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Artículo de método

Generación de un modelo Murino ortotópico de cáncer de mama metastásico y la realización de mastectomía Radical murino

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DOI:

10.3791/57849

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29 de noviembre de 2018

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En este artículo

Resumen

Presentamos un modelo de cáncer de mama Murino ortotópico y mastectomía radical modelo con tecnología de bioluminiscencia para cuantificar la carga del tumor para imitar la progresión del cáncer de mama humano.

Resumen

Modelos de ratón in vivo para evaluar la progresión del cáncer de mama son esenciales para la investigación del cáncer, incluyendo el desarrollo preclínico de fármacos. Sin embargo, la mayoría de los detalles técnicos y prácticos comúnmente se omite en los manuscritos publicados que, por lo tanto, hace que sea difícil de reproducir los modelos, particularmente cuando se trata de técnicas quirúrgicas. Tecnología de bioluminiscencia permite la evaluación de pequeñas cantidades de células cancerosas incluso cuando un tumor no palpable. Utilizando las células de cáncer expresan luciferasa, establecemos una técnica de inoculación de mama cáncer ortotópico con una tasa alta de tumorigénesis. Metástasis del pulmón se evalúa utilizando una técnica ex vivo . Nosotros, entonces, establecer un modelo de mastectomía con una tasa baja de recurrencia local para evaluar la carga de tumor metastático. Adjunto, describimos, detalladamente, las técnicas quirúrgicas de implantación ortotópica y mastectomía para cáncer de mama con una tasa alta de tumorigenesis y tasas de baja recurrencia local, respectivamente, para mejorar la eficiencia de modelo de cáncer de mama.

Introducción

Modelos animales juegan un papel clave en la investigación del cáncer. Cuando una hipótesis se prueba in vitro, debe ser probado in vivo para evaluar su relevancia clínica. Metástasis y progresión del cáncer son a menudo mejor capturados por los modelos animales en comparación con modelos in vitro, y es esencial para probar un nuevo fármaco en un modelo animal como un estudio preclínico de drogas desarrollo1,2. Sin embargo, los detalles técnicos de los experimentos con animales a menudo no son bien descritos en los artículos publicados, lo que es difícil reproducir el modelo con éxito. De hecho, los autores qu....

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Protocolo

Se obtuvo aprobación del Comité de uso y Roswell Park Cancer Center institucional Animal atención integral para todos los experimentos.

Nota: Se obtienen nueve a ratones BALB/c hembras de doce semanas de edad. Se utilizan células luc2 4T1, un ratón adenocarcinoma mamario línea celular derivada de ratones BALB/c que ha sido diseñado para luciferase expresa. Estas células se cultivan en medio de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 con 10% suero bovino fetal (FBS).

1. preparación de instrumentos

  1. Descongelar una mezcla de proteína gelatinosa congelada (por ejemplo, Matrigel) en el h....

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Resultados

El propósito del modelo ortotópico es imitar la progresión del cáncer humano (es decir, el crecimiento del tumor primario, seguido por metástasis de ganglios linfáticos y metástasis del pulmón entonces distante)15. Después de la inoculación de células de cáncer, la bioluminiscencia se cuantifica regularmente (dos o tres veces / semana) (figura 1A). La bioluminiscencia en los pulmones es más profundo y más pequeño que la lesión.......

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Discusión

En la última década, hemos venido estableciendo varios modelos murinos de cáncer, incluyendo mama cáncer modelos3,7,13,16,20,21. Previamente, hemos demostrado que mama cáncer células orthotopic la inoculación en el tejido de la glándula mamaria bajo visión directa produce un tumor más grande con menos variabilidad de tamaño e.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por subvenciones de NIH grant R01CA160688 y Susan G. Komen Foundation investigador inició investigación (IIR12222224) a los ratones K.T. se adquirieron imágenes de bioluminiscencia por recurso compartido de recurso compartido imágenes traslacional en el Roswell Park Centro integral del cáncer, que fue apoyado por el cáncer centro apoyo Grant (P30CA01656) y subvención compartida de la instrumentación (S10OD016450).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Micro tijeras de disecciónRobozRS-5983Para inoculación de células cancerosas y mastectomía
Pinza AdsonRobozRS-5233Para inoculación de células cancerosas y mastectomía
PortaagujasRobozRS-7830Para inoculación de células cancerosas y mastectomía
MayoRobozRS-6873Para
suturasde seda ex vivo 5-0Look774BPara la inoculación de células cancerosas y la mastectomía
Esterilizante seco (Germinator 500)Braintree ScientificGER 5287-120VPara la inoculación de células cancerosas y la mastectomía
ClipperWahl9908-717Para la inoculación de células cancerosas y la mastectomía
MatrigelCorning354234Para la inoculación de células cancerosas
D-Luciferina, salde potasioGOLD-BioLUCK-1KPara la cuantificación de la bioluminiscencia
Roswell Park Memorial Insitute 1640Gibco11875093Para cultivo celular
Fetal Bovino SerubGibco10437028Para cultivo celular
Tripsina-EDTA (0.25%)Gibco25200056Para cultivo celular

Referencias

  1. Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
  2. Schuh, J. C. Trials, tribulations, and trends in tumor model....

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Reimpresiones y permisos

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