Por la presente presentamos un protocolo para medir al lado de la cama la actividad endotoxina de muestras de sangre entera humana. El ensayo actividad de la endotoxina es una prueba simple de realizar y puede ser un biomarcador útil en pacientes en estado crítico con sepsis.
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Artículo de método
Ensayo de actividad de endotoxinas para la detección de endotoxemia de sangre completa en pacientes con enfermedades críticas
En este artículo
Resumen
Resumen
El lipopolisacárido, también conocido como endotoxina, es un componente fundamental de las bacterias gramnegativas y desempeña un papel crucial en el desarrollo de la sepsis y el shock séptico. La identificación temprana de un proceso infeccioso que está evolucionando rápidamente a una enfermedad crítica podría provocar un tratamiento más rápido e intensivo, lo que podría conducir a mejores resultados para los pacientes. El ensayo actividad de la endotoxina (EA) se puede utilizar junto a la cama como un biomarcador fiable de la endotoxemia sistémica. Se ha demostrado repetidamente que la detección de niveles elevados de actividad de la endotoxina está asociada con un aumento de la gravedad de la enfermedad en pacientes con sepsis y shock séptico. El ensayo es rápido y fácil de realizar. Brevemente, después del muestreo, una alícuota de sangre entera se mezcla con un anticuerpo anti-endotoxina y con LPS añadido. La actividad de la endotoxina se mide como la ráfaga oxidativa relativa de neutrófilos cebados detectados por quimioluminiscencia. La salida del ensayo se expresa en una escala de 0 (ausente) a 1 (máxima) y se clasifica como "baja" (<0,4 unidades), "intermedia" (0,4–0,59 unidades) o "alta" (0,6 unidades). La metodología detallada y los fundamentos para la implementación del ensayo del EA se informan en este manuscrito.
Introducción
El Lipopolisacárido (LPS), también conocido como endotoxina, es un componente clave de la estructura de la membrana de las bacterias Gram-negativas (GN). Constituye alrededor del 10% de la pared celular, siendo vital para la integridad de la membrana externa y la homeostasis. Además, es un potente activador del huéspedsistema inmune innato 1,2.
La exposición in vitro de células innatas del sistema inmunitario a LPS conduce a cambios en la expresión de múltiples genes3. La administración de cantidades muy pequeñas de LPS en voluntarios humanos sanos desencaden....
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Protocolo
El protocolo se lleva a cabo de acuerdo con las directrices institucionales relativas al manejo de bioespecímenes humanos y siguiendo los procedimientos operativos estándar actuales de nuestro laboratorio clínico. El uso de datos de EA e información clínica de pacientes que se están probando sigue las directrices del comité de ética de investigación humana de nuestra institución.
1. Contenidos del equipo de laboratorio y del kit de ensayo
- Almacene el kit de EA a 2-8 oC cuando no esté en uso.
- Cada prueba de EA consta de 5 tipos diferentes de tubos; utilizar cada uno para una parte diferente de la prueba (ver secc....
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Resultados
Un hombre de 72 años fue ingresado en el Departamento de Emergencias (ED) de un hospital urbano académico. Unos días antes había presentado a su médico de atención primaria quejándose de ardor al orinar. Se recomendó una terapia de curso corto con fosfomicina oral. Su historia clínica incluyó hipertensión, diabetes tipo 2 sin complicaciones e hiperplasia prostática benigna. Sus medicamentos incluían enalapril, atorvastatina, tamsulosina y metformina.
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Discusión
El shock séptico todavía hoy en día se asocia con una mortalidad de hasta el 40%, aunque esta tasa varía según los informes considerados16. La necesidad de biomarcadores novedosos y mejores es defendida por la mayoría de los expertos en los campos con el fin de ayudar a los médicos en el diagnóstico temprano, mejor manejo, y pronóstico de pacientes con shock séptico6.
Realizar una prueba de EA no requiere conocimientos técnicos previos ni equipos.......
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Divulgaciones
Estor SpA cubrió el costo de la cuota de publicación y producción de video de la revista. Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a Paolo Bragano y Lisa Mathiasen, Ph.D. por su revisión de la metodología del protocolo de ensayo. Dario Winterton, MD proporcionó una ayuda sustancial para revisar el manuscrito para el dominio del idioma inglés.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Kit | EAA Spectral Medical Inc. | Paquete EAAST-20 | con 20 pruebas + 1 control de calidad |
| Smart Line TL | Berthold | EAASL | Luminómetro |
| Agitador de incubadora | GRANT | ES-20 | Mini-incubadora |
| Vortexer | VWR | 444-2790 | Instrumento de vórtice |
Referencias
- Akira, S., Takeda, K. Toll-like receptor signalling. Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).
- Takeda, K. Evolution and integration of innate immune recognition systems: the Toll-like receptors. Journal of Endotoxin Research. 11 (1....
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Reimpresiones y permisos
