Análisis de Micro-CT cuantitativa de Aortopathy en un modelo murino de disección y aneurisma de la aorta inducida por β-oxidasa

Summary

Este artículo describe una metodología detallada del uso de un caucho de silicón radiopaco con base de plomo para inundar la vasculatura murina para la cuantificación del diámetro aórtico en un modelo murino de aneurisma aórtico y disección.

Abstract

Disección y aneurisma de aorta se asocia con una morbilidad significativa y mortalidad en la población y puede ser altamente letales. Si bien existen modelos animales de enfermedad aórtica, en vivo las imágenes de la vasculatura ha sido limitada. En los últimos años, micro-automatizado tomografía (micro-CT) se ha convertido en una modalidad preferida para grandes y pequeños vasos de la proyección de imagen en vivo y ex vivo. Junto con un método de riego vascular, hemos utilizado con éxito micro-CT para caracterizar la frecuencia y la distribución de la patología aórtica en ratones C57/Bl6 tratados con β-oxidasa. Limitaciones técnicas de este método incluyen variaciones en la calidad de la perfusión por mala preparación de animales, la aplicación de metodologías adecuadas para la cuantificación del tamaño de buque y la no supervivencia de este procedimiento. Este artículo detalla una metodología para la perfusión intravascular de un caucho de silicón radiopaco con base de plomo para la caracterización cuantitativa de aortopathy en un modelo murino de aneurisma y disección. Además de visualizar patología aórtica, este método puede utilizarse para examinar otras camas vasculares en vivo o vascular camas quitar post mortem.

Introduction

La incidencia de la disección aórtica es de 3 casos por 100.000 por año¹. Disección aórtica y aneurisma enfermedades representan más de 10.000 muertes en los Estados Unidos cada año, 1-2% de todas las muertes en los países occidentales². La disección aórtica se inicia por un desgarro en la capa íntima del vaso con la propagación de la sangre a través de las capas de la pared aórtica en presiones fisiológicas. Presión de pulso elevada de pacientes está asociados con una mayor incidencia de disección y complicaciones. Esfuerzo cortante de pared creciente se asocia con la expansión de la pared aórtica a un aneurysm formació....

Protocol

Los protocolos para el manejo de animales fueron aprobados por el cuidado institucional de Animal y uso de la Universidad de Maryland, Baltimore (número de protocolo animal 0116024) y realizados según los estándares de AAALAC International.

1. preparación de reactivos

1. Heparina
   1. Diluya 250 μl de 1000 sulfato de heparina U/mL en 50 mL de fosfato tampón salino para una concentración final de 5 U/mL.
   2. Caliente la heparinizada (5 U/mL) fosfato tampón salino, que sustituirá a la sangre en la vasculatura en un baño de agua a 37 ° C.
   3. Preparar la bomba mediante la conexión de la tubería neces....

Results

Para evaluar este protocolo, 20 ratones adultos machos, del fondo mixto como se describió anteriormente¹⁹ y de 20-30 semanas de edad, con o sin tratamiento BAPN, fueron perfundidos con un caucho de silicón radiopaco con base de plomo (véase el tabla de materiales ) utilizando el protocolo detallado arriba. Experimentaron la exploración micro-CT en el día siguiente (figura 1 y figu.......

Discussion

Micro-CT en la proyección de imagen puede utilizarse para proporcionar reconstrucciones altamente detalladas y tridimensionales de la patología vascular en modelos animales. Mediante el uso de medios de contraste intravasculares, no mejora los tejidos blandos, como el lumen de un vaso sanguíneo, se pueden distinguir de aquellos que están mejorando. Láser Doppler, microangiography, angiografía por resonancia magnética, histología con microscopia confocal y dos fotones puede utilizarse para evaluar vasculares camas, suelen.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microfil	Flow Tech, Inc	MV-122	Utilizamos amarillo, se puede pedir un color diferente según se desee. El kit incluye compuesto MV, diluyente MV y agente de curado MV.
Heparina (1000 U/mL)	Sagent Pharmaceuticals	25021-400-10
Solución salina tamponada con fosfato	Corning	21-031-CV
Isoflurano	Vet One, MWI	502017
3-Sal de fumarato de aminopropionitrilo	Sigma-Aldrich	A3134
Bomba de jeringa única	Fisher Scientific	14-831-200
calibre 27 aguja para juego de venas del cuero cabelludo	Exel Int	26709	tubo de 27G x 3/4", 12"
Escáner Inveon Micro-CT	Siemens Medical Solutions
Osirix MD	Pimxmeo SARL		Versión 8.0.2
Inveon Research Workplace	Siemens Medical Solutions		Versión 4.2
Roedor Chow	Harlan Teklad	2018sx