Se demuestra un protocolo para aumentar carbohidratos señales de iones en espectrometría de masas MALDI por reformar estructuras cristalinas durante los procesos de preparación de muestra.
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Artículo de método
Un método de preparación de muestra eficiente para aumentar carbohidratos señales de iones en espectrometría de masas de desorción/ionización láser asistida por matriz
En este artículo
Resumen
Resumen
Preparación de la muestra es un proceso crítico en el análisis de espectrometría de masas (MS) de hidratos de carbono. Aunque la desorción/ionización del laser asistida por matriz (MALDI) MS es el método de elección en el análisis de hidratos de carbono, reproducibilidad de datos y señal pobre ion de muestras de hidratos de carbono siguen siendo problemas graves. Para el análisis cuantitativo de hidratos de carbono, es necesario un protocolo analítico eficaz proporcionando datos de superior calidad. Este video muestra los protocolos de preparación de muestra para mejorar la intensidad de la señal y minimizar la variación de datos de los carbohidratos en MALDI-MS. Después de secado y cristalización de las gotas de la muestra, la morfología cristalina es reformada por el metanol antes de análisis de espectrometría de masa. La mejora en la señal de hidratos de carbono se examina con MALDI imaging espectrometría de masas (IMS). Resultados experimentales demuestran que la reforma de cristal ajusta estructuras cristalinas y redistribuye analitos de hidratos de carbono. En comparación con el método de preparación de gotas secas en MALDI-MS convencionales, reforma morfologías de cristal de hidratos de carbono con metanol muestra intensidad de señal significativamente mejor, ion imagen distribución y estabilidad de los datos. Puesto que los protocolos demostrados en este documento no implican cambios en la composición de la muestra, que son generalmente aplicables a diversos hidratos de carbono y matrices.
Introducción
Análisis de hidratos de carbono es un tema importante y desafiante. Hidratos de carbono y sus derivados desempeñan papeles importantes en vivir organismos1,2,3. Estas moléculas han complicado las estructuras y son propensas a descomponerse. Muchos de ellos no pueden ser claramente caracterizados debido a las dificultades en la separación y detección. Aunque láser asistida por matriz (MALDI) de desorción/ionización espectrometría de masas (MS) se ha aplicado al análisis de una amplia variedad de biomoléculas, debido a su sensibilidad y resultados comprensibles
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Protocolo
1. preacondicionamiento de la placa de la muestra
-
Limpieza de la placa de la muestra
- Guantes de nitrilo para evitar la contaminación de la placa de la muestra durante la limpieza.
- Lave la placa de la muestra con 100,0 mL de una solución de detergente (1.0 mg/mL).
- Lave la placa de la muestra con agua destilada-desionizada (DDW).
- Enjuague la superficie de la placa de muestra con 30,0 mL de MeOH.
- Poner la placa de la muestra en un vaso de precipitados de 600 mL y llenar con DDW hasta la placa de la muestra se sumerge totalmente en agua.
- Poner el vaso en un ultrasonido baño (véase....
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Resultados
Imágenes representativas de la SEM de SLeA mezclan con DHB con DD y métodos de la recristalización se muestran en la figura 1. Una morfología típica de DHB, preparado por el método DD es grandes cristales en forma de aguja en el borde y fina estructura cristalina en el centro de puntos de muestra. Las longitudes típicas de tales cristales en forma de aguja son ~ 100 μm. Después de la recristalización por MeOH, la muestra tiene un área más grande cu.......
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Discusión
Heterogeneidad de la muestra es que un problema crucial en MALDI-Sra. DD es el más comúnmente utilizado método de preparación de la muestra, pero los cristales resultantes son altamente heterogéneos. Dichas muestras demostración reproductibilidad pobre señal de tiro a tiro y muestra a muestra. Por lo tanto, buscar "puntos" en áreas de la muestra durante la adquisición de datos es un procedimiento común en los experimentos MALDI. Dichas muestras heterogéneas no son adecuadas para la cuantificación en análisis de rutina.
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores no tienen ninguna agradecimientos.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| polvo | Alconox | 242985 | |
| Metanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrilo | Merck | 100003 | |
| ácido 2,5-dihidroxibenzoico (DHB) | Alfa Aesar | A11459 | |
| sialyl-lewis A (SLeA) | Sigma-Aldrich | S1782 | |
| Maltoheptaose | Sigma-Aldrich | M7753 | |
| Puntas de pipeta | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Tubo de microcentrífuga | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q sistema de purificación de agua | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Guantes de nitrilo sin polvo | Microflex | SU-690 | |
| Vaso de precipitados de 600 mL | Duran | 2110648 | |
| Limpiador ultrasónico | Delta | DC300H | |
| Higrómetro | Wisewind | 5330 | |
| Caudalímetro de gas nitrógeno | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| Termopares tipo K | Digitron | 311-1670 | |
| Mezclador de vórtice | Scientific Industries | SI-0236 | |
| Mini centrífuga | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipeta | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Microscopio estereoscópico | Olympus | SZX16 | |
| Cámara de secado de temperatura controlable | Este | ||
| Ultraflex II TOF/TOF espectrómetro de masas | Bruker Daltonics | ||
| MTP 384 placa de objetivo de acero pulido BC | Bruker Daltonics | 8280781 | |
| Flexcontrol Versión 3.4 | Bruker Daltonics | Software de control | |
| Fleximaging Versión 2.1 | Bruker Daltonics | Software de imagen | |
| Flexanalysis Versión 3.4 | Bruker Daltonics | Software de análisis |
Referencias
- Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
- Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).
- Caroff, M., Karibian, D.
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Reimpresiones y permisos
