cepas de Clostridium perfringens . Este método disminuye marcadamente el número de pollos generalmente necesarios para experimentos similares en vivo .

Resumen

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Enteritis necrótica fue estudiada en pollos utilizando varios en vivo modelos de infección. La mayoría de éstos utiliza una combinación de factores predisponentes, tales como coccidiosis y dieta, con sonda nasogástrica o administración a través de la alimentación usando Clostridium perfringens. En estos modelos, la comparación de múltiples cepas de C. perfringens para estudios de virulencia requiere un gran número de hosts para obtener resultados significativos. Durante el curso del estudio de la mortalidad puede ser alta dependiendo del modelo experimental, por lo tanto, levantando preocupaciones éticas sobre el bienestar de los animales en la investigación. El desarrollo de nuevos modelos de infección que requieran menos animales para estudiar la patogenesia, pero proporciona resultados válidos y estadísticamente significativos, es importante en la reducción del uso de animales en investigación. Modelos de asa intestinal ligados se han utilizado para estudiar las infecciones clostridiales en diversas especies como ratones, conejos y terneros. Después de procedimientos quirúrgicos para crear segmentos ligados lazo, cepas de C. perfringens se inyectan directamente en los lazos para establecer un contacto cercano entre las bacterias y la mucosa intestinal. Se toman muestras de intestino delgado y contenido luminal en la terminación de los procedimientos después de unas horas. Múltiples cepas bacterianas pueden ser inoculadas en cada animal, por lo tanto reduciendo el número de sujetos necesarios en los experimentos. También, los procedimientos se realizan bajo anestesia general para reducir el dolor animal. En los pollos, este modelo sería más adecuado que la administración oral para comparar la patogenicidad de C. perfringens cepa porque se necesitan menos animales, factores predisponentes no deben inducir a la enfermedad y dolor se controla con analgésicos . El modelo de asa intestinal ligados está pobremente descrito en pollos y estandarización es esencial para su uso óptimo. Este manuscrito ofrece todos los pasos necesarios para crear numerosos bucles ligados intestinales en pollos y aporta información sobre los puntos críticos para obtener resultados válidos.

Introducción

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El uso de modelos animales para estudiar enfermedades infecciosas que afectan a los seres humanos y animales es una herramienta central en la evaluación de factores de virulencia, regulación de la patogenia de una enfermedad específica, así como a elaborar estrategias para prevenir o curar enfermedades1. A pesar de numerosas ventajas de la utilización de modelos animales para estudiar diversas enfermedades, han surgido preocupaciones éticas con respecto a esta práctica. Los investigadores deben minimizar el uso de animales y obtención de resultados significativos y válidos. El concepto de los 3 principios de Rs (reemplazar, reducir y refinar) f....

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Protocolo

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Todos los procedimientos con el uso de animales vivo fueron autorizados por el Comité de ética de la Facultad de medicina veterinaria de la Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de Deutsch des Animaux').

1. consideraciones antes de la cirugía

  1. Seleccionar pollos de Livorno (SPF) libres de 10 semanas de edad de patógenos específicos para la cirugía.
    Nota: Su peso debe estar entre 1.0 y 1.2 kg.
  2. Retirar la alimentación 12 horas antes de los procedimientos para vaciar el tracto intestinal.
  3. Antes de la cirugía, poner los pollos bajo anestesia general, siguiendo un protocolo verificado por un anestesiólo....

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Resultados

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Figura 1muestra un esquema de las asas intestinales 9 y 8 interloops. En este modelo, se crean un total de 9 circuitos y 8 interloops con ligaduras simples. Un bucle consiste en ligaduras proximales y distales, separadas por 2 cm de la ligadura proximal. Dos bucles adyacentes están separados por un interloop de 1 cm. Para disminuir el posible riesgo de contaminación cruzada entre bucles por la fuga de una ligadura, una ligadura interloop se coloca a medio cam.......

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Discusión

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Modelos de asas intestinales se han descrito en numerosas especies para estudiar la interacción huésped-patógeno y patogenia de las enfermedades causadas por varios patógenos intestinales, como Clostridium perfringens, Clostridium difficile y Enterica de las salmonelas7,9,13,14,15. También se ha utilizado para analizar la respuesta i.......

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Divulgaciones

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Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

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Este trabajo fue financiado por la Cátedra de investigación de aves de corral (M. Boulianne) de la Facultad de medicina veterinaria de la Université de Montréal. Padres y los doctores Boulianne desarrollaron el modelo. Drs. Boulianne y padres realizaron las cirugías. El Dr. Burns ayudó a desarrollar el protocolo de anestesia. Dr. Parent había editado el video y escribió el manuscrito. DRS de Burns, Desrochers y Boulianne editan el manuscrito.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
EZ-Scrub 747Becton Dickinson and Company% gluconato de clorhexidina detergente impregnado de detergente. No hay número de catálogo disponible. Dirección web: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes 
Alcohol isopropílico 70% USP 4 LAlcohol isopropílico comercialP016IP70Dirección web: http://www.comalc.com/products/
SoluciónSigma-Aldrich282227-1G, debe diluirse al 4%. Dirección web: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr®ion=CA&gclid=EAIaIQ
obChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2Z
WQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE
Cortina quirúrgica pequeña (27 pulgadas x 24 pulgadas) con 3 x 6 pulgadas FenestraciónProductos Especializados Veterinarios32724Dirección web: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.
detail&productgroup_id=15
Hojas de bisturí #3Swann-Morton301Dirección web: https://www.swann-morton.com/product/16.php
Solución salina estéril NaCl 0.9%Sigma-AldrichS8776-100MLDirección web: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr®ion=CA
Vicryl 3-0EthiconD9003Material de sutura absorbible multifilamento de poliglactina. Dirección web: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture
Jeringa de 1 ml con aguja de 26GBecton Dickinson and Company329652Dirección web: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes
Brain Heart InfusionSigma-Aldrich1104930500Dirección web: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr®ion=CA&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1
tubo EppendorfSigma-AldrichT9661-500EATubo de microcentrífuga. Dirección web: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr®ion=CA&gclid=EAIaIQ
obChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh
30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE
Solución de formol, neutro tamponado, 10%Sigma-AldrichHT501128-4LRelación tejido: formol de 1:10 para una fijación adecuada. Dirección web: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr®ion=CA
Clostridium perfringens cepasUniversité de Montré al, Chaire en recherche avicoleN/AEspecífico para cada laboratorio, disponible previa solicitud al autor correspondiente
4 de gluconato de clorhexidina

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. The use of animal models in disease research. Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).
  2. Uzal, F. A., et al. Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens in....

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