El acceso de nutrientes, metabolitos de la microbiota y medicamentos para la circulación es controlado por la barrera intestinal-sangre (GBB). Se describe un método directo para medir la GBB permeabilidad en vivo, que, en contraste con métodos indirectos utilizados, prácticamente no es afectado por las funciones de hígado y riñón.
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Artículo de método
Un método In Vivo para evaluar la barrera intestinal-sangre y hígado metabolismo de la Microbiota de productos
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Resumen
Resumen
La barrera intestinal-sangre (GBB) controla el paso de nutrientes, metabolitos bacterianos y medicamentos desde la luz intestinal al torrente sanguíneo. La integridad GBB se altera en enfermedades gastrointestinales, cardiovasculares y metabólicas, que pueden resultar de más fácil acceso de compuestos biológicamente activos, tales como metabolitos bacterianos de tripa, al torrente sanguíneo. Así, la permeabilidad de la GBB puede ser un marcador de enfermedades intestinales y extraintestinales. Además, la creciente penetración de metabolitos bacterianos puede afectar el funcionamiento de todo el organismo.
Métodos comúnmente utilizados para el estudio de la permeabilidad GBB son realizados ex vivo. La exactitud de estos métodos es limitada, ya que el funcionamiento de la GBB depende del flujo sanguíneo intestinal. Por otra parte, métodos utilizados en vivo pueden estar sesgados por el hígado y el funcionamiento del riñón, como los métodos que se basan en la evaluación de la orina o / y periféricos de la sangre las concentraciones de marcadores exógenos. Aquí, presentamos una medida directa de la permeabilidad de la GBB en ratas utilizando un método en vivo basado en muestreo, de la sangre portal que preserva el flujo sanguíneo intestinal y prácticamente no es afectada por la función de hígado y riñón.
Catéteres de poliuretano se insertan en la vena porta y vena cava inferior justo por encima de la hepático venas confluencia. Sangre se muestrea al inicio y después de la administración de un marcador seleccionado en una parte deseada del tracto gastrointestinal. Aquí, presentamos varias aplicaciones del método incluyendo (1) evaluación de la permeabilidad del colon a TMA, un metabolito bacteriano intestinal (2) evaluación de la depuración hepática de TMA y (3) evaluación de un camino de sangre de sangre-hígado-periférico de gut-portal de tripa ácidos de grasos de cadena corta derivados de bacterias. Además, el protocolo puede utilizarse también para el seguimiento de la absorción intestinal y metabolismo hepático de drogas o para las mediciones de la presión portal.
Introducción
La barrera intestinal-sangre (GBB), también conocida como la barrera intestinal, es un sistema complejo de múltiples capas que separa el lumen del intestino al torrente sanguíneo con el fin de limitar el paso de los dañinos compuestos permitiendo la absorción de nutrientes1. Consta de tres capas principales: la capa de moco, epitelio y lámina propia.
Numerosos factores pueden afectar la integridad y función GBB2. Se ha demostrado que GBB se disturba en enfermedades gastrointestinales y extraintestinales, incluyendo enfermedades cardiovasculares y metabólicas3, que puede....
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Protocolo
Los experimentos se realizaron en ratas Wistar Kyoto macho según UE de la Directiva 2010/63 sobre la protección de los animales utilizados para fines científicos y fueron aprobados por el Comité Local de Bioética en Varsovia.
1. inserción de la línea de administración Intraintestinal
Nota: Aquí proponemos intracolonic la administración de un marcador usando un catéter. Puede ser modificada por la administración oral o por sonda nasogástrica a distintos niveles del tracto digestivo por ejemplo, estómago o duodeno. Recuerde usar ropa quirúrgica desechable, incluyendo vestido quirúrgico, capu....
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Resultados
Con éxito hemos medido la distancia de permeabilidad y hígado GBB de TMA en ratas. Hemos demostrado que ratas hipertensas tienen una permeabilidad mayor colon a TMA en comparación con las ratas normotensas (figura 2)4. En otro estudio se encontró que la alta ingesta de sal no afecta a la separación del hígado y permeabilidad GBB de TMA (figura 3)14.
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Discusión
El descrito directo, en vivo, método de medición de la permeabilidad GBB mantiene condiciones de closetophysiological en el sistema gastrointestinal (conserva el flujo de sangre intestinal) y prácticamente no está influenciado por la función de hígado y riñón.
El paso crítico de esta técnica es la inserción del catéter portal. Esto debe hacerse con suavidad y contundencia a la vez. Un sangrado leve y corto puede ocurrir de la punción la ejecución correcta de la vena porta; sin embargo.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
El trabajo es apoyado por el Ministerio de ciencia y enseñanza superior de Polonia, diamante subsidio no: DI2017 009247.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Diámetro exterior de la aguja: 9 mm | Becton Dickinson S.A. | 301300 | |
| Catéter de polietileno ID: 0.025", OD: 0.040" | Materias Primas Científicas, Inc. | #BB520-40 | |
| Catéter de polietileno ID: 0.012", OD: 0.025" | Materias Primas Científicas, Inc. | #BB520-25 | |
| Tubo C-Flex, blanco opaco 1/50 "ID x 1/12 " OD | Cole-Parmer Instrument Co. | 06424-59 | |
| Catéter Foley pediátrico (tamaño 10F u 8F) | Sigmed | 0000 80305 | |
| Ligaduras quirúrgicas 3/0 | Yavo Sp. Z o.o. | P48JE | |
| Suturas quirúrgicas reabsorbibles - Polyglactine 910 4/0 | KRUUSE Polska Sp. Zo.o. | ||
| Pegamento para tejidos - Loctite 454Adhesivo de cianoacrilato | Loctite | ||
| Povidona yodada | EGIS Pharmaceuticals PLC | 4449 11 | |
| Heparina - Heparinio WZF | WZF Polfa S.A. | 02BK0417 | Diluir 10 veces con solución salina fisiológica |
| Glicerina 86% | Laboratorium Farmaceutyczne Avena | 5.90999E+12 | Sirve como lubricante en el cateterismo de colon |
| Xilocaína 2% | AstraZenca | ||
| Uretano | Sigma-Aldrich (Merck) | U2500-500G | |
| Solución de trimetilamina 45% | Sigma-Aldrich (Merck) | 92262-1L | |
| Jeringas 2 mL | B.Braun Melsungen AG | 4606027V | |
| Solución salina 250 mL | Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o. | 15LL707WL | |
| Tijeras quirúrgicas, rectas, longitud 115 mm, 4 1/2" puntas romas | Braun | NS-010-115-PKM | |
| Pinzas arteriales tipo Micro-Adson dobladas, longitud 140 mm 5 1/2 | Braun | KN-008-140-ZMK | |
| Pinzas anatómicas, longitud 95 mm, 3 3/4" afiladas 0.7x0.55 | Braun | PO-001-007-ZMK | |
| Micro Tijeras tipo Vannas, recta, longitud 85 mm, 3 3/8 " la longitud de las cuchillas 6 mm | Braun | NO-010-085-PMK | |
| Pinzas para toallas tipo Backhouse, longitud 130 mm, 5 1/8" | Braun | HO-128-130-PMK | |
| Portaagujas, longitud 150 mm, 6" t=0.4 1/2 | Braun | IM-927-150-PZMK | |
| Tijeras delicadas, longitud 110 mm, rectas, 4 3/8" afiladas; | Pinza anatómica Braun | NO-052-110-PMK | |
| , longitud 95 mm, 3 3/4" afilada | Braun | PO-022-001-PMK |
Referencias
- Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease. Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).
- Keita, A. V., Soderholm, J. D.
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Reimpresiones y permisos
