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Artículo de método

In Vitro Cría de las abejas solitarias: una herramienta para evaluar factores de riesgo larvas

8K visualizaciones

DOI:

10.3791/57876

16 de julio de 2018

 ,  ,  , 

Autores correspondientes: Prarthana S. Dharampal <pghosh6@wisc.edu>

En este artículo

Resumen

Pulverizaciones de fungicidas en plantas con flores pueden exponer a las abejas solitarias a altas concentraciones de residuos de fungicida transmitidas por el polen. Mediante experimentos en laboratorio en vitro-larvas de abeja criados, este estudio investiga los efectos interactivos de consumir polen tratados con fungicida derivado de plantas huésped y anfitrión no.

Resumen

Aunque las abejas solitarias servicios de polinización crucial para cultivos silvestres y manejados, este grupo de especies ha sido en gran parte pasado por alto en estudios de reglamentación de pesticidas. El riesgo de exposición a los residuos del fungicida es probable que sea especialmente alto si el aerosol se produce en o cerca de plantas huésped mientras que las abejas recolectan polen para sus nidos. Para especies de nomada que consumen polen de un selecto grupo de plantas (oligolecty), la incapacidad de utilizar el polen de plantas no hospederas puede aumentar su factor de riesgo para toxicidad relacionada con el fungicida. Este manuscrito describe protocolos utilizados para criar con éxito a oligolectic mason abejas, Osmia ribifloris sensu lato, de huevo a la etapa prepupal en placas de la célula bajo condiciones estandarizadas de laboratorio. El en vitro-abejas criadas se utilizan posteriormente para investigar los efectos de la exposición y polen fuente de fungicida en fitness de la abeja. Basado en un diseño factorial 2 × 2 totalmente cruzado, el experimento examina los efectos principales e interactivos de fungicida exposición y polen fuente en larvas fitness, cuantificado por biomasa prepupal, el tiempo de desarrollo larval y la supervivencia. Una gran ventaja de esta técnica es que en vitro-criadas abejas reduce la variabilidad natural de fondo y permite la manipulación simultánea de varios parámetros experimentales. El protocolo descrito presenta una herramienta versátil para las hipótesis de prueba que implica el conjunto de factores que afectan la salud de las abejas. Para que esfuerzos de conservación para cumplir con éxito significativo, duradero, tales ideas sobre la compleja interacción de factores fisiológicos y ambientales abeja disminución de conducción será crítica.

Introducción

Dado su papel como el grupo dominante de insectos polinizadores1, la pérdida global de las poblaciones de abejas amenaza la seguridad alimentaria y el ecosistema estabilidad2,3,4,5,6 ,7. La tendencia descendente en ambas poblaciones de abejas manejadas y silvestres se han atribuido a varios factores de riesgo compartidos, incluyendo la fragmentación del hábitat, emergentes de parásitos y patógenos, pérdida de diversidad genética y la introducción d....

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Protocolo

1. Preparar soluciones de Propiconazol fungicida exposición experimentos

  1. Preparar 0.1 x solución fungicida disolviendo volúmenes apropiados de comercialmente comprados propiconazole 14.3% en agua estéril el día del experimento. Asegúrese de que la única solución fungicida recién preparado se utiliza para todos los tratamientos.
  2. Añadir 23 μl de 0,1 x solución de fungicida por gramo de provisión de polen para obtener la concentración máxima de propiconazole previamente divulgado del polen de abeja-recogido24 (0,361 PPM o μg del principio activo g-1 de polen).

2. cosecha de huevos y pr....

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Resultados

Fitness larval se cuantificó usando tres tiempo de desarrollo (i) larvas de métricas (ii) prepupal biomasa y supervivencia (iii) por ciento. Se llevó a cabo un ANOVA de dos vías con exposición de fungicida (dos niveles: ningún fungicida, fungicida) y fuente de polen (dos niveles: Host polen, polen no-host) como variables independientes y tiempo de desarrollo larval como variable dependiente. El principal efecto para la exposición de fungicida (F1,28 = 1,24, P .......

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Discusión

Cría de abejas fuera de sus naturales desove Cañas, bajo condiciones de laboratorio, permite la prueba de hipótesis múltiples sobre larvas fitness. En la medida en que factores no identificados continúan causan mortalidad de las abejas, estudios de evaluación de riesgos en vitro experimentos pueden ayudar a identificar posibles amenazas e informar las prácticas de manejo para este grupo de especies de polinizadores silvestres 12 ,38,

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores agradecen Kimball Clark y Tim Krogh para proporcionar Cañas anidación Osmia , Meredith Nesbitt y Molly Bidwell para asistencia en el laboratorio, los doctores Cameron Currie, Christelle Guédot, Terry Griswold, Michael Branstetter y tres revisores anónimos sus útiles observaciones que mejoraron el manuscrito. Este trabajo fue apoyado por fondos de USDA-Agricultural Research Service apropiado (actual investigación sistema de información #3655-21220-001), Departamento de agricultura de Wisconsin, el comercio y la protección de los consumidores (#197199), National Science Foundation (bajo Grant no. DEB-1442148), el DOE grandes lagos bioenergía Researc....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
huevos de O. ribifloris sensu lato (s.l.)Kaysville, Davis County, Utah, USA
Cañas OsmiaNativebees.comNACañas recién tapadas
Set de disecciónVWR89259-964Esterilizar antes de usar
Alicates de punta largaHusky1006
6 placas de cultivo de pocillosVWR10062-892Sellado estéril
Placas de cultivo de 48 pocillosVWR10062-898 Placas deselladas estériles
VWR25373100sellados estériles
VWR10770-448
Cepillo de pelo de camelloBioquip1153A
EA ConsumiblesD1021Esterilizar antes de usar
sacarosaVWR470302-808
Propiconazol 14.3Quali-Ppro60207-90-1Propiconazol 14.3%
Polen de abeja melífera897098001244 Abeja energizadaPolen crudo, natural y sin tratar
MicrobalanceVWR10204-990
PulverisetteLAB SYNERGY INC.
Palos de maderaVWR470146908Esterilizar antes de usar
Cinta de selladoVWR89097-912
MicroscopioVWR89403-384
Bandeja de plantaciónVWR470150-632
EtanolVWRBDH1158-4LP
Tubo de centrífugaVWR 21008936
MicrojeringaCole-PalmerUX-07940-07
Pinza de gomaAmazonB0135HWPN4
Agujas de jeringaVWR89219-334
LiofilizadorLabconoLFZ-1L
Software estadísticoSPSSVersión 21.0
Petri Botes de pesaje cuadrados Cápsulas de hojalata 30334913

Referencias

  1. Klein, A. -M., et al. Importance of pollinators in changing landscapes for world crops. P Roy Soc Lond B Bio. 274 (1608), 303-313 (2007).
  2. Biesmeijer, J. C. J., et al. Parallel declines in pollinators and insect-pollinated plants in Britain ....

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Osmia ribiflorisfuente de polenexposición a fungicidasaptitud larvalbiomasa prepupaltiempo de desarrolloplacas de cultivo celularmicrobioma del polen