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Artículo de método

Novedoso proceso para la impresión 3D Decellularized Matrices

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DOI:

10.3791/58720

7 de enero de 2019

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe la producción de filamento de policaprolactona (PCL) con microesferas de ácido (PLA) de poliláctico incrustados que contienen matrices decellularized (DM) para la impresión 3D de ingeniería construcciones de tejidos estructurales.

Resumen

Bioprinting 3D pretende crear andamios personalizados que son biológicamente activos y acomodar el tamaño y la geometría. Una red troncal de termoplástica puede proporcionar estabilidad mecánica similar al tejido nativo mientras que agentes biológicos ofrecen composición señales a las células progenitoras, llevando a su migración, proliferación y diferenciación para reconstituir los tejidos originales / órganos1,2. Desafortunadamente, muchos compatible con impresión 3D, polímeros bioabsorbibles (como el ácido poliláctico, PLA) son impresos en las temperaturas de 210 ° C o superior - temperaturas que son perjudiciales para los productos biológicos. Por otro lado, la policaprolactona (PCL), un tipo diferente de poliester, es un biorreabsorbibles, 3D material imprimible que tiene una temperatura más suave de impresión de 65 ° C. Por lo tanto, se planteó la hipótesis eso matriz extracelular decellularized (DM) contenida dentro de una barrera térmica protectora del PLA puede ser impreso en filamento PCL y permanecer en su conformación funcional. En este trabajo, osteocondrales reparación fue la aplicación para que la hipótesis fue probada. Como tal, cartílago porcino era decellularized y encapsulado en microesferas ácidas sobre poliláctico (PLA) que luego fueron sacadas con policaprolactona (PCL) en filamento para producir construcciones 3D mediante fundido deposición modelado. Las construcciones con o sin las microesferas (PLA-DM/PCL y PCL(-), respectivamente) se evaluaron las diferencias en características superficiales.

Introducción

Actuales técnicas de ingeniería de tejidos para aplicaciones clínicas como la reconstrucción de hueso, cartílago, tendón y ligamento usan auto y aloinjertos para reparar el tejido dañado. Cada una de estas técnicas se realiza habitualmente como un "gold standard" en la práctica clínica primera cosecha el tejido donante de la paciente o de un partido cadavérico, y luego colocando el tejido del donante en el sitio de defecto2. Sin embargo, estas estrategias están limitadas por la morbosidad del sitio donante, escasez de sitio donante para defectos grandes, riesgo de infección y dificultad para encontrar los injertos que coincidan con la geometría....

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Protocolo

1. obtención y procesamiento de microesferas

  1. Producir microesferas con la matriz deseada encapsulado (PLA-DM)2.
    Nota: Es imperativo que las microesferas son de tamaño uniforme. Por esta razón, el tamizado previo utilizar microesferas es esencial. Aunque encapsulado y descelularización de matriz han sido detallados en anteriores publicaciones2, sigue un breve resumen del proceso.
    1. En primer lugar, la cosecha cartílago enchufes de porcinos extremidades traseras. Decellularize del cartílago en una serie de lavados con 0.05% tripsina/0,5 mm tetrasodium dihidratada del ácido (EDTA), Dulbecco de modificado ....

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Resultados

Después de tamizado, microesferas deben aparecer uniforme y estar libre de agregados. Bajo SEM, las microesferas tamizadas pueden tener pequeños poros en su superficie, pero de lo contrario será esférica y lisa, como se muestra en la figura 1. Todos los filamentos extruidos deben ser de diámetro uniforme y de sección circular. Un filamento que contiene microesferas (PLA-DM/PCL) tendrá un poco más mate acabado mientras que sólo un PCL (filamento PCL(-)) sería .......

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Discusión

Ambos decellularized matrices y 3D impreso PCL andamios han demostrado independientemente para permitir adherencia y proliferación de las células, validar su uso para osteocondral reparacion10,11,12. El uso de decellularized matriz de enfoques de ingeniería para la reparación de los tejidos ha sido un tema de gran interés y éxito en los últimos años2,3,

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este proyecto fue parcialmente financiado por una beca de la sociedad de Ortopedia Pediátrica de América del norte (POSNA) y los institutos nacionales de salud otorgar NIBIB R21EB025378-01 (beca de investigación de Bioingeniería exploratorio).

....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
TamizadoraHaver & Boecker TylerRo-Tap RX 29-E Tamiz
puro 90 mmmFisherbrand170328156n.º 170
Tamiz 53 mmmFisherbrand162513588n.º 270
Tamiz 106 mmmFisherbrand162018121n.º 140
Recubridor por pulverización catódicaLeican/a
Microscopio electrónico de barridoHitachi, EE. UU.n/a
Filabot EX2Filabot.com FB00061
Filabot SpoolerFilabot.comFB00073
CAPA 6506Perstorp24980-41-4
Solución salina tamponada con fosfato, PBSGibco10010023
6" FanComfort Zone, Amazonn/a
Baño de agua ultrasónicoCole ParmerSK-08895-13
DreamerFlashForgen/a
Mezclador de tamborHecho a medidan/aEquipo similar: https://www.coleparmer.com/i/argos-technologies-flexiroll-digital-tube-roller-shaker-120-vac/0439744?PubID=UX&persist=true&ip=
no& gclid=CjwKCAjw-
dXaBRAEEiwAbwCi5khGDMz0
dTjsraEsBGfhMEH7ytx
LQWGUPNgUJYQ1p3vj_yxkYoI_
ixoC9GwQAvD_BwE
Micro BalanceMettler Toledo, Fisher Scientific01-913-851
Simplify3DSimplify3Dn/a
SolidWorksSolidWorksn/a
MicroesferasDe producción propia, ver simultáneamente Presentación
Fosfato de p-nitrofenilo, sal disódica, hexahidratoMillipore4876-5GM
Fosfatasa, alcalinaRoche Diagnostics GmbH10 713 023 001
Lector de absorbanciaTecanSunrise
Tampón Tris-HClSigma-AldrichT6455-100ML
Agitador calefactadoNuevo Brunswick ScientificExcella E24
de JoVE

Referencias

  1. Hutchmaker, D., Teoh, S., Zein, I., Ng, K. W., Schantz, J. -T., Leahy, J. C. Design and Fabrication of a 3D Scaffold for Tissue Engineering Bone. Synthetic Bioabsorbable Polymers and Implants. 15 (2), 845-847 (1988).
  2. Ghosh, P., Gruber, S. M. S., Lin, C. -Y., Whitlock, P. Microspheres containing decellularized cartilage induce chondrogenesis and remain functional after incorporation within a poly(caprolactone) filament useful for fabricating a 3D scaffold. Biofabrication. , (201....

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

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