Durante la infección, la Listeria monocytogenes es capaz de atravesar la barrera hemato - encefálica para colonizar el cerebro. En este protocolo, se demuestra cómo evaluar la colonización bacteriana de los órganos después de la infección de ratones. Se proporciona un procedimiento para realizar la perfusión de órganos enteros para determinación específica de números bacterianos en la parenquimia del cerebro.
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Artículo de método
Listeria monocytogenes Infección del cerebro
En este artículo
Resumen
Resumen
Listeria monocytogenes es un patógeno bacteriano intracelular que se asocia frecuentemente a infecciones transmitidas por los alimentos. La capacidad de L. monocytogenes para cruzar la barrera blood - brain (BBB) es acerca de como puede llevar a la peligrosa meningitis y encefalitis. El BBB protege el microambiente de cerebro de varios metabolitos tóxicos y patógenos microbianos que se encuentran en la sangre después de la infección y por lo tanto apoya la homeostasis cerebral. Los mecanismos por el que L. monocytogenes presentes en el torrente sanguíneo cruzar el BBB para causar cerebro infecciones no son completamente entendidas y también hay una falta de un sistema robusto modelo para estudiar el cerebro de infecciones causadas por L. monocytogenes. Aquí, presentamos un modelo de infección del ratón simple para determinar si las bacterias han cruzado el BBB y para cuantificar la carga de bacterias que han colonizado el cerebro en vivo. En este método, por vía intravenosa estaban infectados con L. monocytogenes y animales fueron sacrificados humanitariamente por la exposición a CO2 seguido por dislocación cervical. La perfusión cardíaca de los animales fue realizada antes de la cosecha de órganos infectados. Se extrajo sangre antes de la perfusión y el número de bacterias por órgano o mL de sangre se determinó mediante diluciones de los homogenados en placas de agar sangre o el órgano de la galjanoplastia y contando el número de colonias formadas. Este método puede utilizarse para el estudio de las interacciones receptor-ligando novela que mejoran la infección del cerebro por L. monocytogenes y pueden ser fácilmente adaptado para el estudio de múltiples patógenos bacterianos.
Introducción
La bacteria gram-positiva Listeria monocytogenes es un patógeno intracelular facultativo y uno de los patógenos más mortales transmitidas por los alimentos en todo el mundo. Ingestión de alimentos de L. monocytogenes contaminados puede provocar listeriosis en humanos, una enfermedad invasiva grave dirigidos a mujeres en su mayoría embarazadas, recién nacidos, los ancianos y immunocompromised los individuos1. L. monocytogenes es una de las principales causas de muerte por un patógeno transmitidas por los alimentos en los Estados Unidos y tasas de mortalidad caso de listeriosis son tan altas como 20-30%, el más alto de ....
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Protocolo
Todos los animales deben ser mantenidos y con máximo cuidado para minimizar el malestar durante el curso del procedimiento. El procedimiento debe llevarse a cabo en cumplimiento de la atención institucional de Animal y Comité de uso y todas las leyes federales, estatales y locales. También tenga en cuenta que los experimentos de laboratorio deben ser realizadas de conformidad con las directrices de nivel 2 de bioseguridad.
1. crecimiento de L. monocytogenes para estudios de infección del ratón
- Autoclave de 500 mL de medio de agar cerebro corazón infusión (BHI) en un matraz Erlenmeyer de 1 L para preparar placas d....
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Resultados
El cerebro es altamente vascularizado y L. monocytogenes se sabe para infectar a los tipos de células presentes en la sangre3,13. El protocolo descrito se utiliza para demostrar la capacidad de L. monocytogenes para cruzar la barrera blood - brain (BBB) conduce a la infección del cerebro en ratones. Para determinar si las bacterias han cruzado el BBB en vivo, se realiza la perfusión de sangre en el ratón.......
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Discusión
L. monocytogenes es capaz de causar meningoencefalitis mortales en seres humanos. Estudios previos han demostrado la capacidad de las bacterias para cruzar la barrera blood-brain (BBB) y para colonizar el cerebro. Se han propuesto tres vías de invasión del cerebro durante la infección: directa penetración del BBB por bacterias, stealth transporte por bacterias contenidas dentro de las células mononucleares3y la migración axonal por las cepas de L. monocytogenes causantes de rhomb.......
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Divulgaciones
Los autores no declaran a intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por el servicio de salud pública de los Estados Unidos otorgar AI103806 de los institutos nacionales de salud.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cerebro Corazón Medios de infusión | Becton Dickinson | 237200 | |
| Sulfato de estreptomicina | Amresco | 0382-50G | |
| Placas de Petri | VWR | 25384-342 | |
| Glicerol | VWR | 97062-832 | |
| IKA T18 ULTRA-TURRAX Homogeneizador Básico | IKA | 3352109 | Modelo: T18BS1 |
| Espectrofotómetro | Beckman Coulter | DU 800 series | |
| ratones BALB/c | Jackson Laboratory | Modelo #000651 | |
| Jeringas de 1 mL | Becton Dickinson | 309659 | |
| agujas de 26 G | Becton Dickinson | 305115 | |
| agujas de mariposa de 21 g | Becton Dickinson | 367281 | |
| Ácido etilendiaminotetraacético | Sigma-Aldrich | 60004 | |
| Tubos cónicos de 15 mL | VWR | 21008-918 | |
| Tubos de ensayo de fondo redondo | VWR | 60819-546 | |
| Solución salina tamponada con fosfato | Corning | 46-013-CM | |
| Espátula de acero inoxidable | VWR | 82027-520 | |
| Tijeras de acero inoxidable (6,5 pulgadas) | VWR | 82027-592 | |
| Tijeras de acero inoxidable (4,5 pulgadas) | VWR | 82027-578 | |
| Pinzas romas de acero inoxidable (4,5 pulgadas) | VWR | 82027-440 | |
| Pinza de punta fina de acero inoxidable (6 pulgadas) | VWR | 82027-406 |
Referencias
- Radoshevich, L., Cossart, P. Listeria monocytogenes: towards a complete picture of its physiology and pathogenesis. Nature Reviews Microbiology. 16 (1), 32-46 (2018).
- de Noordhout, C. M., et al. The global burden of....
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Reimpresiones y permisos
