Artículo de método

Evaluación integral de la efectividad y seguridad de la entrega de drogas orientada a Placenta utilizando tres métodos complementarios

DOI:

10.3791/58219

⸱

10 de septiembre de 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences, 2College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, 3Key Laboratory of Chemical Engineering Process and Technology for High-efficiency Conversion, College of Chemistry and Material Sciences, Heilongjiang University, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Wayne State University School of Medicine

En este artículo

Resumen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Se describe un sistema que utiliza tres métodos para evaluar la seguridad y eficacia de la administración de fármacos dirigidos a placenta: en vivo la proyección de imagen para controlar la acumulación de nanopartículas, ultrasonido de alta frecuencia para supervisar el desarrollo placentario y fetal y HPLC para cuantificar la entrega de la droga al tejido.

Resumen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

No hay tratamientos eficaces existen para complicaciones del embarazo asociada a placenta, y desarrollo de estrategias para la entrega específica de drogas a la placenta y reducir al mínimo efectos secundarios fetales y maternos sigue siendo desafiante. Portadores de nanopartículas dirigidas ofrecen nuevas oportunidades para tratar los trastornos placentarios. Recientemente hemos demostrado que un péptido sintético placentaria condroitín sulfato A enlace (plCSA-BP) podría utilizarse para guiar las nanopartículas para administrar medicamentos a la placenta. En este protocolo, describimos en detalle un sistema para evaluar la eficacia del fármaco a la placenta por plCSA-BP que emplea tres métodos separados en combinación: en vivo la proyección de imagen, ultrasonido de alta frecuencia (HFUS) y alto rendimiento cromatografía líquida (HPLC). En vivo imagen, guiada por la BP plCSA nanopartículas fueron visualizadas en las placentas de animales vivos, mientras que HFUS y HPLC demostraron que las nanopartículas conjugadas de BP plCSA eficientemente y específicamente entregan metotrexato a la placenta. Por lo tanto, una combinación de estos métodos puede utilizarse como una herramienta eficaz para la entrega específica de drogas a la placenta y el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento para varias complicaciones del embarazo.

Introducción

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Complicaciones del embarazo mediada por la placenta, incluyendo la preeclampsia, la pérdida del embarazo, desprendimiento prematuro de placenta y pequeño edad gestacional (SGA), son comunes y conducen a importante morbilidad fetal y materna y mortalidad1,2, 3y muy pocos fármacos han demostrado para ser eficaces para tratar el embarazo trastornos de4,5. El desarrollo de estrategias para la administración de fármacos dirigidos a placenta más selectivo y seguro durante el embarazo sigue siendo un desafío en la farmacote....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos los experimentos de ratón siguen estrictamente los protocolos (SIAT-IRB-160520-YYS-FXJ-A0232) aprobados por el cuidado Animal y uso Comité de Shenzhen institutos de tecnología avanzada, Academia China de Ciencias.

1. síntesis de nanopartículas de polímero lipídico dirigidos A condroitín sulfato placentario

  1. Sintetizan nanopartículas de polímeros de lípidos cargados de MTX y ICG (MNPs y INPs respectivamente) y de nanopartículas conjugadas de BP plCSA (plCSA MNPs y INPs plCSA) como se describe en detallan en otra parte18.

2. in vivo de fluorescencia imágenes

<....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En este manuscrito, conjugado de BP plCSA nanopartículas cargadas con MTX (plCSA-MNPs) o ICG (plCSA-INPs) fueron inyectadas por vía intravenosa en ratones embarazadas. En vivo la proyección de imagen reveló señales fuertes de ICG en la región del útero 30 min después de la inyección plCSA-INP. El INPs se localizaron principalmente en la región del hígado y del bazo (figura 1A). A las 48 h después de la inyección plCSA-INP, sacrificaron ratones embara.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En este manuscrito, describiremos un sistema tres-método de determinación de nanopartículas guiadas por BP plCSA sean una herramienta eficaz para dirigir la entrega de medicamentos a la placenta. El uso de en vivo para monitorear la señal infrarroja de ICG fluorescente la proyección de imagen confirmaron la especificidad dirigida a placentario de plCSA verificada usando HFUS y HPLC, hemos demostrado que las nanopartículas conjugadas de BP plCSA pueden administrar MTX solamente a la células de la placenta, no al .......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

X.F. y B.Z. son inventores en la solicitud de patente PCT/CN2017/108646 enviado por SIAT que cubre un método de entrega de drogas específicas de la placenta y su aplicación. Otros autores declaran que no tienen intereses que compiten.

