Azul de toluidina tinción de secciones embebido en resina para la evaluación de la morfología del nervio periférico

Adel B. Ghnenis; Richard E. Czaikowski; Zhaojie J. Zhang; Jared S. Bushman

doi:10.3791/58031

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Artículo de método

Azul de toluidina tinción de secciones embebido en resina para la evaluación de la morfología del nervio periférico

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DOI:

10.3791/58031

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3 de julio de 2018

Adel B. Ghnenis¹ , Richard E. Czaikowski¹ , Zhaojie J. Zhang² , Jared S. Bushman¹

¹School of Pharmacy, University of Wyoming, ²Department of Zoology and Physiology, University of Wyoming

En este artículo

Resumen

Aquí presentamos un protocolo para visualizar estructuras finas de los nervios periféricos de obtención y tinción de secciones de 1-2 μm con toluidina azul

Resumen

Los nervios periféricos se extienden por todo el cuerpo, inervan los tejidos diana con axones motores o sensoriales. Debido a la amplia distribución, los nervios periféricos con frecuencia se dañan debido a trauma o enfermedad. Métodos y estrategias se han desarrollado para evaluar lesiones de nervios periféricos en modelos animales, la función y regeneración, análisis de la morfometría de los nervios periféricos se ha convertido en una medida esencial resultado terminal. La coloración del nervio Cruz azul de la toluidina secciones de secciones de resina incrustada del nervio es un método reproducible para la evaluación cualitativa y cuantitativa de los nervios periféricos, lo que permite la visualización del número de axones de morfología y grado de myelination. Esta técnica, como con muchos otros métodos histológicos, puede ser difícil de aprender y dominar mediante protocolos estándar escritos. La intención de esta publicación es por lo tanto acentúan protocolos escritos para la coloración de los nervios periféricos con videografía del método, con los nervios ciático de ratas azul de toluidina. En este protocolo se describe en vivo fijación del nervio periférico y colección del tejido y la fijación con tetróxido de osmio 2%, incrustación de nervios en la resina de epoxy y ultramicrótomo secciones de nervios a 1-2 μm de espesor. Secciones del nervio luego transfirieron a un portaobjetos de vidrio y teñidas con azul de toluidina, después de lo cual ellos son cuantitativa y cualitativamente evaluados. Se muestran ejemplos de los problemas más comunes, así como medidas para mitigar estos problemas.

Introducción

Los nervios periféricos se extienden por todo el cuerpo, inervan los tejidos diana con axones motores o sensoriales¹. Defectos de los nervios periféricos causaron por trastornos y traumas representan un problema de salud pública importante y tiene grandes repercusiones económicas²^,³. A pesar de los avances en la evaluación de los resultados de las lesiones de nervio periférico y la comprensión de la regeneración del nervio, los métodos tradicionales tales como nervio histología y técnicas de tinción son herramientas esenciales evaluar cualitativa y cuantitativamente la salud del nervio ....