Aislamiento, caracterización y MicroRNA basado en la modificación genética de las células madre del folículo Dental humano

Paula Müller; Katharina Ekat; Anne Brosemann; Anne Köntges; Robert David; Hermann Lang

doi:10.3791/58089

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Artículo de método

Aislamiento, caracterización y MicroRNA basado en la modificación genética de las células madre del folículo Dental humano

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DOI:

10.3791/58089

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16 de noviembre de 2018

Paula Müller^*¹^,² , Katharina Ekat^*³ , Anne Brosemann³ , Anne Köntges³ , Robert David¹^,² , Hermann Lang³

¹Reference and Translation Center for Cardiac Stem Cell Therapy (RTC), Department of Cardiac Surgery, Rostock University Medical Center, ²Department Life, Light and Matter of the Interdisciplinary Faculty at Rostock University, ³Department of Operative Dentistry and Periodontology, Rostock University Medical Center

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe la ingeniería genética transitoria de células dentales extraídas del folículo dental humano. La estrategia de modificación no aplicada puede llegar a ser una base para la mejora de los productos terapéuticos de células madre.

Resumen

Hasta la fecha, varios tipos de células madre en diferentes etapas de desarrollo están en el foco para el tratamiento de enfermedades degenerativas. Sin embargo, ciertos aspectos, como la muerte celular masiva inicial y bajos efectos terapéuticos, problemas de su traducción clínica amplia. Ingeniería genética de células antes del trasplante surgió como un método prometedor para optimizar los efectos terapéuticos de células madre. Sin embargo, todavía carecen de sistemas de entrega de genes seguros y eficientes. Por lo tanto, el desarrollo de métodos adecuados puede proporcionar un enfoque para resolver los retos actuales en terapias basadas en células madre.

El presente Protocolo describe la extracción y caracterización de células madre de folículo dental humana (hDFSCs) así como su modificación genética no-virales. El folículo dental postnatal dio a conocer como una fuente prometedora y de fácil acceso para la recolección de las células madre adultas multipotentes que poseen potencial de proliferación alta. El procedimiento de aislamiento descrito presenta un método simple y confiable para cosechar hDFSCs de cordales. Este protocolo incluye también métodos para definir las características de células madre de células aisladas. Para la ingeniería genética de hDFSCs, una estrategia optimizada transfección catiónico base de lípidos se presenta introducción de microARN altamente eficiente que permite sin producir efectos citotóxicos. MicroRNAs son candidatos adecuados para la manipulación de celda transitoria, como estos pequeños reguladores traslacionales controlan el destino y el comportamiento de células madre sin el peligro de la integración del genoma estable. Así, este protocolo representa un procedimiento seguro y eficaz para la ingeniería de hDFSCs que puede llegar a ser importante para la optimización de su eficacia terapéutica.

Introducción

El folículo dental humano es un flojo Tejido fino conectivo de derivados de ectomesenchymally que rodea el diente en desarrollo¹^,². Al lado de su función de coordinar la osteoclastogénesis y osteogénesis para el proceso de erupción del diente, este tejido presenta células madre y progenitoras especialmente para el desarrollo del periodonto³^,⁴^,⁵. Por lo tanto, el folículo dental se considera como una fuente alternativa para cosechar las células madre adultas humanas⁶^,