Describimos el uso de trasplante de células madre hematopoyéticas (HSCT) para evaluar el potencial maligno de las células hematopoyéticas genéticamente. TCMH es útil para evaluar varias células hematopoyéticas malignas en vivo así como generar una cohorte grande de ratones con síndromes mielodisplásicos (MDS) o leucemia para evaluar nuevas terapias.
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Artículo de método
Uso de trasplante de células madre hematopoyéticas para evaluar el origen del síndrome mielodisplásico
En este artículo
Resumen
Resumen
Síndromes mielodisplásicos (SMD) son un grupo diverso de trastornos de células madre hematopoyéticas que son definidos por hematopoyesis ineficaz, cytopenias de la sangre periférica, displasia y una propensión para la transformación a leucemia aguda. Ratones transgénicos NUP98-HOXD13 (NHD13) recapitulan MDS humana en términos de cytopenias de la sangre periférica, displasia y transformación a leucemia aguda. Previamente demostramos que MDS se podía transferir de un ratón genéticamente modificado con MDS a los receptores de tipo salvaje mediante el trasplante de células nucleada de la médula MDS (BMNC). Más claramente entender la célula MDS de origen, hemos desarrollado métodos específicos de trasplante, immunophenotypically definido subconjuntos hematopoyéticos. En este artículo, describimos el proceso de aislar y transplante de poblaciones específicas de vástago de hematopoietic y células progenitoras. Después del trasplante, se describen métodos para evaluar la eficacia del trasplante y la persistencia de las células donantes del MDS.
Introducción
Síndromes mielodisplásicos (MDS) representan un conjunto diverso de trastornos de la sangre clonales caracterizados por hematopoyesis ineficaz, evidencia morfológica de la displasia y una propensión para la transformación a leucemia mieloide aguda (AML)1,2 ,3,4. La hematopoyesis ineficaz se reconoce como una detención de la maduración en la médula ósea y los resultados en cytopenias de la sangre periférica a pesar de que la médula ósea hipercelular1,3. La incidencia de la MDS se ha ....
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Protocolo
Los animales procedimientos descritos en este artículo fueron aprobados por el Instituto Nacional del cáncer en el Comité de uso y cuidado de animales de Bethesda y conforme a las políticas dentro de la política de servicio de salud pública en cuidado humano y uso de animales de laboratorio, la Ley de bienestar animal y la guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio.
1. preparación de la célula
- Cosecha de la médula células nucleadas (BMNC)
- Utilizar sólo material estéril. Esterilizar instrumentos reutilizables mediante un autoclave de vapor. Compra de agujas, jeringas y artículos de plástico en recipientes estéril....
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Resultados
Nos muestran figuras representativas para obtener los resultados de varios experimentos. La figura 1 muestra una citometría de flujo representativo clasificación experimento. Durante la diferenciación Hematopoyética normal, como las células se ha comprometido a un linaje hematopoyético específico, adquieren marcadores de superficie celular definición de linaje y perder la posibilidad de auto renovación. Por lo tanto, en los ratones de tipo salvaje, auto-renov.......
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Discusión
Aunque MDS es un trastorno clonal de células madre hematopoyéticas, las MDS "tallo" o células inicia, no se han caracterizado. Previamente demostramos que MDS puede ser transplantables a los ratones WT con la médula ósea de ratones NHD13 de HSCT, caracterizado por anemia macrocítica, leucopenia, neutropenia y evidencia morfológica de displasia15. Además, ensayos de repoblación competitiva identifican una ventaja del crecimiento de las células de la médula NHD13 MDS. Tomados en conjunto, estos resu.......
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Divulgaciones
No tenemos nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por el programa de investigación Intramural del Instituto Nacional del cáncer, institutos nacionales de salud (números ZIA SC 010378 y BC 010983 la concesión).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubo de fondo redondo de 14 mL | de Falcon | 352057 | |
| Hank | Lonza | 10-527F | |
| Anticuerpo anti-CD45.2 | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
| Jeringa de 3 mL | Monoject | 8881513934 | |
| Aguja de 27 G | BD | 305109 | |
| Aguja de 20 G | BD | ||
| Cóctel Lineage | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
| Anticuerpos anti-Biotina | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
| Jeringa de 1 mL | Excelint | 26027 | jeringa de insulina |
| Thermo Fisher Scientific | E70001901 | ||
| Máquina FACS | Cytec | FACScan | 2 láseres, 5 detectores |
| de color Instrumento de clasificación FACS | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 láseres, 23 parámetros, 6 Clasificación de población simultáneamente |
| Yoduro de propidio | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Irradiador Gamma | Best Theratronics | Gammacell 40 | |
| Tubo de extracción de sangre | RAM scientific | 76011 | |
| Destinatario ratones | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 ratones | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colonia mantenida en NIH |
| 5 mL tubo de fondo redondo | Falcon | 352058 |
Referencias
- Corey, S. J., et al. Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases. Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).
- Garcia-Manero, G. Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification an....
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Reimpresiones y permisos