Agradecimientos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias naturales (81771617) y de la Ciencia Natural Fundación de la provincia de Guangdong (2016A030313178) otorgado a X.F.; una subvención de Shenzhen básico investigación del fondo (JCYJ20170413165233512) concedido a X.F; Eunice Kennedy Shriver Instituto Nacional de salud infantil y desarrollo humano de los institutos nacionales de salud bajo la concesión número R01HD088549 (el contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representan necesariamente el funcionario vistas de los institutos nacionales de salud) a N.N.

....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Ratones CD-1Beijing Vital River201Hembra (8-12 semanas)
Jeringa de insulinaBD328421para inyección intravenosa
Etanol absolutoSinopharm 10009218 químicospara la síntesis de nanopartículas
Lecitina de sojaAvanti Polar Lipids441601para la síntesis de nanopartículas
DSPE-PEG-COOHAvanti Lípidos polares880125para la síntesis de nanopartículas
PLGASigma-Aldrich719897para la síntesis de nanopartículas
Procesador ultrasónicoSonicsVCX130para la síntesis de nanopartículas
Metotrexato (MTX)Sigma-AldrichV900324para la síntesis de nanopartículas
Verde de indocianina (ICG)Sigma-Aldrich1340009para in vivo
solución salina tamponada con fosfato (PBS)HycloneSH30028.01
Instrumento de espectro IVISPerkin Elmerpara la obtención de imágenes in vivo
Gel de transmisión de ultrasonidosGuanggongZC4252418para la obtención de imágenes por ultrasonido
IsofluranoLunan PharmaceuticalI0040para mantener la anestesia
Crema depilatoriaNairTMG001para la extracción de pelo
Transductor de 40 MHzVisualSonicsMS550Spara ecografía
Sistema de imagen por ultrasonido de alta frecuenciaVisualSonicsVevo2100para ecografía
AvertinSigma-AldrichT48402para anestesia
Bomba de jeringaMindraySK-500IIIpara perfusión cardíaca
Solución salina al 0,9%MeilunbioMA0083para perfusión cardíaca
1,5 mL Tubos de polipropilenoAXYGENMCT-150-C-80
° C congeladorThermo Fisher Scientific88600V
CentrígulaCenceH1650R Ácido
perclóricoSigma-Aldrich311421para precipitar proteínas
HomogeneizadorSCIENTZSCIENTZ-48para homogeneizar tejido
Filtro de jeringa (0.45 μ m)MilliporeSLHV033RS01
Hidróxido de sodioSinopharm Chemical10019763para la resolución
de viales de HPLCAguas670650620para HPLC
Fosfato de potasio dibásicoSinopharm Chemical20032117para HPLC
AcetonitriloJKchemical932537para HPLC
Aguas de columna C18186003966para HPLC
Sistema de HPLCShimadzupara HPLC
MTX

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rodger, M. A., et al. The Association of Factor V Leiden and Prothrombin Gene Mutation and Placenta-Mediated Pregnancy Complications: A Systematic Review and Meta-analysis of Prospective Cohort Studies. PLOS Medicine. 7 (6), e1000292(2010).
  2. Rodger, M. A., et al.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE

Solicitar permiso

Etiquetas

Sistema de transporte de nanopart culasimagen in vivoultrasonido de alta frecuenciacromatograf a l quida de alta resoluci nadministraci n de metotrexatouni n al condroit n sulfato placentariorat n en el d a embrionario 14 5desarrollo placentario fetalprotocolo de inyecci n de nanopart culas

Artículos relacionados