In Vitro Diferenciación del Factor del Granulocyte-macrófago-estimulante de colonias (GM-CSF) de ratón-producción de linfocitos de T (THGM)

Yi Lu; Xin-Yuan Fu; Yongliang Zhang

doi:10.3791/58087

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Artículo de método

In Vitro Diferenciación del Factor del Granulocyte-macrófago-estimulante de colonias (GM-CSF) de ratón-producción de linfocitos de T (T_HGM)

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DOI:

10.3791/58087

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10 de septiembre de 2018

Yi Lu¹^,²^,³ , Xin-Yuan Fu³ , Yongliang Zhang¹^,²

¹Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ²Immunology Programme, Life Sciences Institute, National University of Singapore, ³Cancer Science Institute of Singapore, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

En este artículo

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para distinguir murino granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing T (T_HGM) linfocitos de células T CD4 + de ingenuo, incluyendo el aislamiento de las células CD4 + T de ingenuo, diferenciación de T_HGM, y Análisis de las células T_HGM diferenciadas. Este método puede ser aplicado a los estudios de la regulación y función de las células T_HGM.

Resumen

El factor del granulocyte-macrófago-estimulante de colonias (GM-CSF)-producción de la célula de T helper (T_HGM) es un subconjunto de células helper T nuevamente identificado que predominantemente segrega GM-CSF sin producir interferón (IFN) γ o interleukin (IL) -17 y se encuentra a juega un papel esencial en la neuroinflamación autoinmune. Un método de aislamiento de ingenuo de células T CD4 + de una suspensión unicelular de esplenocitos y generación de células T_HGM de las células T CD4 + de ingenuo sería una técnica útil en el estudio de la inmunidad mediada por células T y enfermedades autoinmunes. Aquí describimos un método que distingue las de células T CD4 + ingenuo de ratón en células T_HGM promovidas por IL-7. El resultado de la diferenciación fue evaluado mediante el análisis de la expresión de citoquinas utilizando diferentes técnicas, entre ellas citoquinas intracelulares tinción combinada con citometría de flujo, una reacción en cadena en tiempo real cuantitativa de la polimerasa (PCR), y análisis enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). Utilizando el protocolo de diferenciación de T_HGM tal como se describe aquí, alrededor del 55% de las células expresan GM-CSF con una mínima expresión de IFNα o IL-17. La expresión predominante de GM-CSF de las células T_HGM más fue confirmada por el análisis de la expresión del GM-CSF, IFNα y IL-17 en los niveles de mRNA y proteína. Así, este método puede utilizarse para diferenciar ingenuo de células T CD4 + t cells GM_H en vitro, que serán útiles en el estudio de la biología de la célula de T_HGM.

Introducción

De células T CD4 + helper (T_H) son componentes esenciales del sistema inmune, teniendo papeles cruciales en la defensa del huésped frente a patógenos microbianos, en la vigilancia del cáncer y autoinmunidad¹^,²^,³. Sobre la activación de células T del receptor (TCR), ingenuo de células T CD4 + se pueden distinguir en T_H1, T_H2, T_H , reglamentarios o de 17 células de T (Treg) bajo la influencia de citocinas diferentes ambientes²^,⁴^, ⁵. recientem....